王科鋒(武漢市中醫(yī)醫(yī)院,湖北 武漢 430014)

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熟地配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王科鋒
(武漢市中醫(yī)醫(yī)院,湖北 武漢 430014)

目的：建立熟地配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用高效液相色譜法對(duì)熟地配方顆粒的主要活性成分毛蕊花糖苷進(jìn)行定量分析。結(jié)果：毛蕊花糖苷在0.0135 3～0.541 2μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 6)；平均加樣回收率為98.04%,RSD為1.65%(n=6)。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可作為熟地配方顆粒的質(zhì)量控制方法。

熟地黃；配方顆粒；高效液相色譜法；毛蕊花糖苷

熟地為玄參科植物地黃的塊根,具有補(bǔ)血滋陰的功效,可用于治療血虛萎黃,眩暈,心悸失眠,月經(jīng)不調(diào),崩漏,亦可用于腎陰不足的潮熱骨蒸、盜汗、遺精、消渴。熟地配方顆粒是由單味中藥飲片經(jīng)提取濃縮制成,供中醫(yī)臨床配方用的制劑,其有效成分、性味、主治、功效和飲片完全一致,且不用煎熬而直接熱水沖服,服用簡(jiǎn)單方便,療效確切,被越來越多患者認(rèn)可,但其缺乏有效的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),導(dǎo)致市面上流通的熟地配方顆粒質(zhì)量不一,療效不穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)熟地配方顆粒主要活性成分毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行測(cè)定[1],為熟地配方顆粒的質(zhì)量控制提供有效手段。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

日本島津高效液相色譜儀(LC-20AD泵、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD-M20A紫外檢測(cè)器、LC-SoLution色譜工作站)； KQ-500PV型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司,40W,100 Hz)；FA2004電子分析天平(上海天平儀器廠,萬分之一)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試藥

毛蕊花糖苷對(duì)照品(批號(hào)：111530-201310,中國(guó)食品藥品檢定研究院,含量：93.3%)；熟地配方顆粒(江陰天江藥業(yè)有限公司，4g/袋,相當(dāng)于飲片10g)；0.1%醋酸溶液；乙腈為色譜純；甲醇為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ODS Phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%醋酸溶液(16∶84)；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：334nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃,理論塔板數(shù)不低于5 000。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液配制 精密稱取毛蕊花糖苷對(duì)照品14.5mg,置于50mL容量瓶,加流動(dòng)相溶解,定容,得濃度為270.6μg·mL-1的毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液,精密量取2mL置入10mL容量瓶中,加流動(dòng)相定容,得濃度為54.12μg·mL-1的毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液配制 精密稱取熟地配方顆粒2g,置錐形瓶中,精密加入80%甲醇50mL,稱重,在40W,60Hz條件下超聲30min,放冷至室溫,以80%甲醇補(bǔ)足失重,搖勻?yàn)V過,即得供試品溶液。

2.3 專屬性考察

取毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液、供試品溶液各進(jìn)樣10μL,按“3.1”色譜條件測(cè)定,記錄色譜圖。結(jié)果顯示供試品溶液中毛蕊花糖苷分離度好,其他成分對(duì)毛蕊花糖苷的測(cè)定無干擾。見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取54.12μg·mL-1毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液0.25、0.5、1.0、2.5、5.0mL分別置于10mL容量瓶中,流動(dòng)相定容搖勻,得濃度為1.353、2.706、5.412、13.53、7.06μg·mL-1的對(duì)照品溶液,各進(jìn)樣10μL,以毛蕊花糖苷濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)作回歸方程,得線性回歸方程Y=16 763X-7 948.9；r=0.999 6。結(jié)果表明毛蕊花糖苷在1.353～54.12μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取54.12μg·mL-1毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液進(jìn)樣10μL,按“2.1”色譜條件重復(fù)進(jìn)樣 6次,以毛蕊花糖苷峰面積計(jì)算RSD為0.92%,表明儀器精密度良好。

圖1 各溶液HPLC圖譜(1為毛蕊花糖苷峰)

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液,在0、2、4、8、24、48h進(jìn)樣10μL,按“2.1”色譜條件測(cè)定,計(jì)算得RSD為1.14%,說明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批熟地配方顆粒適量,按“2.2.2”供試品溶液的制備方法分別制備6份供試品溶液,按“2.1”色譜條件測(cè)定毛蕊花糖苷的峰面積,得RSD為1.58%,表明此方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的熟地配方顆粒1g共6份,分別加入0.9mL 270.6 μg·mL-1的毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液,按“2.2.2” 項(xiàng)供試品制備方法制備,按“2.1”色譜條件各進(jìn)樣10μL,測(cè)定毛蕊花糖苷的峰面積,樣品中毛蕊花糖苷的平均加樣回收率為98.04%,RSD為1.65% 。詳見表1。

2.9 樣品含量測(cè)定

取三個(gè)批號(hào)的熟地配方顆粒樣品,每個(gè)批號(hào)3份,每份精密稱取2g,按“2.2.2”項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液,按“2.1”色譜條件各進(jìn)樣10μL,測(cè)定毛蕊花糖的峰面積,代入回歸方程計(jì)算,見表2。熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的平均含量分別為486.35、484.11、488.26μg·g-1,RSD分別為1.51%、0.51%、0.63% 。

表1 加樣回收率結(jié)果

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法確定

本實(shí)驗(yàn)中,比較了加熱回流提取法和超聲提取法對(duì)熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的提取效率,得出超聲提取法提取效率高且所用時(shí)間較短,故選用超聲提取法。在提取溶劑方面,比較了乙醇、甲醇,最后測(cè)出用甲醇作提取溶劑時(shí),毛蕊花糖苷含量較高,且對(duì)不同濃度甲醇溶液做比較,最終選定80%甲醇溶液作提取溶劑。對(duì)超聲提取時(shí)間確定時(shí),發(fā)現(xiàn)超過半小時(shí),毛蕊花糖苷含量不再增加,故提取時(shí)間選定為半小時(shí)。

3.2 含量限度確定

本實(shí)驗(yàn)所用的熟地配方顆粒規(guī)格為4g/袋,相當(dāng)于飲片10g,按2010版《中國(guó)藥典》規(guī)定熟地中毛蕊花糖苷含量不得少于0.02%,則熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的含量不得少于500μg·g-1,而實(shí)驗(yàn)測(cè)出三個(gè)批號(hào)熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的平均含量為486.35,484.11,488.26μg·g-1,均小于500μg·g-1,查閱相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]得出毛蕊花糖苷不穩(wěn)定,在熟地配方顆粒制備過程中含量減少,建議以毛蕊花糖苷含量不得少于400μg·g-1為熟地配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

本實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便,精密度高,穩(wěn)定性良好,能準(zhǔn)確測(cè)出熟地中毛蕊花糖苷的含量,可用于熟地配方顆粒的質(zhì)量控制與綜合評(píng)價(jià)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010:115-116.

[2] 吳培培,閆明,霍仕霞.苯乙醇苷類化合物的研究進(jìn)展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,30(10):1316-1319.

[3] 尚偉慶.地黃炮制過程中毛蕊花糖苷變化的研究[J].新中醫(yī),2014,46(5):209-211.

[4] 王宏潔,金亞紅,李鵬躍,等.鮮、生、熟地黃藥材中3種活性成分含量的比較[J].中國(guó)中藥雜志,2008,33(15):1923-1925.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2015-01-09

王科鋒(1990-),男,湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥師,研究方向分為臨床藥學(xué)。

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1673-2197(2015)11-0040-02

10.11954/ytctyy.201511016