李立紀(jì)，張風(fēng)雷，鄒雁寧，李秀芳

(1.云南省昆明市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，云南 昆明 650011 2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

傷風(fēng)感冒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李立紀(jì)1，張風(fēng)雷1，鄒雁寧1，李秀芳2

(1.云南省昆明市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，云南 昆明 650011 2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

目的 建立傷風(fēng)感冒顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用HPLC測(cè)定苦杏仁苷的含量，薄層色譜法TLC鑒別方中的白芷、浙貝母。結(jié)果 定量方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確。苦杏仁苷在0.072～5μg呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：y=0.8824X+1.0526，R2=1；苦杏仁苷平均回收率101.7%，RSD 2.85%(n=6)。TLC鑒別專屬性強(qiáng)，無(wú)干擾。結(jié)論 本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確、可有效的控制傷風(fēng)感冒顆粒的質(zhì)量。

風(fēng)寒感冒顆粒；HPLC，TLC；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

傷風(fēng)感冒顆粒由白芷、桔梗、浙貝母、苦杏仁、防風(fēng)、陳皮、羌活、紫蘇葉、荊芥、薄荷油等10味中藥組成。主要功效散風(fēng)寒，發(fā)微汗。用于傷風(fēng)流涕，咳嗽，鼻塞，頭痛癥狀。本方證乃由外感風(fēng)寒所致。治宜散風(fēng)寒、發(fā)微汗。方中重用防風(fēng)祛風(fēng)解表，勝濕止痛；羌活解表散寒，祛風(fēng)勝濕；還重用荊芥子祛風(fēng)解表共為君藥。浙貝母清熱化痰，散結(jié)消痛；桔梗宣肺解毒療咽；紫蘇葉降氣化痰，止咳平喘；苦杏仁止咳平喘共為臣藥。陳皮理氣健脾，燥濕化痰；白芷祛風(fēng)勝濕；薄荷油疏散風(fēng)熱，舒肝行氣，清理頭目共為佐使藥。全藥合用，可共取散風(fēng)寒，解表發(fā)微汗，利咽之功效。

原工藝劑型為沖劑，每塊含糖量高達(dá)9 g，不利于藥效的發(fā)揮，在原工藝的基礎(chǔ)上，探索低糖顆粒工藝，共生產(chǎn)9個(gè)批次。工藝穩(wěn)定，顆粒成型好，在此基礎(chǔ)上，對(duì)其質(zhì)量控制進(jìn)行研究，傷風(fēng)感冒顆粒為已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)藥品(國(guó)藥準(zhǔn)字Z22023527)的注冊(cè)[1]，原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下只有沖劑通則檢查項(xiàng)，為了保證藥品質(zhì)量與療效，特制定此標(biāo)準(zhǔn)。本品為10味藥的復(fù)方制劑，其中5味藥材僅提取揮發(fā)油，含量測(cè)定較為困難，根據(jù)處方組成和用量、對(duì)照品的提供情況及相關(guān)研究資料，選擇苦杏仁有效成分苦杏仁苷進(jìn)行了測(cè)定作為含量測(cè)定指標(biāo)。歐前胡素、貝母甲素為定性檢測(cè)指標(biāo)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：Agilent1100系列，包括G1314A紫外檢測(cè)器、G1316A柱溫箱、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1311A四元梯度泵、G1322A真空脫氣機(jī)、Agilent ChemStation工作站，色譜柱：Zorbax LiChrospher 100 RP-18(4.6×250mm，5μm)，島津2400紫外分光光度儀。

高純水采用蒸餾水過MILLIPORE Simplicity 185純水機(jī)制備；甲醇(HPLC)，乙醇(AR)。苦杏仁苷、歐前胡素、貝母甲素由中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)得。批號(hào)：110820-200511、110826-200409。

傷風(fēng)感冒顆粒、傷風(fēng)感冒顆?？瞻钻幮栽嚇樱鹤灾?。

2 化學(xué)成分的TLC鑒定

防風(fēng)、陳皮、羌活、紫蘇葉、荊芥僅提取揮發(fā)油，桔梗沒有對(duì)照藥材，苦杏仁苷做定量檢測(cè)，暫不做定性鑒別。白芷、桔梗、浙貝母、苦杏仁回流提取，本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了白芷、浙貝母薄層鑒別。

2.1 供試品及對(duì)照品溶液的鑒定

2.1.1 供試品溶液的制備 處方中10味藥，防風(fēng)、陳皮、羌活、紫蘇葉、荊芥分別提取揮發(fā)油，混合，備用；白芷與桔梗用75%乙醇加熱回流提取2次，合并提取液，濾過；浙貝母與苦杏仁，依次用95%乙醇、50%乙醇加熱回流各1次，合并提取液，濾過；以上濾液，分別回收乙醇，并減壓濃縮至干，然后混合粉碎成細(xì)粉，加薄荷油與備用的混合揮發(fā)油，再加蔗糖適量，拌勻，制粒，干燥即得。

2.1.2 供試藥的陰性 按2.1.1項(xiàng)下分別除去白芷、浙貝母、苦杏仁制得3個(gè)陰性對(duì)照。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備 分別取歐前胡素、貝母甲素對(duì)照品各1mg，分別加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對(duì)照品。

2.2 傷風(fēng)顆粒的TLC鑒定

2.2.1 白芷的薄層鑒別 取3批次樣品、陰性對(duì)照各15 g，加50 mL甲醇，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)? mL水溶解。將3批次樣品、陰性對(duì)照、對(duì)照品歐前胡素點(diǎn)于同于薄層板上，展開劑用石油醚：乙酸乙酯(5∶1)分別試驗(yàn)。展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視，供試品與對(duì)照品相同位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(見圖1A)。斑點(diǎn)分離清晰，層析效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，達(dá)到了薄層鑒別目的。

2.2.2 浙貝母的薄層 取白芷薄層鑒別項(xiàng)下的供試品溶液、陰性對(duì)照、及貝母甲素點(diǎn)于同一薄層板，展開劑氯仿∶甲醇∶氨水(10∶1∶飽和蒸氣)，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色斑點(diǎn)。經(jīng)陰性對(duì)照試驗(yàn)及三批樣品試驗(yàn)觀察，斑點(diǎn)分離清晰，層析效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，達(dá)到了薄層鑒別目的。(見圖1B)。

圖1 A.傷風(fēng)顆粒中歐前胡素的TLC；B.傷風(fēng)顆粒中貝母甲素的TLC

3 HPLC定量測(cè)定傷風(fēng)顆粒中的苦杏仁苷

3.1 含量測(cè)定方法學(xué)考察

3.1.1 色譜條件色譜柱 Zorbax LiChrospher 100 RP-18(4.6×250 mm，5μm)，流動(dòng)相甲醇∶水(20∶80)[2-3]；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；流速1.0 mL/min，結(jié)果表明，在此條件下傷風(fēng)顆粒中苦杏仁苷其他組分均能達(dá)到基線分離(見圖2C)，根據(jù)樣品的HPLC圖譜，測(cè)量苦杏仁苷峰的保留時(shí)間、半峰寬等，計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)均大于3000，苦杏仁苷峰計(jì)，理論板數(shù)應(yīng)大于3000。

3.1.2 分別精密稱取苦杏仁對(duì)照品1.80 mg，用1 mL甲醇溶解，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.1.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液1、2.5、5、10、15、20、25、30 μL按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積積分值(Atm*s)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，苦杏仁：y=0.8824X+1.0526，R2=1；結(jié)果表明苦杏仁進(jìn)樣量在0.072～5 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

3.1.3 精密度考察 精密吸取上述2種對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，苦杏仁苷5次測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別0.58%.

3.2 樣品的測(cè)定

3.2.1 供試品溶液的制備 準(zhǔn)確取1 g顆粒采用甲醇超聲提取20 min，過濾，定容至25 mL，備用。過濾至清亮，最后用微孔濾膜(0.5 μm)濾過。用于高效液相分析，供試品中苦杏仁與雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離。

圖2 對(duì)照品苦杏仁苷(A)，供試液(B)，陰性對(duì)照(C)

3.2.2 樣品測(cè)定 精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20ul，分別注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，取2次測(cè)定的平均值作為結(jié)果。

3.2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取顆粒1 g，共5份，按上述方法制成供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，苦杏仁5次測(cè)定值的RSD為0.9%。

3.2.4 加樣回收率 分別精密稱取已測(cè)知含量的樣品1 g，6份，研細(xì)，精密稱取，置具塞錐形瓶中，分別精密加入苦杏仁對(duì)照品6.6 mg(用甲醇水配制成0.66 mg/mL)，分別加入1.4、2.6、3.6 mL，再加入20 mL甲醇，以下按供試品溶液制備方法從，“超聲處理……”起，同方法操作。計(jì)算回收率。

表1 苦杏仁苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.2.5 樣品含量測(cè)定 見表2。

表2 傷風(fēng)顆粒樣品測(cè)定結(jié)果

10批樣品測(cè)定含量的平均值2.918(mg/g)，考慮不同植物來(lái)源含量的差異，及大規(guī)模生產(chǎn)提取率可能還會(huì)降低等因素，按10批平均值的80%計(jì)算為2.33(mg/g)，苦杏仁苷含量應(yīng)不低于2.33(mg/g)。

4 結(jié)果與討論

將傷風(fēng)沖劑劑型該為顆粒劑型是在工藝、質(zhì)量控制方面是可行，劑型改變后降低了患者的服糖量。有利于發(fā)揮藥物的療效。

方中重用防風(fēng)、荊芥子祛風(fēng)解表共為君藥。但工藝只提取其揮發(fā)油，他們的指標(biāo)成分無(wú)法檢測(cè)。

本實(shí)驗(yàn)考察了不同溶劑的提取率，分別用丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇超聲提取20min，丙酮、乙酸乙酯不能完全提取，乙醇提取雜質(zhì)較甲醇少，但不能完全提取。甲醇提取最充分，選用甲醇為提取溶劑。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第1冊(cè))[S].1998：45.

[2]中國(guó)藥典[S].(一部)2005：144.

[3]胡爽，袁丹，刁桂芬，等.苦杏仁藥材質(zhì)量評(píng)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2002，27(10)：735.

李立紀(jì)(1976-)，男，云南，研究方向：中藥藥理

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