孫霞 韓淑娟 紀(jì)向虹 王茜

視黃醇結(jié)合蛋白4（Retinol binding protein，RBP4）是2005年首先由美國學(xué)者Yang等[1]最新發(fā)現(xiàn)的由肝臟、脂肪細(xì)胞分泌的與肥胖有關(guān)的脂肪細(xì)胞因子（adipokine），RBP4是一種血漿視黃醇結(jié)合蛋白，是全反式視黃醇即維生素A的運載蛋白，其主要功能是進(jìn)行維生素A的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運代謝。在轉(zhuǎn)運過程中，視黃醇結(jié)合蛋白與視黃醇、甲狀腺素運載蛋白形成三聚體，將視黃醇運送至體內(nèi)特定的靶組織和器官，發(fā)揮其主要作用，臨床已用血清RBP4水平變化來早期診斷肝腎疾病。近年來已有研究表明，RBP4與胰島素抵抗的發(fā)生關(guān)系密切，但RBP4水平在GDM孕婦血清中的變化有不同結(jié)論[2]。能否通過控制RBP4水平來干預(yù)GDM發(fā)展，以提供新的研究方向。本研究選擇2013年1-12月在本院產(chǎn)科產(chǎn)檢的孕婦100例，檢測視黃醇結(jié)合蛋白4在妊娠期糖尿病患者和正常孕婦的不同孕周的血清及新生兒臍血中的含量變化，了解RBP4與GDM的關(guān)系，現(xiàn)具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1-12月在本院產(chǎn)科產(chǎn)檢的妊娠期糖尿病孕婦50例作為試驗組，正常孕婦50例作為對照組。所選孕婦均無妊娠期高血壓、冠心病、肝腎功能損害、感染等合并癥，并且年齡、體質(zhì)指數(shù)、采血孕周等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組一般資料比較（x-±s）

1.2 妊娠期糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照IADPSG2010診斷方法及標(biāo)準(zhǔn)，在妊娠24~28周首先檢查FPG，F(xiàn)PG≥5.1 mmol/L，可診斷。4.4 mmol/L≤FPG<5.1 mmol/L，則行OGTT：空腹測血糖1次，然后5 min內(nèi)口服75 g糖，服糖后l、2 h分別測血糖，血糖判定標(biāo)準(zhǔn)為5.1、10.0、8.5 mmol/L，如血糖有1項達(dá)到或超過正常值可診斷為GDM，3項均正常為NGT。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 于孕31~33周（Ⅰ）、37~41周（Ⅱ）采取孕婦空腹肘靜脈血，產(chǎn)后即刻采取足月新生兒臍血（Ⅲ），孕婦采血前3 天正常飲食與作息，每天碳水化合物攝入量在150 g以上。采血前晚要求禁食12 h，晨起8點抽取空腹靜脈血，靜置2 h使充分凝固，以1000 r/min離心10 min，取上清液（血清）分裝，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩５珣?yīng)避免反復(fù)凍融，-80 ℃不應(yīng)超過1個月，標(biāo)本溶血會影響結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不應(yīng)進(jìn)行此項檢測。所有血樣統(tǒng)一編號保存，各項指標(biāo)均統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.2 實驗方法 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定血清RBP4水平，ELISA試劑盒購自美國DR公司，批內(nèi)差異<57%。實驗開始前，各試劑均平衡至室溫，嚴(yán)格按照說明書將標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋。分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓變?nèi)加樣品稀釋液100 μL，其他孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 μL，注意將樣品加于酶標(biāo)板底部，不觸及孔壁，輕輕搖動混勻，避免氣泡，用酶標(biāo)板覆膜，37 ℃溫育2 h。棄去液體，甩干，每孔加臨用前配制的檢測溶液A工作液100 μL（生物素化抗體溶液），酶標(biāo)板覆膜，37 ℃溫育1 h。棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1~2 min，甩干。每孔加臨用前配制的檢測溶液B工作液100 μL（HRP酶結(jié)合物溶液），酶標(biāo)板覆膜，37 ℃溫育1 h。棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次。每孔加底物溶液90 μL，酶標(biāo)板覆膜，37 ℃避光顯色，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3~4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3~4孔梯度不明顯時終止。以與底物液的加入順序相同的順序加終止液50 μL終止反應(yīng)，藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。提前設(shè)定好酶標(biāo)儀（美國BIORAD iMark型全自動酶標(biāo)儀），在450 nm波長測量，直接讀出檢測樣本的濃度值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，各指標(biāo)均服從近似正態(tài)分布，計量資料以（±s）表示，方差齊比較采用t檢驗，方差不齊比較采用t’檢驗，多個樣本均數(shù)比較采用方差分析，RBP4與其他臨床指標(biāo)指標(biāo)間的關(guān)系判定分別進(jìn)行直線相關(guān)分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清RBP4水平比較 兩組血清RBP4比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=1680.85，P<0.001）；不同采血時段血清RBP4比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=7285.51，P<0.001）；兩組血清RBP4的差值在不同采血時段逐漸增加，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=1381.70，P<0.001），見表 2~3。

表2 兩組血清視黃醇結(jié)合蛋白4水平比較（x-±s）μg/mL

表3 重復(fù)測量方差分析結(jié)果表

2.2 不同采血時段兩兩比較 隨著孕周的增加RBP4增加，不同時間段兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；試驗組RBP4增加的幅度大于對照組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），見表4。

表4 不同采血時段兩兩比較結(jié)果表

2.3 試驗組血清RBP4水平與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析 血清RBP4水平與FBG、FINS、HOMA-IR均呈明顯正相關(guān)（P<0.001），見表5。

表5 試驗組血清RBP4水平與其他臨床指標(biāo)的直線相關(guān)性分析

3 討論

GDM是指妊娠期發(fā)現(xiàn)或首次發(fā)生的不同程度的糖代謝異常，GDM與多種母兒并發(fā)癥密切相關(guān)，GDM對母嬰的危害極大，易導(dǎo)致血管病變，而發(fā)生胎兒宮內(nèi)窘迫、巨大兒、子癇、胎盤早剝、早產(chǎn)等并發(fā)癥。而GDM早期診斷與治療尤其重要，人們對它研究了多年，但迄今為止GDM的發(fā)病機(jī)制尚不清，有學(xué)者提出，GDM可能是多種因素起作用而引起的一種疾病，研究脂肪因子，可進(jìn)一步探討GDM的發(fā)病機(jī)制，視黃醇結(jié)合蛋白4是2005年首先由美國學(xué)者Yang等[1]發(fā)現(xiàn)的由肝臟、脂肪細(xì)胞分泌的脂肪細(xì)胞因子（adipokine），RBP4位于染色體10q23-q24，由RBP4基因編碼，主要功能是進(jìn)行維生素A的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運代謝。RBP4屬于血漿視黃醇結(jié)合蛋白，RBP4與肥胖、糖尿病、肝病、心腦血管病等的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[3-5]。近年來，國內(nèi)外許多學(xué)者對GDM婦女RBP4和血糖等指標(biāo)進(jìn)行了研究，已有研究證實，RBP4與胰島素抵抗關(guān)系密切[2]。Chan等[6]研究已發(fā)現(xiàn)，RBP4水平在妊娠期糖尿病孕婦血清中高于正常，任利容等[7]也認(rèn)為GDM孕婦血清RBP4水平明顯升高，RBP4可能參與了GDM孕婦糖代謝紊亂，劉靜婧等[8]研究發(fā)現(xiàn)RBP4可能在T2DM發(fā)生發(fā)展中起作用。本研究顯示隨著妊娠的進(jìn)展，血清RPB4水平呈上升趨勢，妊娠期糖尿病患者血清RPB4水平各時期均高于正常妊娠組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），與上述研究結(jié)果一致。但也有學(xué)者得出相反結(jié)論，Inoue等[9]的研究發(fā)現(xiàn)RBP4水平在早孕、中孕、晚孕時無明顯差異；Krzyzanowska等[10]的研究結(jié)果表明孕29周時，RBP4水平在GDM患者血清中明顯低于健康孕婦，而血清RBP4和視黃醇的比值卻顯著高于健康孕婦，并且血清RBP4水平與孕婦的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)呈正相關(guān)；Graham等[11]研究發(fā)現(xiàn)血清RBP4水平與胰島素抵抗存在顯著的正相關(guān)性，在GDM復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制中，RBP4可能參與了孕婦血糖的調(diào)節(jié)，與GDM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。測量RBP4濃度會有助于預(yù)測婦女發(fā)展為妊娠糖尿病的風(fēng)險[12]。但其具體的作用有待于進(jìn)一步的研究，結(jié)合GDM其他脂肪細(xì)胞因子的改變，對揭示脂肪因子與GDM的關(guān)系有一定幫助。王馳等[13]認(rèn)為RBP4推動了對妊娠糖尿病、胰島素抵抗的研究，并已成為現(xiàn)今最受人關(guān)注的脂肪因子之一。張博等[14]認(rèn)為作為一種脂肪細(xì)胞因子，RBP4與胰島素抵抗之間的密切關(guān)系是研究的重點和難點，明確其具體機(jī)制，將為糖脂代謝等相關(guān)問題展開新的思路，孫蕾芳等[15]研究顯示妊娠期糖尿病孕婦皮下脂肪組織RBP4水平高表達(dá)及血清RBP4高水平，可能是妊娠期糖尿病孕婦發(fā)生胰島素抵抗的機(jī)制之一，這些將對GDM發(fā)病機(jī)制的明確、GDM治療及后期隨訪與代謝綜合征的防治具有重要指導(dǎo)意義。

綜上所述，RBP4是體內(nèi)一種重要的轉(zhuǎn)運蛋白，主要起著結(jié)合、轉(zhuǎn)運視黃醇的作用，本研究顯示，RBP4水平在妊娠期孕婦血清中顯著高于對照組，隨著妊娠的進(jìn)展RBP4逐漸升高，新生兒臍血中含量最高，血清RBP4水平，可能對妊娠期糖尿病的篩查、預(yù)測及評估預(yù)后有一定意義，同時為GDM的診斷與治療提供新的理論依據(jù)。

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