周 彤，劉 穎，石英愛(ài)，張麗紅

（1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院a內(nèi)分泌科；b呼吸內(nèi)科，吉林長(zhǎng)春130021；2.吉林大學(xué)病理生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春130021）

腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物ALDH1和Ki67在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)和意義

周 彤1a，劉 穎1b，石英愛(ài)2＊，張麗紅2＊

（1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院a內(nèi)分泌科；b呼吸內(nèi)科，吉林長(zhǎng)春130021；2.吉林大學(xué)病理生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春130021）

腫瘤干細(xì)胞（Cancer Stem Cell，CSC）為存在于腫瘤組織中的數(shù)量極少、具有無(wú)限增殖潛能，可分化為腫瘤細(xì)胞，且對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移起決定性作用的細(xì)胞。乙醛脫氫酶1（aldehyde dehygeogenase1，ALDH1），是在ALDH基因家族指導(dǎo)下合成的一類酶，主要存在于肝臟與腎臟細(xì)胞中，在體內(nèi)主要發(fā)揮乙醛的代謝解毒功能，也與細(xì)胞的增殖、分化相關(guān)，可作為干細(xì)胞標(biāo)志物［1］；同時(shí)也是腫瘤起始細(xì)胞（cancer－initiating cells，CICs）的標(biāo)志物之一［2］。本研究以5例子宮內(nèi)膜單純性增生病例為對(duì)照，利用免疫組織化學(xué)方法觀察31例子宮內(nèi)膜腺癌的ALDH1和Ki67的表達(dá)，并探討二者表達(dá)的相關(guān)性，為以腫瘤干細(xì)胞為靶向診斷和治療子宮內(nèi)膜腺癌提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集吉林大學(xué)第一臨床醫(yī)院2013年10月2014年10月期間的子宮內(nèi)膜腺癌切除標(biāo)本，共計(jì)31例。包括：相對(duì)高分化腺癌16例；中分化腺癌8例；低分化腺癌7例。另有子宮內(nèi)膜單純性增生標(biāo)本5例；所有患者術(shù)前均未接受任何化療、放療等的輔助治療，臨床病例資料完整。

1.2 免疫組織化學(xué)染色（SP法）

鼠抗人ALDH1單克隆抗體購(gòu)于美國(guó)BD公司；兔抗人Ki67多克隆購(gòu)于北京中杉公司，按試劑盒說(shuō)明書操作。

1.3 結(jié)果判定

高倍鏡下（200×）每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，子宮內(nèi)膜單純性增生組織計(jì)數(shù)腺體上皮細(xì)胞，腺癌計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，共1000個(gè)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)，其中＞50%為＋＋＋（陽(yáng)性）；25%～50%為＋＋；＜25%為＋；無(wú)著色為－（陰性）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理。各組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

ALDH1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色顆狀。ALDH1蛋白在部分子宮內(nèi)膜單純性增生組織腺上皮中表達(dá)，少數(shù)病例陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)在間質(zhì)內(nèi)，表達(dá)率為40.0%（2／5）。子宮內(nèi)膜癌組織中ALDH1既可表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中，部分間質(zhì)內(nèi)亦可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)率為90.3%（28／31）；且隨著腫瘤分化程度的不同，從高分化到低分化，其陽(yáng)性表達(dá)率逐漸提高（見(jiàn)表1），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，組間差異有顯著性，P＜0.05。但ALDH1與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無(wú)關(guān)（P＞0.05）。Ki67主要表達(dá)在細(xì)胞核中，呈棕黃色顆粒。Ki67在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中不表達(dá)。而在子宮內(nèi)膜癌組織中Ki67表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核中，陽(yáng)性率為100%（見(jiàn)表1）。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，組間差異有顯著性，P＜0.0001。Ki67與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

子宮內(nèi)膜腺癌是女性高發(fā)的惡性腫瘤之一。早期患者無(wú)明顯癥狀，缺乏有效的診斷方法，療效及預(yù)后并不理想。近年來(lái)隨著干細(xì)胞研究的逐漸深入，腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)受到重視。目前關(guān)于子宮內(nèi)膜腺癌腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物的研究甚少，有研究報(bào)道稱CD133可能是其中之一［3］。

ALDH1屬醛脫氫酶家族成員之一，其主要功能就是在細(xì)胞內(nèi)參與催化氧化維生素A成為相應(yīng)視黃酸的不可逆反應(yīng)，而后者作為維甲酸核受體的配體，通過(guò)維甲酸受體信號(hào)通路直接調(diào)節(jié)基因表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞分化，減少增殖［4］。也有研究表明惡性腫瘤的發(fā)生依賴于一種數(shù)量很少的異質(zhì)性細(xì)胞群體，稱為腫瘤起始細(xì)胞（cancer－initiating cells，CICs），對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移起決定性作用，也是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療失敗的根源［1］。ALDH1在很多干細(xì)胞／前體細(xì)胞中表達(dá)，也可能是腫瘤起始細(xì)胞CICs的標(biāo)志物之一。有證據(jù)表明ALDH1高表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞個(gè)體預(yù)后差，且與腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)有關(guān)［5］。Wang等人發(fā)現(xiàn)ALDH1高表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系具有高度惡性生物學(xué)行為包括腫瘤發(fā)生、發(fā)展、耐藥及高侵襲力等［2］。故ALDH1可作為潛在的子宮內(nèi)膜腺癌的腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)記物。目前關(guān)于ALDH1在卵巢癌、乳腺癌中的表達(dá)研究相對(duì)較多［6］，可作為卵巢癌、乳腺癌、肺癌［7］以及其他腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物。但對(duì)于其在子宮內(nèi)膜腺癌的研究相對(duì)較少。本實(shí)驗(yàn)觀察了ALDH1在部分子宮內(nèi)膜單純性增生組織腺上皮中有表達(dá)；在子宮內(nèi)膜癌組織陽(yáng)性表達(dá)率則可達(dá)為90.3%，且隨著腫瘤分化程度的升高逐漸提高。但ALDH1表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無(wú)關(guān)（P＞0.05）。

細(xì)胞增殖抗原標(biāo)記物（Ki67）是一種與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，是目前公認(rèn)的有效評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖活性的重要標(biāo)記物，其表達(dá)的高低反映細(xì)胞增殖的程度［8］。本研究觀察了Ki67在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中不表達(dá)，而子宮內(nèi)膜腺癌腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率為100%，且Ki67與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等正相關(guān)（P＜0.05）。而通過(guò)對(duì)ALDH和Ki67兩者在子宮內(nèi)膜腺癌表達(dá)情況相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)無(wú)相關(guān)性，可能與統(tǒng)計(jì)病例數(shù)較少有關(guān)。

表1 ALDH1蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)（χ2檢驗(yàn)）

腫瘤干細(xì)胞理論認(rèn)為CSCs是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的根源所在。雖然CSCs在腫瘤組織中的數(shù)量極少，但其具有無(wú)限增殖潛能、高致瘤性、放化療抵抗性和高侵襲性，也是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療失敗的根源。已經(jīng)成為今后臨床腫瘤靶向治療的關(guān)鍵點(diǎn)。本研究為ALDH1作為子宮內(nèi)膜腺癌腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為子宮內(nèi)膜腺癌的治療提供了新的方向。

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2014－12－24）

1007－4287（2015）09－1532－02

吉林省衛(wèi)生廳科技計(jì)劃（2013ZC005）；吉林省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目（20150204066S）

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