金情政，李 欽，趙 吟（.浙江衢化醫(yī)院，浙江衢州 34004；.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，浙江杭州 3003）

?論著?

瓜蔞子油對糖尿病小鼠降血糖作用的研究

金情政1，李 欽2，趙 吟2（1.浙江衢化醫(yī)院，浙江衢州 324004；2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，浙江杭州 310013）

目的研究瓜蔞子油對糖尿病小鼠模型的降血糖作用及其可能的作用機制。方法ICR小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶（100 mg／kg）造成糖尿病模型，給予不同劑量的瓜蔞子油灌胃，另設(shè)正常對照組、模型對照組和陽性藥對照組，連續(xù)給藥4周，每周監(jiān)測小鼠體重及血糖，末次給藥18 h后，摘眼球采血，分離血清，用化學(xué)比色法測血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）含量，用放射免疫法測血清胰島素含量；另采用四氧嘧啶糖尿病小鼠對瓜蔞子油進行單次給藥的糖耐量測定。結(jié)果給予瓜蔞子油不同劑量（5、10、20 m l／kg）的各組小鼠體重增長略有加快，并使血糖值呈劑量依賴性下降，能顯著升高模型小鼠的血清胰島素含量，降低血清TC、TG、NO和NOS含量；從糖耐量試驗看，瓜蔞子油不同劑量組小鼠喂以淀粉后各時段血糖值呈劑量依賴性降低。結(jié)論 瓜蔞子油具有降血糖以及改善糖耐量的作用，其降血糖的作用可能與升高血清胰島素含量、降低血清的NO和NOS水平有關(guān)。

瓜蔞子油；降血糖；四氧嘧啶；糖耐量

瓜蔞子為葫蘆科植物栝樓（Trichosanthes kirilow ii Maxim）或雙邊栝樓（Trichosanthes rosthornii Harms）的干燥成熟種子。其性寒，味甘，含有皂苷、栝樓酸、草酸鈣、樹膠、樹脂及色素等成分，其中栝樓酸為不飽和脂肪酸，具有潤肺、化痰、滑腸的功效［1］?，F(xiàn)代研究表明瓜蔞子中含有油脂、甾醇、三萜及其苷，脂肪含量為26%，其中不飽和脂肪酸占66.5%，以栝樓酸（trichosanic acid，C18 H32 O2）為主。浙江省的栝樓資源十分豐富，民間（湖州、嘉興一帶）有將瓜蔞子炒熟或生食治療糖尿病的習(xí)慣。本實驗采用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型對瓜蔞子油的降血糖作用及其可能的作用機制進行了初步研究，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物 ICR小鼠，雌性，體重（22±2）g，由浙江省實驗動物中心提供，合格證：SCXK（浙）2004-0001號，飼養(yǎng)于浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物房（清潔級），溫度18～24℃，相對濕度60%～80%。全價顆粒飼料由浙江省實驗動物中心提供。

1.2 試藥 瓜蔞子油：棕褐色液體，自制，冷藏保存；制備方法：瓜蔞子藥材購于浙江省長興縣，于當?shù)貙⒐鲜V子粉碎后土法壓榨取油，出油率約20%。鹽酸二甲雙胍片（河南興源制藥有限公司，批號：20120918）。四氧嘧啶（Sigma公司，批號：045K2623）。血糖GLU測定試劑盒（寧波慈城生化試劑公司）。TG測試盒、TCH測試盒、考馬斯亮藍試劑盒、NO及NOS試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 BA-815型半自動生化分析儀（上海三科儀器有限公司）；低速臺式離心機（TL80-1型，江蘇天立醫(yī)療器械有限公司）；紫外可見分光光度計（UV2450型，日本島津公司）。

1.4 方法

1.4.1 瓜蔞子油對小鼠體重、血糖的影響［2，3］雌性ICR小鼠70只，隨機留取10只作為正常對照，其余尾靜脈注射四氧嘧啶（100 mg／kg），7 d后剪尾采血，按試劑盒方法測定空腹血糖值。篩選血糖含量＞15 mmol／L小鼠50只（另有小鼠死亡3只，血糖不合格7只），再按血糖值搭配分組，每組10只。分別給予瓜蔞子油5、10、20 m l／kg灌胃，設(shè)為低、中、高劑量組，給藥體積均為20 m l／kg，中、低劑量組用食用色拉油稀釋，正常對照及模型對照組給予等體積食用色拉油；陽性藥對照組（鹽酸二甲雙胍片研細，用蒸餾水超聲溶解后灌胃給藥，125 mg／kg）給予等體積食用色拉油。每天給藥1次，連續(xù)4周，每周測體重、血糖1次。

1.4.2 瓜蔞子油對小鼠生化指標的影響［4］給藥4周，于末次給藥18 h后摘除小鼠眼球取血，離心分離血清，測定血清總膽固醇（TC）、三酰甘油

（TG）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）含量。用放射免疫法測定血清胰島素。嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4.3 瓜蔞子油對小鼠糖耐量的影響［2］雌性ICR小鼠，尾靜脈注射四氧嘧啶（100 mg／kg），常規(guī)飼養(yǎng)2周后剪尾采血，測定空腹血糖，小鼠篩選方法及分組同“1.4.1”項。給予瓜蔞子油30 m in后，給予10%淀粉溶液20 m l／kg灌胃，給淀粉后0.5、1、2、3 h剪尾采血測定血糖，計算各組小鼠的血糖-時間曲線下面積。

2 結(jié)果

2.1 瓜蔞子油對小鼠體重、血糖的影響 從表1結(jié)果可見，四氧嘧啶靜脈注射造模后小鼠體重增長緩慢，瓜蔞子油中、高劑量組小鼠給藥4周的體重增長高于模型對照組（P＜0.05），鹽酸二甲雙胍片組給藥2周、4周的體重增長高于模型對照組（P＜0.05）。從表2結(jié)果可見，模型組小鼠各周次血糖值均高于正常對照組（P＜0.05），瓜蔞子油給藥后小鼠各周次血糖值均低于模型對照組，其中，中、高劑量組給藥后各周次血糖值與模型對照組比較均有顯著差異（P＜0.05），鹽酸二甲雙胍片組給藥后各周次血糖值與模型對照組比較均有顯著差異（P＜0.05）。表明瓜蔞子油對四氧嘧啶致糖尿病模型小鼠具有降血糖作用，并可以促進該模型小鼠的體重恢復(fù)。

表1 瓜蔞子油對小鼠體重的影響（±s，n＝10）

表1 瓜蔞子油對小鼠體重的影響（±s，n＝10）

*P＜0.05，與模型對照組比較

組別劑量（m l／kg）體重（m／g）給藥前給藥1周給藥2周給藥4周正常對照組0 30.5±2.4 31.8±2.5 32.3±3.1 33.0±3.5模型對照組0 25.4±2.7 25.0±2.9 26.1±3.2 27.0±3.0鹽酸二甲雙胍片組125 mg／kg 25.3±2.4 26.8±2.5 29.0±2.5*31.2±2.6*低劑量組5.0 25.3±3.1 26.1±2.9 26.6±2.7 28.1±3.1中劑量組10.0 25.7±2.1 26.5±2.3 27.1±2.6 30.2±2.7*高劑量組20.0 25.5±2.6 26.3±2.8 27.3±2.5 30.5±2.8*

2.2 瓜蔞子油對小鼠血清胰島素、TC、TG、NO及NOS含量的影響［5，6］從表3結(jié)果可見，與正常對照組比較，模型組小鼠血清胰島素、TC、TG、NO及NOS含量均有顯著差異（P＜0.05）；與模型對照組比較，瓜蔞子油中、高劑量組和鹽酸二甲雙胍片組小鼠血清胰島素含量均顯著提高（P＜0.05），而血清TC、TG、NO和NOS含量均顯著降低（P＜0.05）。

2.3 瓜蔞子油對小鼠糖耐量的影響 從表4結(jié)果可見，不同劑量瓜蔞子油使糖尿病模型小鼠口服淀粉后各時段的血糖值均有不同程度的降低，其中，中、高劑量組給淀粉后0.5～1 h時段血糖值與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示瓜蔞子油對糖尿病小鼠糖耐量有一定的改善作用。

表2 瓜蔞子油對小鼠血糖的影響（±s，n＝10）

表2 瓜蔞子油對小鼠血糖的影響（±s，n＝10）

*P＜0.05，與正常對照組比較；＃P＜0.05，與模型對照組比較

組別劑量（m l／kg）血糖值（cB／mmol?L－1）給藥前給藥1周給藥2周給藥4周正常對照組0 5.8±0.5 6.3±0.9 5.9±0.7 6.1±0.6模型對照組0 24.3±3.8*26.9±4.2*25.2±4.6*27.3±5.1*鹽酸二甲雙胍片組125 mg／kg 24.3±3.3＃21.6±3.1＃19.9±4.5＃19.8±4.1＃低劑量組5.0 24.5±4.0 23.7±4.9 23.8±4.5 24.9±3.8中劑量組10.0 24.4±3.1 23.1±5.2＃21.4±4.3＃22.0±4.0＃高劑量組20.0 24.5±4.1 21.8±3.4＃20.6±3.8＃21.9±4.4＃

表3 瓜蔞子油對小鼠生化指標的影響（±s，n＝10）

表3 瓜蔞子油對小鼠生化指標的影響（±s，n＝10）

*P＜0.05，與正常對照組比較；＃P＜0.05，與模型對照組比較

組別劑量（m l／kg）胰島素（zB／U?m l－1）TC（cB／mmol?L－1）TG（cB／mmol?L－1）NO（cB／μmol?L－1）NOS（cB／μmol?L－1）正常對照組0 24.08±3.51 3.13±0.39 0.59±0.13 4.15±1.68 18.12±2.68模型對照組0 19.30±2.83*7.91±0.42*2.75±0.23*9.13±3.12*23.05±3.85*鹽酸二甲雙胍片組125 mg／kg 22.73±3.03＃3.62±0.25＃1.29±0.15＃5.56±1.88＃20.19±3.55＃低劑量組5.0 20.01±2.36 6.17±0.49 2.01±0.16 8.22±3.80 22.11±2.55中劑量組10.0 21.44±3.12＃4.15±0.42＃1.54±0.22＃6.32±2.24＃19.56±1.89＃高劑量組20.0 22.58±2.12＃3.89±0.34＃1.36±0.15＃5.89±1.93＃19.33±2.13＃

表4 瓜蔞子油對小鼠糖耐量的影響（±s，n＝10）

表4 瓜蔞子油對小鼠糖耐量的影響（±s，n＝10）

*P＜0.05，與模型對照組比較

組別劑量（m l／kg）初始血糖（cB／mmol?L－1）給淀粉后血糖（cB／mmol?L－1）0.5 h 1.0 h 2 h 3 h曲線下面積（cB／mmol?L－1）模型對照組0 22.8±3.9 42.5±5.4 44.1±5.8 38.3±5.0 35.6±4.9 93.9±11.2低劑量組5.0 22.4±5.3 40.3±5.8 42.7±4.9 37.2±5.6 35.5±5.0 91.1±10.0中劑量組10.0 23.0±3.5 35.9±4.7*38.5±5.3*36.4±5.7 33.6±4.1 87.4±9.3高劑量組20.0 22.5±4.1 31.5±5.3*36.8±6.4*34.2±4.6 32.9±3.7 86.1±5.8

3 討論

目前，從天然藥物中發(fā)現(xiàn)的降糖成分有黃酮類、生物堿、多糖、皂苷、萜類和不飽和脂肪酸等［7-9］。瓜蔞子油中不飽和脂肪酸占總脂肪含量的93.3%～94.98%，含量最高的3種脂肪酸分別是：油酸（15.76%～25.46%）、栝樓酸（33.09%～39.15%）和亞油酸（33.77%～38.66%）［10］。其中，不飽和脂肪酸如海狗油ω-3多不飽和脂肪酸，能有效改善因高三酰甘油血癥引起的胰島素抵抗綜合征，提高機體對胰島素的敏感性［11］。有臨床試驗表明，糖尿病患者服用月見草油乳后空腹血糖顯著下降，總有效率可達77.76%［12］。因此，不飽和脂肪酸類成分可能是一類值得開發(fā)的重要的降血糖天然活性成分。

本實驗結(jié)果也顯示，中、高劑量瓜蔞子油能明顯降低糖尿病模型小鼠血糖及血清TC、TG、NO和NOS含量，明顯提高小鼠血清胰島素水平，并改善小鼠的糖耐量。由于瓜蔞子油是以栝樓酸為主的不飽和脂肪酸，因此推測其為起降血糖作用的主要成分。

有證據(jù)表明，糖尿病及其并發(fā)癥對機體造成的損害中NO起了重要作用［13］。在病理狀態(tài)下，炎癥刺激激活誘生型NOS表達和促進NO持續(xù)大量釋放，由此途徑產(chǎn)生的NO往往表現(xiàn)有細胞毒作用，四氧嘧啶產(chǎn)生的自由基直接損傷胰腺，破壞胰島β細胞，使體內(nèi)胰島素水平降低，血糖升高。本實驗顯示，四氧嘧啶致糖尿病小鼠血清的NO及NOS含量均顯著高于正常對照組（P＜0.05），提示四氧嘧啶損傷胰島β細胞的途徑可能與生成過量的NO、NOS有關(guān)。瓜蔞子油（特別是高、中劑量組）給藥4周后，小鼠的胰島素水平顯著提高，血清TC、TG、NO及NOS含量顯著降低，提示瓜蔞子油對糖尿病小鼠有一定的保護作用，作用機制可能與其促進胰島素的釋放及降低血清NO和NOS含量有關(guān)。有關(guān)瓜蔞子油的降血糖作用研究國內(nèi)外迄今少有報道。本實驗結(jié)果可為瓜蔞子這一傳統(tǒng)中藥的二次開發(fā)和臨床新用提供實驗依據(jù)。

［1］ 鐘 鑫.《藥性賦》釋義［J］.開卷有益：求醫(yī)問藥，2011，4：36.［2］ 張信岳，李 欽，陳愛君，等.活性糖元保降血糖作用實驗研究［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2008，13（8）：847-851.

［3］ Talukder FZ，Khan KA，Uddin R，etal.In vitro free radical scavenging and anti-hyperglycem ic activities of Achy ranthes aspera ex tract in alloxan-induced diabetic m ice［J］.D rug Discov Ther，2012，6（6）：298-305.

［4］ Robertson RP.Chronic oxidative stress as a central mechanism for glucose toxicity in pancreatic islet beta cells in diabetes［J］.JBiol Chem，2004，279（41）：2351-2354.

［5］ 王 煜，李秀鈞，鄔云紅，等.二甲雙胍對糖脂中毒的大鼠胰島β細胞胰島素分泌功能的保護作用［J］.華西醫(yī)學(xué)，2009，24（4）：920-922.

［6］ 黃先菊，王文英，王貴林，等.蛇葡萄素對2型糖尿病大鼠NO／NOS水平及抗氧化能力的影響［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2008，25（2）：95-98.

［7］ 王玉梅，胡燕芬，肖 懷.天然藥物中降血糖成分及作用機理的研究進展［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2008，17（7）：15-17.

［8］ 盧 威，秦曉改，王躍虎，等.二氫楊梅素對四氧嘧啶性糖尿病小鼠的降糖作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2011，27（4）：15-17.

［9］ 周燕文，時雪峰.柚皮苷對四氧嘧啶致糖尿病小鼠的降糖與抗氧化作用［J］.中國藥師，2012，15（3）：293-296.

［10］ 周賜琴.可食用栝樓籽營養(yǎng)成分分析與栝樓籽油O／W微乳液的制備［D］.杭州：浙江大學(xué)，2010.

［11］ 樂嘉靜，李湛君，徐康森.海狗油ω-3多不飽和脂肪酸對胰島素抵抗型糖尿病大鼠的降糖作用研究［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2005，10（3）：321.

［12］ 李國棟，范 偉，陸國浩，等.月見草油的研究概況［J］.藥學(xué)實踐雜志，2003，21（3）：171.

［13］ 董鳳芹，李 紅.一氧化氮和糖尿病血管病變［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，1999，15（3）：175.

Decreasing effect of semen Trichosanthis oil on blood glucose on diabeticm ice

JIN Qingzheng1，LIQin2，ZHAO Yin2（1.ZheJiang Quhua Hospital，Quzhou 324004，China；2.Institute of Metaria Medica，Zhejiang Academy of Medical Sciences，Hangzhou 310013，China）

ObjectiveTo study the hypoglycem ic activity of semen Trichosanthis oil（STO）and themechanism on diabeticmice.Methods The alloxan-induced diabeticmicewere divided into different groups and given different dose of STO by gavage for 4 weeks，the changes of body weight and fasting blood glucose were investigated every week.Blood serum was drawn to determ ine TC，TG，NO，NOSand insulin.In addition，the effectof STO on glucose tolerancewere also investigated in alloxan-induced diabeticmice.ResultsSTO can dose dependently reduce the levels of blood glucose and increase the body weightwhen itwas administrated orally at 5，10，20m l?kg－1，can increase insulin and lower TC，TG，NO，NOS in blood serum，and also can improve glucose tolerance in alloxan-induced diabeticm ice.ConclusionSTOmay potentiate the hypoglycem ic effect，and can improve glucose tolerance.The hypoglycem ic activity of STO may be related w ith increasing insulin and decreasing NO and NOS in blood serum.

semen Trichosanthis oil；hypoglycemic effect；alloxan；glucose tolerance

R285；Q946

A

1006-0111（2015）04-0324-04

10.3969／j.issn.1006-0111.2015.04.009

2014-09-14

2015-03-26［本文編輯］李睿旻

金情政，本科，主管中藥師.研究方向：中藥藥理學(xué)評價及臨床藥學(xué).Tel：（0570）3615363；E-mail：jinqingzheng111＠126.com

趙 吟，碩士研究生.研究方向：新藥臨床前藥理學(xué)評價及中藥注射劑不良反應(yīng)機制研究.Tel：（0571）88076765