金一蘭

(泉州師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院 福建 泉州362000)

作為一種特殊真菌的提取物，AMH具有非常強(qiáng)的體外殺滅人類癌細(xì)胞、抑制動(dòng)物移植性腫瘤生長、預(yù)防致癌物誘發(fā)動(dòng)物腫瘤以及抗突變等作用。大量的研究表明，在治療癌癥方面真菌提取物AMH的開發(fā)應(yīng)用前景非常好。為此，本文對真菌提取物體內(nèi)抗小鼠S180作用及與環(huán)磷酰胺聯(lián)合作用進(jìn)行了分析和研究，希望能夠?qū)⒖茖W(xué)依據(jù)提供給AMH的后續(xù)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：18—23g的昆明種小鼠。

②試劑：二甲基亞砜；環(huán)磷酰胺。

③瘤株：本次研究選擇小鼠肉瘤S-180細(xì)胞株作為瘤株。

④樣品：采用硅膠柱層析法、有機(jī)溶劑萃取法、乙醇回流提取法等各種分離手段從真菌植物中提取AMH中獲得的樣品AMH-D[1]。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

①AMH-D體內(nèi)抗癌作用實(shí)驗(yàn)：選擇移植性腫瘤研究法，在小鼠腹水對S-180腫瘤細(xì)胞進(jìn)行兩次傳代，將呈米湯樣的具有良好生長情況的小鼠腹水在無菌情況下抽取出來，采用滅菌生理鹽水對其進(jìn)行稀釋[2]。選擇48只昆明種小鼠，采用皮下注射的方式在小鼠左腋下進(jìn)行注射，每只小鼠注射0.1mL，隨后將皮下移植瘤模型制作出來[3]。

隨機(jī)的將小鼠劃分為兩組，每組小鼠各有24只，其中各有12只雌鼠，12只雄鼠，分別為AMH-D劑量組和DMSO溶劑對照組。在接種后的第二天對小鼠實(shí)施腹腔注射給藥。每隔一天進(jìn)行一次給藥，每次每只小鼠具有0.05mL的給藥量，對小鼠實(shí)施五次給藥。在最后給藥的第二天將小鼠處死，隨后對其進(jìn)行稱重，將其實(shí)體瘤完整的剝?nèi)〕鰜恚⑶覍ζ溥M(jìn)行稱重。在對抑瘤率進(jìn)行計(jì)算的時(shí)候按照下面的公式，并且實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析。

②聯(lián)合CP抗癌作用實(shí)驗(yàn)：按照上述的方法對96只小鼠進(jìn)行S-180腫瘤細(xì)胞的接種，將皮下移植腫瘤模型制成。在完成接種之后，對小鼠實(shí)施稱重，并且隨機(jī)的將其劃分為四個(gè)小組，也就是聯(lián)合用藥組、AMH-D劑量組、CP陽性對照組和DMSO溶劑對照組。采用DMSO對其中的陰性對照組進(jìn)行處理，20mg/kg為環(huán)磷酰胺劑量。在接種后的第二天對小鼠實(shí)施腹腔注射給藥。每隔一天進(jìn)行一次給藥，每次每只小鼠具有0.05mL的給藥量，對小鼠實(shí)施五次給藥。在結(jié)束實(shí)驗(yàn)的時(shí)候?qū)⑿∈筇幩溃S后對其進(jìn)行稱重，將其實(shí)體瘤完整的剝?nèi)〕鰜恚⑶覍ζ溥M(jìn)行稱重。在對Q值和抑瘤率進(jìn)行計(jì)算的時(shí)候按照下面的公式，以此為根據(jù)對兩種藥物的聯(lián)合效應(yīng)進(jìn)行判斷，并且實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析。

在該公式中，兩種藥物合用的抑制率用E（A+B）來表示，兩藥單用的抑制率分別用EA和EB來表示，兩種藥物作用相加用Q為0.85—1.15來表示，兩種藥物作用協(xié)同用Q＞1.15 表示，兩種藥物作用拮抗用Q＜0.85表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。療效用X2檢驗(yàn)。組內(nèi)治療前后比較用配對樣本t檢驗(yàn)；組間比較用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

①AMH-D對S-180具有大于30%的抑瘤率，相對于對照組而言，在平均瘤重方面存在著顯著差異（P＜0.01）。表明在50—150mg/kg的范圍內(nèi)AMH-D可以對S-180腫瘤的生長起到有效的抑制作用。

②AMH-D與CP合用用藥有明顯的抑制肉瘤S-180的生長的作用，相對于對照組而言，在平均瘤重方面存在著顯著差異（P＜0.01）。相對于CP組而言，其存在著顯著性差異（P＜0.05）。這一結(jié)果表明兩種藥物聯(lián)合具有協(xié)同作用。

3 討論

在臨床上治療腫瘤的各種化療藥物往往具有較大的毒性，而且很容易使腫瘤產(chǎn)生耐藥性，所以現(xiàn)在越來越多的人開始關(guān)注尋找天然植物藥物。作為一種特殊真菌的提取物，AMH經(jīng)過很多研究證明其體外腫瘤抑制作用非常突出?，F(xiàn)在我國開發(fā)抗癌植物藥的時(shí)候主要是研究一些抑瘤作用顯著的的抗癌藥物上，而這些藥物在抗癌的時(shí)候往往也會(huì)對機(jī)體正常細(xì)胞的生長產(chǎn)生影響。

在本次研究中對AMH-D的體內(nèi)抗腫瘤作用進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，AMH-D可以對小鼠S-180的生長起到顯著的抑制作用，小鼠體重的增長也受到了AMH-D的影響。環(huán)磷酰胺與AMH-D的聯(lián)合抗癌作用表明兩種藥物聯(lián)合使用的抗腫瘤作用具有協(xié)同性。這一結(jié)果表明，該植物提取物對抗腫瘤藥物抗癌作用效果具有促進(jìn)作用，因此在臨床中有可能作為聯(lián)合抗腫瘤藥物。

綜上所述，AMH-D的抗腫瘤活性非常顯著，其抗腫瘤開發(fā)和應(yīng)用前景比較好。

[1]焦河玲，鄧虹珠，王曉娟，等.苦豆子總堿對S180荷瘤小鼠的抑瘤作用[2].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，2（17）：163－165.

[2]范良華,陳海峰,陳思靜.幾種天然植物中抗腫瘤藥物的研宄進(jìn)展[J].大眾科技,2009(09):142-143.

[3]嚴(yán)淑,劉寶瑞.七種天然生物堿抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J],現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2010(06):1227-1230.