李喆，張志強，祁鳴，張桂青

(1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆石河子832002;2石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院)

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)是指由于異乎尋常的威脅性或災(zāi)難性的心理創(chuàng)傷導(dǎo)致延遲出現(xiàn)和長期持續(xù)的精神障礙［1］。PTSD發(fā)病的潛伏期從幾周到數(shù)月不等(很少超過6個月)［2］。目前，臨床醫(yī)生主要依據(jù)病史、臨床表現(xiàn)作出診斷，還沒有一個明確的實驗室指標(biāo)來幫助診斷PTSD。有學(xué)者認(rèn)為，血液生物學(xué)標(biāo)志物檢測對于診斷PTSD具有潛在的價值，同時指出外周血單個核細(xì)胞p11 mRNA可作為PTSD的生物學(xué)標(biāo)志物來進(jìn)行研究［3］。2014年3～9月，我們觀察了PTSD患者p11 mRNA表達(dá)變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 PTSD患者19例(PTSD組)，男4例，女15例;經(jīng)歷創(chuàng)傷事件年齡25～65(46.68±14.05)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《國際精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)》(第10版)中的PTSD診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)臨床心理科醫(yī)生診斷確診;②年齡18歲以上，性別不限;③意識清楚、病情平穩(wěn)且愿意接受各類問卷、量表調(diào)查者;④至少半年內(nèi)未接受過免疫抑制劑及免疫增強劑治療;⑤創(chuàng)傷事件前無明顯軀體疾病異常;⑥征得受試者或其監(jiān)護(hù)人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):①嚴(yán)重心、腦、肝、腎疾病及其他嚴(yán)重的軀體疾病;②內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病，急、慢性感染者;③精神發(fā)育遲滯者;④懷孕、哺乳婦女;⑤有長期飲酒或藥物依賴史。經(jīng)歷創(chuàng)傷事件類型:喪親11例，車禍5例，被侮辱2例，目擊創(chuàng)傷事件1例。距創(chuàng)傷事件時間(0.49±0.79)a?；橐鰻顩r:已婚11例，未婚1例，離異1例，喪偶6例;受教育程度:9 a及以下5例，9 a以上14例。另選同期經(jīng)歷創(chuàng)傷事件但未發(fā)生PTSD的患者13例(非PTSD組)及健康體檢者19例(對照組)。

1.2 p11 mRNA檢測 ①外周血單個核細(xì)胞分離:早8:00～10:00空腹抽取肘靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝，等比例稀釋，以2 000 r/min離心20 min用以分離外周血單個核細(xì)胞;用PBS溶液洗滌1～2次，將得到的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至干凈無核酶EP管中，存入－80℃冰箱保存?zhèn)溆?。②總RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄:采用總 RNA提取試劑盒提取總 RNA，TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒和隨機引物合成cDNA。③引物設(shè)計及合成:設(shè)計p11和β-actin基因擴增引物，p11:5'-AAATTCGCTGGGGATAAAGG-3'，5'-AGCCCACTTTGCCATCTCTA-3'。β-actin:5'-ACCTGTACGCCAACACAGTG-3'，5'-ACACGGAGTACTTGCGCTCA-3'。④實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QRT-PCR):采用Real Master Mix(SYBR Green)試劑盒，在64孔ABI Prism 7300序列檢測系統(tǒng)上進(jìn)行QRT-PCR擴增。以管家基因β-actin作為內(nèi)對照基因來標(biāo)化目的基因的表達(dá)水平。每個待測樣本的基因和內(nèi)對照基因均重復(fù)3次，同時分別設(shè)立3個陰性對照孔。定量QRT-PCR反應(yīng)體系為20 μL，包括9 μL 2.5 × Real Master Mix/20 × SYBR solution，正、反向引物(均為 1 μmol/L)各 1 μL，cDNA 模版 2 μg。反應(yīng)程序:94℃起始模板變性2 min，1個循環(huán);94℃變性20 s;55℃退火30 s;68℃延伸1 min，40個循環(huán)。⑤采用log2R進(jìn)行相對定量分析。

1.3 臨床癥狀評估 采用創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙量表平民版(PCL-C)、漢密頓焦慮量表(HAMA)、漢密頓抑郁量表(HAMD)評估患者病情。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。3組間p11 mRNA表達(dá)水平的比較采用F檢驗，進(jìn)一步的兩兩比較采用LSD法。PTSD組與非PTSD組HAMA、HAMD、PCL-C評分比較采用 t檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p11 mRNA表達(dá)比較 PTSD組、非PTSD組、對照組 p11 mRNA相對表達(dá)量分別為 －0.495±0.920、0.911 ±1.474、－0.000 ±0.791，PTSD 組、對照組分別為與非PTSD組比較，P均＜0.05。

2.2 HAMA、HAMD、PCL-C 評分比較 PTSD 組HAMA、HAMD、PCL-C 評分分別為(21.63 ±7.79)、(25.11 ±8.56)、(55.84 ±6.35)分，非 PTSD 組分別為(10.31 ±6.22)、(13.00 ±9.88)、(31.77 ±5.09)分，兩兩比較，P 均 ＜0.05。

2.3 相關(guān)性分析 p11 mRNA相對表達(dá)量與HAMD 評分呈負(fù)相關(guān)(r= －0.299，P=0.033)，與PCL-C 評分呈負(fù)相關(guān)(r= －0.385，P=0.030)，與HAMA 評分無相關(guān)性(r= －0.233，P=0.111)，與經(jīng)歷創(chuàng)傷事件的年齡無相關(guān)性(r=－0.184，P=0.315)，與距創(chuàng)傷事件的時間無相關(guān)性(r=－0.031，P=0.867)。

3 討論

p11又稱為 S100A10或 calpactionⅠ輕鏈，是S100家族中的成員［4］;人們首先在大腦中發(fā)現(xiàn)這個家族，并且因為可以溶解在100%的硫酸銨中而稱為S100［5］。p11在不同的細(xì)胞和組織中表達(dá)量不同，在肺、腸、腎中高表達(dá)，在紅細(xì)胞中不表達(dá)，在肝臟中有適當(dāng)表達(dá)［6，7］。p11調(diào)節(jié)許多細(xì)胞過程，如細(xì)胞周期進(jìn)程和分化;通過F-肌動蛋白的重組，參與胞吐和胞吞，還可以將5-羥色胺1B受體從細(xì)胞質(zhì)運輸?shù)郊?xì)胞膜［8，9］。Svenningsson 等［9］發(fā)現(xiàn)，大鼠大腦的額葉皮質(zhì)、下丘腦腹內(nèi)側(cè)、海馬p11 mRNA與5-羥色胺1B受體的分布相似，在抑郁癥動物模型中，p11 mRNA水平下降，在經(jīng)過三環(huán)類抗抑郁、單胺氧化酶抑制劑、電休克治療后p11 mRNA表達(dá)水平升高。這些都說明了p11在抗抑郁藥藥物治療的機制中發(fā)揮著作用。Melas等研究也證明，p11與抗抑郁藥物作用密切相關(guān)。既往研究發(fā)現(xiàn)，p11是藥物治療的新關(guān)鍵，通過5-羥色胺1B受體與五羥色胺系統(tǒng)發(fā)生相互作用。

既往研究［10］發(fā)現(xiàn)，PTSD患者 p11 mRNA較對照組下調(diào)。而本研究結(jié)果顯示，PTSD組與對照組p11 mRNA相對表達(dá)量比較無統(tǒng)計學(xué)差異。本研究中收集的患者病程較短，不同患者處于疾病的不同階段，可能是導(dǎo)致與之前研究結(jié)果不同的原因。本研究還發(fā)現(xiàn)，非PTSD組p11 mRNA表達(dá)量較其他兩組增加。根據(jù)量表結(jié)果提示，非PTSD組的患者中部分表現(xiàn)出焦慮與抑郁問題，但尚不足以診斷為焦慮癥或抑郁癥，是否會進(jìn)一步發(fā)展為焦慮癥或抑郁癥需要進(jìn)一步隨訪。事實上，DSM-Ⅳ并不推薦將經(jīng)歷喪親之痛2個月以內(nèi)的人診斷為抑郁，即使他/她有抑郁病史，這一點應(yīng)引起我們的重視。此外，p11 mRNA在非PTSD組中上升，這是否提示p11 mRNA水平上升阻止了PTSD的發(fā)生發(fā)展值得進(jìn)一步研究。此前研究發(fā)現(xiàn)，在PTSD小鼠中，大腦的前額皮質(zhì)、海馬和杏仁核中p11 mRNA相對表達(dá)量增加。在PTSD患者死后的尸檢研究中發(fā)現(xiàn)，背側(cè)前額葉皮層中p11 mRNA上升。外周血與中樞系統(tǒng)的不一致，可能是p11 mRNA在不同組織中表達(dá)不同造成的，也有可能是不同創(chuàng)傷經(jīng)歷和不同疾病階段造成的。但中樞系統(tǒng)取材困難，不適宜活體研究，外周血取材方便，并能夠動態(tài)反應(yīng)機體情況，中樞系統(tǒng)與外周系統(tǒng)是否存在不同的分子機制，仍值得進(jìn)一步研究。

同時，在本研究中有52.6%的患者有自殺傾向，有自殺行為的人僅有1例。Henderson等［11］研究發(fā)現(xiàn)62%診斷PTSD的個體有自殺觀念。既往研究［12］發(fā)現(xiàn)，自殺未遂者外周血單個核細(xì)胞p11 mRNA下降，在沒有自殺者中有所上升。而本研究中自殺未遂者較少，這也可能是導(dǎo)致研究結(jié)果不同的另一原因。Su等［10］發(fā)現(xiàn)，PTSD患者p11 mRNA與HAMD評分呈正相關(guān)。本文結(jié)果顯示，p11 mRNA表達(dá)量與HAMD、PCL-C評分有關(guān)，但與HAMA評分、經(jīng)歷創(chuàng)傷事件的年齡、距創(chuàng)傷事件的時間、創(chuàng)傷事件的類型無相關(guān)性。提示p11 mRNA可能與患者的臨床癥狀有一定的相關(guān)性。

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