雍蘇南 張穩(wěn) 譚超 王順民 譚元生

高血壓病患病率居慢性病首位，同時也是心腦血管病最主要的危險因素。高血壓的發(fā)病機制目前尚未完全闡明，仍在不斷探索中。近年來研究表明，免疫炎癥反應誘導的內皮功能障礙是高血壓病重要的發(fā)病機制和關鍵環(huán)節(jié)[1]。這提示抗炎和內皮保護等聯(lián)合治療可能成為除降壓治療之外治療高血壓病的必要手段。本實驗通過觀察自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）血壓、血清白細胞介素-6（IL-6）和白細胞介素-8（IL-8）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）中藥干預后的變化，研究復方七芍降壓片對高血壓病降壓作用的可能機制，以期在中醫(yī)藥方面尋求防治高血壓病的新思路和新方法，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 8周齡SHR 48只，體重230~270 g，雄性，清潔級，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，動物生產許可證號：SCXK（滬2007-0005）。8周齡Wistar-kyoto（WKY）大鼠12只，體重225~280 g，雄性，清潔級，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，動物生產許可證號：SCXK（滬2007-0005）。實驗動物環(huán)境設施合格證號：SYXK（湘）2009-0001。

1.1.2 實驗藥物 本院藥劑科制備，批號：20141116；卡托普利片（25 mg/片），中美上海施貴寶制藥有限公 司 生 產， 批 號：20140914；Rat IL-6 ELISA Kit試劑盒，CUSABIO公司生產，批號：Y05031105；Rat IL-8 ELISA Kit試劑盒，CUSABIO公司生產，批號：Y17031107；Rat TNF-αELISA Kit 試劑盒，CUSABIO公司生產，批號：Y05031106。

1.1.3 實驗儀器 BP-2006A型智能無創(chuàng)血壓計（北京軟隆科技有限責任公司），DT1000A型電子天平（江蘇省常熟市長春儀器廠制造），biocell2010型酶標儀（奧地利）。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 將48只SHR隨機分為模型組（SHR-M組）、卡托普利組（SHR-K組）、復方七芍降壓片低劑量治療組（SHR-D組）、復方七芍降壓片高劑量治療組（SHR-G組）4個組，每組12只，12只WKY大鼠為正常組（WKY組）。復方七芍降壓片（壓片前）成人每日用量為49 g，低劑量治療組以成人等效量（大鼠體表面積/成人平均體表面積×成人每日用量）灌胃，高劑量治療組以成人等效量4倍灌胃，卡托普利組以成人等效量灌胃。同時，模型組及正常組以等量蒸餾水開始灌胃，給藥體積為10 mL/kg。各組灌胃1次/d，連續(xù)4周，灌胃期間每周測量1次血壓和體重，根據(jù)體重隨時調整給藥量。

1.2.2 SHR尾動脈壓的測定 分別在實驗開始前，開始1、2、3、4周后，采用尾動脈測壓法應用智能無創(chuàng)血壓計測量給藥前后大鼠血壓。在每周第7天14：00-17：00測各組大鼠的血壓平均值，為該鼠所在周的血壓值。

1.2.3 血清IL-6、IL-8及TNF-α的測定 末次藥后待血壓測定完成后，用20%烏拉坦腹腔麻醉，腹主動脈取血4 mL，靜置、分離血清，用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法測定IL-6、IL-8及TNF-α的含量，實驗方法嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)處理應用SPSS 17.0軟件進行。計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，采用單因素方差分析（ANOVA）進行數(shù)據(jù)之間比較，組間兩兩比較采用最小顯著差值法（LSD），同一組治療前后比較采用配對。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組降壓效果比較 SHR-M組的血壓隨用藥時間的推移逐漸增高，治療組及SHR-K組則均有下降；治療前后SHR各組血壓均高于WKY組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；治療1、2、3、4周后SHR-K組血壓均較治療前下降且均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；SHR-D組血壓從第3周開始，SHR-G組血壓從第2周開始均低于治療前且均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；SHR-D及SHR-G組治療后血壓均高于SHR-K組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；治療3、4周后，SHR-G組血壓均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1及圖1。

表1 各組大鼠治療前后血壓變化比較（x-±s） mm Hg

圖1 各組大鼠治療前后血壓變化比較

2.2 各組血清IL-6、IL-8及TNF-α比較 SHR各組血清炎癥因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均高于WKY組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；連續(xù)用藥4周后，SHR-K組、SHR-D組及SHR-G組血清炎癥因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；SHR-G組各炎癥因子水平均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

表2 各組大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平比較（x-±s）ng/L

3 討論

血管管腔的表面均覆蓋著內皮組織，不僅是一種屏障結構而且具有調節(jié)血管舒縮功能、血流穩(wěn)定性和血管重塑的重要作用。血管內皮具有易損性的功能界面，血液中病理生理變化均先作用于血管內皮，導致內皮細胞功能障礙（endothelial dysfunction，EDF）。血壓升高使血管壁的剪切力和應力增加，去甲腎上腺素和AT-Ⅱ等血管活性物質增多，均可損害血管內皮及其功能。內皮功能受損后導致血管舒張和收縮因子、生長抑制和促進物質、促凝和抗凝物質等生成釋放不平衡，從而引起生理系統(tǒng)異常[2]。因此內皮功能障礙可能是高血壓導致靶器官損害及其合并癥的關鍵環(huán)節(jié)。血液中的IL-6來源于活化的單核細胞，是一種參與機體免疫和炎癥反應的炎癥細胞因子[3]。高血壓患者普遍存在內皮的炎癥反應，因而可生成許多血小板源生長因子和腫瘤壞死因子，成纖維細胞、單核細胞被這些炎癥因子誘導產生IL-6，而IL-6又可使成纖維細胞和平滑肌細胞增殖，從而生成大量的PDGF，使得周圍血管阻力增高，最終引發(fā)高血壓。

單核細胞和內皮細胞可分泌IL-8，血清不能滅活IL-8，所以易形成局部累積，它能趨化中性粒細胞，在炎癥損傷中起重要作用。IL-8可介導活化中性粒細胞，繼而使其與受體結合，從而改變受體構象，超氧陰離子被啟動、呼吸爆發(fā)，產生局部炎癥反應，促進細胞脫顆粒、破壞內皮細胞基底膜完整性和促進中性粒細胞跨內皮細胞游走，達到損傷細胞的作用[4]。

TNF-α也是炎性細胞因子之一，它參與多種病理生理的發(fā)生過程，主要是由激活的巨噬細胞分泌形成，也可由血管內皮細胞和血管平滑肌細胞分泌。TNF-α可以促進中性粒細胞氧化代謝及脫顆粒，具有直接細胞毒作用，通過促進脂質過氧化增加血管內皮通透性，引起內皮舒縮功能障礙，從而減少血管內皮細胞釋放NO和前列腺素；增加炎性介質IL-1的分泌量，導致血管平滑肌細胞增生、肥大，引起結締組織增多、內膜增生，血管壁僵硬度增加，使得管腔狹窄，外周阻力增加，導致高血壓形成[5-7]。因此，TNF-α在高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生過程中扮演中心環(huán)節(jié)的角色[8]。

高血壓病屬中醫(yī)“眩暈”、“頭痛”范疇。眩暈可定位于肝腎，肝腎陰虛，水不涵木，陰不維陽，肝陽上亢，肝風內動，發(fā)為眩暈，即肝陽化風。肝腎陰虛，一方面陰虛可致血枯脈澀，日久成瘀，瘀血阻絡，髓海失濡；另一方面，陰虛陽亢，肝失疏泄，氣血運行不暢，日久亦可致瘀血阻絡，氣血不能上達，清竅失養(yǎng)，眩暈發(fā)作，即瘀血化風。故高血壓患者中醫(yī)病機可用“虛、瘀、風”來概括，并且中醫(yī)理論認為瘀血停滯導致脈絡損傷，脈絡損傷反過來又能加重瘀血停滯。針對此病病機，采用養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風立法的醫(yī)院制劑復方七芍降壓片治療效果確切。該方由三七、白芍、桑寄生、杜仲、丹參、天麻、蘿芙木、地龍、葛根、炒香附、甘草組成。方中三七活血化瘀通絡，白芍養(yǎng)陰柔肝息風，共為君藥。桑寄生、杜仲補益肝腎，丹參活血祛瘀，天麻平肝息風，均為臣藥。蘿芙木平肝清熱，地龍息風通絡，葛根生津活血，炒香附理氣疏肝，共為佐藥。甘草為使，調和諸藥。以上合用，使得陰虛得補，陽亢得平，脈絡得暢，髓海得濡、清竅得養(yǎng)、眩暈自止。

劑量，復方七芍降壓片對內皮損傷的調節(jié)作用可能是其發(fā)揮降壓作用的機制之一。本研究顯示，與SHR-M組比較，隨著時間的延長，SHR-K組、SHR-D組及SHR-G組血壓均明顯降低；治療3、4周后，SHR-G組血壓均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。以上結果表明復方七芍降壓片有確切的降壓效果，且高劑量復方七芍降壓片的降壓效果較低劑量好。SHR血清IL-6、IL-8以及TNF-α水平存在明顯的異常，提示細胞因子IL-6、IL-8以及TNF-α可能是導致高血壓病內皮細胞功能障礙的作用因子。治療后，SHR-K組、SHR-D組及SHR-G組血清炎癥因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；SHR-G組各炎癥因子水平均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。以上結果表明復方七芍降壓片可降低炎癥因子水平，且高劑量的效果優(yōu)于低劑量，復方七芍降壓片對內皮損傷的調節(jié)作用可能是其發(fā)揮降壓作用的機制之一。

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