朱 秋

(駐馬店市第一中醫(yī)院，河南 駐馬店 46300)

?

HPLC法測定西洋參不同部位中人參皂苷含量

朱 秋

(駐馬店市第一中醫(yī)院，河南 駐馬店 46300)

目的：通過化學(xué)方法測定西洋參中人參皂苷的資源含量，確保西洋參中的人參皂苷資源被充分利用，為那些以中藥材為原料的制藥工業(yè)提供可靠數(shù)據(jù)[1-4]。方法：使用高效液相色譜法測定西洋參不同部位的人參皂苷含量。結(jié)果：該方法成功測定西洋參不同部位的人參皂苷成分含量。結(jié)論：高效液相色譜法準(zhǔn)確、迅速、簡便，可作為評價人參屬植物質(zhì)量的有效分析方法。

西洋參；人參皂苷；含量測定；產(chǎn)地差異

北美花旗參(西洋參)是多年生草本植物，原產(chǎn)于北美東北硬木森林[4-5]。西洋參的藥用價值主要是由于其含有人參皂苷的成分[6]，參的各個部位中都含有相關(guān)的成分，目前已知種類約有30多種[4]，種類比較復(fù)雜。單獨對某種西洋參進(jìn)行人參皂苷的分析目前已經(jīng)較為普遍[1]，但是對于西洋參不同部位的人參皂苷分析目前尚未見到。根據(jù)之前的研究數(shù)據(jù)和經(jīng)驗，本次研究主要選擇測試3種皂苷的Rb1、Rc和Rg1在不同部位的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器與試藥Agilent 1100 Series高效液相色譜儀；色譜柱為德國Nucleosil-C18(4.6mm×150mm，5μm)；TGL-16g高速離心機(jī)，BUCH I旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。乙腈、甲醇、正丁醇為色譜純；Milli Q超純水。

1.2 材料

西洋參產(chǎn)地東北吉林。樣品提取，干燥的根、莖、葉樣品通過植物粉碎和篩分以獲得均勻樣品，稱重以后，取3份，每份約1 500mg，精密稱定，用氯仿90mL脫脂，過濾，再用甲醇120mL提取24h，過濾，蒸干，水溶，然后在水飽和正丁醇狀態(tài)下萃取，回收溶劑，將正丁醇層提取物轉(zhuǎn)移到10mL量瓶中，用正丁醇定容至刻度線，備用[5-6]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

精密稱定,取人參皂苷Rb1、Rc和Rg1適量,加甲醇制成濃度分別為0.984、1.020、0.992 g/L的溶液,作為對照溶液儲備液,密封置冰箱保存。主要檢測成分為人參皂苷，分別取對照品儲備液0.08、0.16、0.32、0.64、1.28 mL，用流動相定容到2mL，搖勻，從而得到一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。通過連續(xù)3次等量進(jìn)樣，每次20μL，分析和記錄色譜數(shù)據(jù)，以對照品濃度( μg/L)為橫坐標(biāo)(X)，對照品的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，得到以下人參皂苷的回歸方程。根的各組分方程：Rb1:Y=3575.98X +8.09，R=0.9999；Rc:Y=3141.08X +18.11，R=0.9991；Rg1:Y=6101.07X-9.98，R=0.9997；莖的各組分方程:Rb1:Y=3489.98X-2.88，R=0.9996，Rc:Y=2971.69X +87.07，R=0.9997；Rg1:Y=5891.07X +1.97，R=0.9994；葉的各組分方程:Rb1:Y=2095.57X-76.91，R=0.9995；Rc:Y=2671.69X+17.98，R=0.9998；Rg1:Y=4891.85X +11.44 ，R=0.9991。

2.2 人參皂苷含量測定

在上述色譜條件下,分別進(jìn)樣10μL,測定不同部位藥材中人參皂苷含量。人參藥材主根中人參皂苷Rb1含量較高,而Rc、Rg1含量相對較低,莖部位中，Rc較其他部位要高而Rb1高于葉中的含量卻明顯低于根部，同時Rg1也略高于其他部位；在葉部位中含量均較低，但是這可能與葉的材質(zhì)有關(guān)，一些葉部位的提取率較低。

2.3 精確度和重復(fù)性測試

精確度采用6次重復(fù)的實驗數(shù)據(jù)采集，得到的可重復(fù)性數(shù)據(jù)為：0.22%、0.18%、0.19%、0.28%、0.33%、0.15%、0.21%、0.41%、0.42%，均處于較好的可控范圍內(nèi)。重復(fù)性測試，通過同一批樣本不同時間點檢測，時間間隔為24、48、72h，RSD值為1.7%，屬于正常范圍。另外，對于樣本的回收率基本可以達(dá)到95%以上。

2.4 西洋參不同部位人參皂苷含量比較

每次將20μL樣本加入HPLC中，重復(fù)3次，取平均值進(jìn)行比對。我們通過2次不同進(jìn)樣量的測試，最終基本驗證了之前的數(shù)據(jù)，各部位的基本含量與10μL進(jìn)樣量的數(shù)據(jù)基本可以進(jìn)行比較歸納，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 不同部位人參皂苷的含量 (mg/g)

3 討論

人參皂苷是西洋參的重要有效成分，皂苷含量的高低直接決定了西洋參的品質(zhì)和價格，也是工業(yè)制藥和科研的重要參考數(shù)據(jù)。已知人參皂苷有30余種，其結(jié)構(gòu)均比較類似，都含有由30個碳原子排列成4個環(huán)的甾烷類固醇核，其中比較主要的是達(dá)瑪烷類型，包括人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2及糖苷基PD，Re、Rg1、Rg2、Rh1及糖苷基PT。由于結(jié)構(gòu)極為類似，因此也給實際操作中的分析提出了更高要求。目前比較實用的方法為HPLC法檢測，也有其他檢測方法聯(lián)用，如HPLC-ELSD。無論哪種方法檢測，最主要的目的是為了分選出不同種類人參皂苷的含量。我們有選擇性地測試了3種主要的皂苷含量，最主要的目的是為了驗證不同部位的皂苷含量是否有差別。從實驗結(jié)果觀察，我們發(fā)現(xiàn)西洋參根部含有較高的人參皂苷Rb1，莖則含有較高的Rc，但是3個部位的Rg1含量都不高，有專家認(rèn)為Rg1的含量可能在西洋參的蘆頭上含量較高。西洋參中其他種類的皂苷并沒有在此一一檢測。從數(shù)據(jù)上分析，我們發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的西洋參人參皂苷含量均有較大差別，這可以考慮到人參藥材中皂苷類成分含量受生長環(huán)境影響較大，西洋參的活性成分含量與其生產(chǎn)地的多種因素有關(guān)，如經(jīng)緯度、無霜期、日光照射時間、降水量、土壤特性等；另外，采收季節(jié)、采收年限、干燥和保存的方法也有非常重要的影響作用。本實驗分析的3種部位人參皂苷含量具有顯著特征,可作為區(qū)分道地和非道地人參藥材的初步依據(jù)，同時也可以幫助區(qū)分市場上不同種類產(chǎn)品的優(yōu)劣和真?zhèn)巍Ｄ壳拔覀儗τ谖餮髤⒃碥蘸颗c外界因素的相關(guān)性分析還處于初級階段，在下次建立回歸方程的時候，我們會考慮更多的其他因素，如，西洋參的具體產(chǎn)地，西洋參的參齡和保存方法等。這將為參類制品的種植、生產(chǎn)、制備和保存提供重要的參考依據(jù)。

[1] 蔡治綱,張莉偉,龔曉英.不同來源西洋參中人參總皂苷及人參皂苷Rb1含量的比較[J].中草藥,2002,33(2):121-122.

[2] 王旭.引種栽培西洋參中人參皂苷Rb1含量的比較分析[J].首都醫(yī)藥,2004,11(6):31-32.

[3] 陳軍輝,謝明勇,張中偉,等.西洋參皂苷的HPLC測定及不同提取方法比較[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2006(18):120-125.

[4] 王玉堂.人參中人參皂苷的提取、分離和測定[D].長春：吉林大學(xué),2008.

[5] 郜玉鋼,郝建勛,臧埔，等.高效液相色譜法測定農(nóng)田人參中9種人參皂苷單體含量[J].食品科學(xué)，2012(2):189-193.

[6] 林美妤,劉海宇,劉金平，等.人參皂苷的化學(xué)研究進(jìn)展[J].人參研究,2011,23(4):43-46.

(責(zé)任編輯：余 婷)

2015-04-14

朱秋(1972-)，男，河南省駐馬店市第一中醫(yī)院主管中藥師，研究方向為中藥鑒別與中藥制劑。

R284

A

1673-2197(2015)19-0023-02

10.11954/ytctyy.201519010