李 菲

(安發(fā)福建生物科技有限公司 352100)

蛹蟲草又名北蟲草，為子囊菌亞門、麥角菌目、麥角菌科、蟲草屬，與冬蟲夏草同屬。冬蟲夏草含有豐富的腺苷、蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、多種氨基酸等生物活性成分，還有鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、銅、錳、鋅、硒等微量元素，具有抗癌、抗腫瘤、抗氧化、清除自由基、滋肺益氣、增精補(bǔ)腎、延緩衰老、提高免疫力之功效，被人們譽(yù)為“東方圣草”［1］。近年來，隨著冬蟲夏草的過度采挖，導(dǎo)致野生冬蟲夏草資源嚴(yán)重枯竭，為了彌補(bǔ)冬蟲夏草資源的不足，國內(nèi)外學(xué)者將目光投向了蛹蟲草，開始了人工栽培蛹蟲草的研究［2］。從蛹蟲草的菌種選育、人工栽培、有效成分、藥理功效、開發(fā)應(yīng)用等方面進(jìn)行深入的研究，發(fā)現(xiàn)蛹蟲草的各種有效成分與冬蟲夏草極其相近，在優(yōu)越的人工栽培環(huán)境條件下，有效成分的含量甚至比冬蟲夏草還要高，而且對寄主要求不嚴(yán)，易于進(jìn)行人工規(guī)?；耘唷Ｄ壳?，蛹蟲草的人工栽培技術(shù)已經(jīng)成熟，并進(jìn)入規(guī)?；a(chǎn)，但在栽培過程中仍存在許多問題。本文通過大米培養(yǎng)基栽培蛹蟲草實驗，結(jié)合前人研究文獻(xiàn)，總結(jié)出蛹蟲草的高產(chǎn)栽培關(guān)鍵技術(shù)，以供同行參考。

1 菌種制備

蛹蟲草栽培中，菌種質(zhì)量的優(yōu)劣是栽培的重中之重，決定著生產(chǎn)的成敗。購買的菌種，需要進(jìn)行栽培實驗，選擇生長良好的子實體進(jìn)行分離、純化，得到適合栽培的菌種。母種的轉(zhuǎn)管次數(shù)不得超過3次，轉(zhuǎn)管次數(shù)越多，產(chǎn)量越低，甚至不能抽生。用固體菌種接種，發(fā)菌時間長且生長緩慢;而利用液體菌種接種，因菌液具有流動性，會帶著菌種進(jìn)入培養(yǎng)基，分散在培養(yǎng)基的各個部位，形成無數(shù)個生長中心，這樣便大大減少了發(fā)菌時間，縮短了生產(chǎn)周期。在選擇試管菌時，要選擇菌絲較發(fā)達(dá)的菌種來制備液體菌種，這樣才能培養(yǎng)出較細(xì)、較均勻的液體菌種，以便于接種至大米培養(yǎng)基。［3－4］

2 培養(yǎng)基制備

蛹蟲草菌絲體的有效分化需以昆蟲為基質(zhì)才能完成。因此，培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)必須相當(dāng)豐富才能有利于正常發(fā)育，培養(yǎng)基主要營養(yǎng)成分是碳源和氮源。碳源是蛹蟲草菌絲體生長必需的主要營養(yǎng)物質(zhì)，除了以大米為主要碳源外，還需要添加適量的小分子碳源來促進(jìn)其生長，葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖及淀粉等都可以作為蛹蟲草菌絲體培養(yǎng)基的碳源，但不同碳源對其生長有著明顯的差異。其中添加蔗糖的培養(yǎng)基，子實體粗壯、色澤好，生長狀況最佳，且來源廣泛，更適宜用于規(guī)?；a(chǎn)。［5－6］氮源是蛹蟲草菌絲體生長所需的核酸和蛋白質(zhì)合成的原料，蛋白胨、檸檬酸銨、蠶蛹、酵母等都是可以利用的氮源，其中以蛋白胨和檸檬酸銨更能滿足其生長要求［6］。此外，培養(yǎng)基中通常需要添加一定量的無機(jī)鹽和維生素。硫酸鎂是微生物發(fā)酵常用的營養(yǎng)源;鎂離子是許多酶的催化劑;添加磷酸二氫鉀不僅可以提供必要的營養(yǎng)成分，還可以起到緩沖培養(yǎng)基pH值的作用，有利于蟲草的生長;添加少量的維生素，可對菌絲體的生長起調(diào)節(jié)作用，能夠促進(jìn)其生長發(fā)育。［7－9］綜上所述，蛹蟲草的最佳培養(yǎng)基是以大米為主料，加入適量營養(yǎng)液。營養(yǎng)液配方為蔗糖20 g、蛋白胨5 g、MgSO41.0 g、KH2PO42.0 g、VB10.1 g、水1000 mL。主料與營養(yǎng)液的最佳比例為1∶1.2～1.5，若太干，濕度達(dá)不到要求，子實體容易早衰;太濕，滅菌完成后，大米黏性太大，不利于發(fā)菌。

3 滅菌

滅菌通常分為常壓滅菌和高壓滅菌，但不論是常壓滅菌還是高壓滅菌，要注意兩點:一是主料與營養(yǎng)液在滅菌前的浸泡時間不能太長，一般不超過4 h，否則會發(fā)生培養(yǎng)基發(fā)酵和糖化，從而改變培養(yǎng)基成分及pH值;二是必須合理排列鍋內(nèi)瓶的密度，保證蒸汽流暢，才能達(dá)到徹底滅菌的效果。常壓滅菌需要8～10 h，注意常壓滅菌時應(yīng)盡快使灶內(nèi)溫度達(dá)到100℃，否則培養(yǎng)基容易酸化變質(zhì)，影響產(chǎn)量。在常壓滅菌結(jié)束、灶內(nèi)溫度自然冷卻后，應(yīng)馬上出鍋，完全冷卻后進(jìn)行接種，滅菌完成后絕對不能悶料，否則容易導(dǎo)致細(xì)菌污染。高壓滅菌要合理設(shè)置滅菌時間，滅菌時間太短，滅菌不徹底;滅菌時間太長，則會導(dǎo)致培養(yǎng)基黏性太大，影響菌絲的生長。［4］

4 接種

蛹蟲草栽培所用的培養(yǎng)基營養(yǎng)非常豐富，因此極易感染雜菌，所以在接種時必須嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作［5］。首先，必須確保接種室為無菌環(huán)境，提前對接種室進(jìn)行清潔、滅菌，并且在接種箱、超凈工作臺等無菌設(shè)備內(nèi)進(jìn)行操作;其次，菌種所處的環(huán)境必須是無菌環(huán)境，要在酒精燈旁進(jìn)行接種，且接種所用的工具、儀器，使用之前也必須進(jìn)行消毒處理;再者，操作人員在進(jìn)入接種室前要穿戴好經(jīng)過消毒處理的實驗服、口罩等，做好一切消毒工作，才可進(jìn)行接種;最后，每次接種時間不宜過長，以免接種區(qū)內(nèi)空氣交換導(dǎo)致雜菌增多。

5 后期管理

5.1 溫度

溫度是蛹蟲草生長環(huán)境的關(guān)鍵因素，蛹蟲草不同生長階段對溫度有不同要求。溫度較低時，菌絲體生長慢，且長勢稀疏，生產(chǎn)周期長;溫度較高時，菌絲體密度、色澤等較好，生長周期也短，但菌絲體內(nèi)的有機(jī)物消耗過多，子實體細(xì)長柔弱。據(jù)前人的研究表明，菌絲體生長最適溫度為18～20℃［10］;子實體生長最適溫度為18～26℃，原基分化時需要較大的溫差刺激，一般保持在6～10℃的溫差范圍，長草階段則需要保持22℃的恒溫條件［4，11－12］。

5.2 光照

光照對轉(zhuǎn)色、原基分化、子實體生長都有著至關(guān)重要的作用。發(fā)菌完成后，需要給予弱光照刺激進(jìn)行轉(zhuǎn)色，光照強(qiáng)度太強(qiáng)會抑制菌絲的生長且不利于轉(zhuǎn)色，光照強(qiáng)度太弱菌絲會生長過旺。轉(zhuǎn)色階段最適光照強(qiáng)度為200～300 lx，菌絲轉(zhuǎn)色效果好，菌絲顏色鮮艷。在原基分化階段，所需要的光照強(qiáng)度與轉(zhuǎn)色階段相差不大，根據(jù)生長情況可對光照強(qiáng)度進(jìn)行微調(diào)整。前兩個階段的光照時間應(yīng)保持在12～14 h，太久菌絲會過早變黃甚至老化，原基分化較密。子實體生長時則需要較強(qiáng)的光照，最適光強(qiáng)為700～900 lx，此時子實體呈條狀，生長均勻，為鮮艷的橙黃色。光照太弱，子實體較細(xì)且弱，顏色為淺黃色;光照太強(qiáng)，子實體短粗、塊狀、扭曲、顏色不均勻。在此階段，光照時間稍短一些，控制在8～10 h最佳，子實體生長健壯、較高且粗，以孢子頭效果最為明顯。［13－14］

5.3 濕度

濕度的控制分為瓶內(nèi)濕度與空氣濕度的控制。培養(yǎng)基不同含水量對菌絲萌發(fā)有一定影響，含水量過高，菌絲萌發(fā)時間延長，生命力下降，菌絲長滿瓶底時間顯著增加，而且濕度大極易導(dǎo)致雜菌感染［4］。培養(yǎng)基最佳的料水比為1∶1.5，菌絲萌發(fā)快、長滿瓶底時間最短，菌絲質(zhì)量好，轉(zhuǎn)色快、子座粗壯、產(chǎn)量高。適宜的空氣濕度也是蛹蟲草菌絲體正常生長發(fā)育的條件之一。在轉(zhuǎn)色及原基分化期空氣濕度保持在60%～70%最為合適，而出草階段的空氣濕度保持在80%～90%最佳。規(guī)?；a(chǎn)中，一般通過在地上灑水的措施來提高空氣濕度。［6，15］

5.4 通風(fēng)

發(fā)滿菌后及時進(jìn)行扎孔處理，在薄膜上扎2～3個通風(fēng)孔。環(huán)境溫度較低時，栽培室每4～5 d進(jìn)行1次通風(fēng)處理;環(huán)境溫度較高時，栽培室每2～3 d進(jìn)行1次通風(fēng)處理，以確保栽培室內(nèi)空氣通風(fēng)良好。在通風(fēng)完成后須及時對培養(yǎng)室進(jìn)行紫外燈滅菌，以及抽樣處理，以防雜菌感染，尤其是在溫度較高時。在菌絲體生長階段，較易發(fā)生雜菌感染的情況，通風(fēng)完后更要注意滅菌處理，這樣才能使產(chǎn)量更高，出草更快、更整齊。［16］

6 采收

等到子實體長至6～8 cm，在孢子散發(fā)之前進(jìn)行采摘［4］，采摘時應(yīng)注意不要破壞子實體基部的培養(yǎng)基，以便二茬的生長。將采摘的子實體及時進(jìn)行烘干、貯存。采收后要向瓶內(nèi)添加營養(yǎng)液，營養(yǎng)液量根據(jù)實際而定，一般為第1次營養(yǎng)液量的1/3～1/2，將瓶子傾斜，沿著瓶壁倒入營養(yǎng)液，注意不要將營養(yǎng)液倒至菌絲上，以免影響后期生長。

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