王學(xué)靜，陳立功，魏忠華，梁變金，臧素敏，劉聚祥

（1.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北保定071000；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)部動物疫病病原生物學(xué)華北科學(xué)觀測實驗站，河北保定071001；3.河北省贊皇天然農(nóng)產(chǎn)品開發(fā)有限公司，河北贊皇051230；4.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河北保定071001）

放養(yǎng)與籠養(yǎng)的太行雞新城疫與禽流感免疫抗體監(jiān)測

王學(xué)靜1，陳立功2，魏忠華1，梁變金3，臧素敏4，劉聚祥2

（1.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北保定071000；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)部動物疫病病原生物學(xué)華北科學(xué)觀測實驗站，河北保定071001；3.河北省贊皇天然農(nóng)產(chǎn)品開發(fā)有限公司，河北贊皇051230；4.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河北保定071001）

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒 (Newcastle disease virus，NDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病，曾屢次形成世界范圍的大流行，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大損失。禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒所引起的各種家禽及野生禽類的感染和/或疾病綜合征。禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)屬于正黏病毒科、A型流感病毒屬，根據(jù)病毒表面糖蛋白血凝素蛋白(Hemagglutinin，HA)和神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase，NA)的抗原性不同，可將AIV分為不同的亞型，目前已發(fā)現(xiàn)有16種HA亞型和9種NA亞型。根據(jù)AIV致病性不同可將AI分為高致病性、中致病性和非致病性AI三類：家禽感染AI病毒后，有的不表現(xiàn)明顯的癥狀，有的表現(xiàn)為呼吸道感染和產(chǎn)蛋嚴重下降，嚴重者甚至引起全身性感染，導(dǎo)致100%死亡。根據(jù)靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）將AIV劃分為高致病性禽流感病毒 (Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV)、低致病性禽流感病毒 (Lowly pathogenic avian influenza virus，LPAIV)和無致病性禽流感病毒 (Non-pathogenic avian influenza virus，NPAIV)。目前所分離到的HPAIV主要是H5和H7亞型，特別是由H5N1亞型毒株引起的AI，家禽的發(fā)病率和死亡率都很高，危害巨大。從2004年起，《中華人民共和國動物防疫法》規(guī)定對HPAI實行強制免疫政策，這是預(yù)防、控制HPAI流行的重要舉措。HA是AIV的主要保護性抗原，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，保護免疫動物不出現(xiàn)臨床癥狀和死亡，這些抗體在體內(nèi)的保護性具有HA亞型特異性，而且保護效力可持續(xù)35周以上。因此，中和抗體可以作為雞群抗AIV抗體水平及總體免疫水平的參考指標，在生產(chǎn)上可以通過監(jiān)測雞群抗AIV的中和抗體水平來制定合理的免疫程序，以達到有效預(yù)防控制AI的目的。

筆者對放養(yǎng)與籠養(yǎng)的太行雞血清中的ND抗體、H5、H9亞型AIV血凝素抗體進行了監(jiān)測，以期為太行雞ND、AI防控工作提供有益的參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗動物及血清

選取同批次放養(yǎng)和籠養(yǎng)的太行雞，分別于84日齡和126日齡采集抗凝血，析出血清用于抗體水平監(jiān)測，每批次放養(yǎng)與籠養(yǎng)雞各60只，公母各半。

1.1.2免疫程序

60～115日齡的太行雞免疫程序見表1。

表1 試驗太行雞免疫程序

1.1.3抗體監(jiān)測試劑

雞新城疫血凝抑制試驗抗原 （批號: 20140116）和雞新城疫血凝抑制試驗陽性血清（批號:20130904）為青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)。禽流感病毒H5（Re-4）亞型HI試驗用抗原（批號:2013001）及陽性血清（批號:2013001）；禽流感 H5（Re-6）亞型 HI試驗用 （批號: 2013003）抗原及陽性血清（批號:2013002）；禽流感病毒H9亞型HI試驗用抗原（批號:2013001）及陽性血清（批號:2013001），均為哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。無菌采取健康公雞血并用肝素抗凝，按常規(guī)制備1%紅細胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2方法

1.2.1血凝抑制(Hemagglutination-inhibition,HI)試驗

所有血清經(jīng)56℃滅活30分鐘，分別參照《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2008）、《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936-2003)規(guī)定的微量法，采用HI試驗進行血清中ND抗體、禽流感免疫抗體檢測。

1.2.2判定標準

以能完全抑制4個單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度，即血清效價。血清效價的判斷標準，HI抗體效價≥4 log2為抗體陽性，＜4log2為抗體陰性。

2 結(jié)果與分析（詳見表2）

2.1 ND抗體監(jiān)測結(jié)果

84日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的ND抗體變異系數(shù)分別為5.47%、4.64%，平均滴度分別為9.42 log2、9.75 log2。126日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的ND抗體變異系數(shù)分別為11.76%、10.73%，平均滴度分別為 8.50 log2、9.00 log2。綜合變異系數(shù)、滴度范圍和平均滴度考慮，籠養(yǎng)的太行雞的ND免疫抗體水平高于放養(yǎng)的太行雞。

2.2 H9亞型禽流感抗體監(jiān)測結(jié)果

84日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的H9亞型禽流感抗體變異系數(shù)分別為2.91%、3.96%，平均滴度分別為9.92 log2、9.83 log2。126日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的H9亞型禽流感抗體變異系數(shù)分別為2.91 %、4.94%，平均滴度分別為9.92 log2、9.69 log2。隨著免疫時間的延長，H9亞型禽流感免疫抗體水平下降不明顯。綜合變異系數(shù)、滴度范圍和平均滴度考慮，放養(yǎng)的太行雞的H9亞型禽流感免疫抗體水平高于籠養(yǎng)的太行雞。

2.3 H5亞型（Re-4）禽流感抗體監(jiān)測結(jié)果

表2 太行雞抗體檢測結(jié)果

84日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的 H5亞型（Re-4）禽流感抗體變異系數(shù)分別為9.36%、12.16 %，平均滴度分別為9.25log2、9.17log2。126日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的H5亞型（Re-4）禽流感抗體變異系數(shù)分別為11.58%、17.30%，平均滴度分別為7.67log2、7.00log2。隨著免疫時間的延長，H5亞型（Re-4）禽流感免疫抗體水平顯著下降。綜合變異系數(shù)、滴度范圍和平均滴度考慮，放養(yǎng)的太行雞的H5亞型（Re-4）禽流感免疫抗體水平高于籠養(yǎng)的太行雞。

2.4 H5亞型（Re-6）禽流感抗體監(jiān)測結(jié)果

84日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的 H5亞型（Re-6）禽流感抗體變異系數(shù)分別為 27.63%、36.07%，平均滴度分別為6.75log2、6.42log2。126日齡時，放養(yǎng)和籠養(yǎng)太行雞的H5亞型（Re-6）禽流感抗體變異系數(shù)分別為26.65%、45.53%，平均滴度分別為4.33 log2、5.44log2。隨著免疫時間的延長，H5亞型（Re-6）禽流感免疫抗體水平顯著下降，有的個體抗體呈陰性。綜合變異系數(shù)、滴度范圍和平均滴度考慮，放養(yǎng)的太行雞的H5亞型（Re-6）禽流感免疫抗體水平高于籠養(yǎng)的太行雞。

3 討論

目前，禽流感和新城疫仍然是威脅我國養(yǎng)禽業(yè)的兩種重大疫病。疫苗免疫接種是我國目前預(yù)防和控制禽類兩種重大疫病的措施之一。通過對新城疫和禽流感疫苗免疫產(chǎn)生的抗體進行監(jiān)測，根據(jù)免疫抗體水平，確定雞群合理的加強免疫或補免時間，從根本上消除雞群免疫保護空白期，確保雞群有效免疫保護率最高。

兩次監(jiān)測結(jié)果表明，放養(yǎng)、籠養(yǎng)太行雞的ND和H9亞型禽流感免疫抗體平均滴在8 log2以上，抗體變異系數(shù)均在20%以內(nèi)，ND和H9亞型禽流感免疫接種效果較好。

兩次監(jiān)測結(jié)果表明，在接種疫苗后2周和8周，放養(yǎng)與籠養(yǎng)太行雞的H5亞型（Re-4）禽流感免疫抗體平均滴度分別在9 log2以上、7 log2以上，抗體變異系數(shù)均在20%以內(nèi)，H5亞型（Re-4）禽流感免疫接種效果較好。

兩次監(jiān)測結(jié)果表明，在接種疫苗后2周和8周，放養(yǎng)與籠養(yǎng)太行雞的H5亞型（Re-6）禽流感免疫抗體平均滴度分別在6 log2以上、4 log2以上，但抗體變異系數(shù)均高于20%，H5亞型（Re-6）禽流感免疫接種效果不理想，且發(fā)現(xiàn)有的個體H5亞型（Re-6）禽流感免疫抗體為陰性。因此，監(jiān)測的太行雞存在一定的禽流感隱患，必須盡早加強免疫或補免，才有可能抵御野毒感染。

此外，抗體監(jiān)測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，籠養(yǎng)的太行雞的ND免疫抗體水平高于放養(yǎng)的太行雞；放養(yǎng)的太行雞的H9亞型、H5亞型禽流感免疫抗體水平高于籠養(yǎng)的太行雞。不同飼養(yǎng)模式的太行雞的ND免疫抗體和禽流感免疫抗體水平比較結(jié)果不一致，原因有待于進一步調(diào)查。

生態(tài)放養(yǎng)雞腸道菌群特性研究（13226627）；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項基金資助；河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蛋雞產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊專項資金資助。

器官性能一定程度都存在改善效果，尤其對屠宰性能指數(shù)效果最好,屠宰率和全凈膛率分別提高2.04%和3.89%。；與使用抗生素組比較，差異不顯著，但在一定程度上表現(xiàn)出較好的優(yōu)勢。試驗中添加綠色添加劑益生素、酶制劑和酸化劑的Ⅱ組、Ⅲ組都有改善AA肉雞生產(chǎn)性能、屠宰性能、免疫性能的作用，但0.46%益生素+2%酶制劑+0.45%酸化劑組合使用綜合效果最好。為了適應(yīng)人們對綠色食品的需要，同時減少抗生素在肉仔雞飼料中的應(yīng)用，0.46%益生素+2%酶制劑+0.45%酸化劑組合在肉仔雞生產(chǎn)中應(yīng)用非常必要，并且值得推廣。