蘇建友 ，孫寶蘭 ，沈榮春 ，宋紅花 ，倪紅兵 ，楊春蘭

（南通大學附屬醫(yī)院1醫(yī)學檢驗中心；2兒科實驗室，江蘇226001）

急性下呼吸道感染（ALRI）是嬰幼兒時期的常見病、多發(fā)病，嚴重威脅嬰幼兒的健康。據(jù)報道，ALRI是5歲以下兒童住院與門診就醫(yī)的主要原因，給家庭和社會帶來了嚴重負擔[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，全世界每年約有200萬5歲以下兒童死于肺炎，占該人群總死亡率的19%[2]。在我國，急性呼吸道感染占兒科門診的39.0%～65.5%，占兒科住院患兒的24.5%～65.2%[3]。自上世紀70年代以來，肺炎一直是我國5歲以下兒童的首位死因，我國每年5歲以下兒童因肺炎死亡者約35萬人，占全世界兒童肺炎死亡的10%[4]。因此，明確引起兒童呼吸道感染的病原，有效控制兒童呼吸道感染，對降低嬰幼兒死亡率、提升保護嬰幼兒健康具有重要意義。

本研究回顧性分析我院兒科2014年1月—12月收治的ALRI住院患兒752例常見呼吸道病毒檢測結(jié)果，以了解南通地區(qū)ALRI住院患兒呼吸道病毒感染狀況，為本地區(qū)兒童ALRI的防治提供有效依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 根據(jù)第7版諸福棠《實用兒科學》兒童ALRI診斷標準[5]，選取確診為ALRI的兒童752例為研究對象，其中男464例，女288例，年齡12天～12歲。臨床診斷：肺炎335例，毛細支氣管炎128例，支氣管炎伴喘息111例，支氣管炎無喘息141例，支氣管哮喘合并感染37例。

圖1 直接免疫熒光法7種呼吸道病毒鏡檢陽性結(jié)果（200×）

1.2 方法 采用直接免疫熒光法用D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screening ID Kit（D3試劑，美國HYBRID公司）測定。入選患兒均在診斷3日內(nèi)留取標本，采用植絨拭子經(jīng)鼻孔插入鼻腔到達鼻咽部采集鼻咽拭子標本，立即放入3mL 0.9%無菌氯化鈉注射液中送檢。操作步驟：將植絨拭子樣本在漩渦混勻器上混勻見渾濁后去掉植絨拭子。于離心管中2 000 r/min，離心 10min，棄上清液（留約 100～150 μL），吸管吹打混勻，制成混濁細胞懸液。取約20μL/孔將樣本分別點樣在專用載玻片上，干燥后冷丙酮中固定10min，取出晾干后于每個樣本中分別加D3試劑盒中7種單獨包裝的熒光標記單克隆抗體：流感病毒A 型、B 型（IVA、IVB）、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型（PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ）、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）1滴（25μL），37℃孵育 30min，PBS洗片 3次，風干后封片鏡檢。結(jié)果判斷：熒光顯微鏡（OLYMUS I×71）放大200倍讀片，1孔涂片細胞數(shù)大于100個認為此片有效，視野中找到≥2個完整細胞內(nèi)有蘋果綠色熒光判為陽性。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料組間差異性比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 各病毒檢出率及陽性分布 熒光顯微鏡下陽性細胞顯示明亮蘋果綠熒光，不同種類病毒感染的細胞在染色上略有差異：流感病毒（A型、B型）和腺病毒為胞漿顆粒型、細胞核均質(zhì)型（圖1A，B，G）；副流感病毒（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型）為胞漿顆粒型（圖 1C，D，E）；呼吸道合胞病毒為胞漿顆粒型，合胞體中亦可見小塊包涵物染綠色熒光（圖1F）。752例鼻咽分泌物標本中，7種呼吸道病毒抗原任一陽性的標本有317例，總檢出為42.1%，7種呼吸道病毒的病毒檢出率差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=725.31，P=0.00），見表 1。

表1 ALRI住院患兒7種呼吸道病毒檢出率及陽性分布構(gòu)成比（%）

2.2 不同年齡呼吸道病毒檢出率 在752份樣本中，0～6月患兒中有136例檢出病毒陽性，檢出率53.33%；6月～1歲患兒中有70例檢出病毒陽性，檢出率51.09%；1～3歲患兒中有87例檢出病毒陽性，檢出率34.25%；3～5歲患兒中有20例檢出病毒陽性，檢出率27.03%；5歲以上患兒中有4例檢出病毒陽性，檢出率12.50%。各年齡組的病毒檢出率差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=72.34，P=0.00），以 0～6 月、6月～1歲兒童的病毒檢出率最高。同時，隨著年齡的增長，ALRI兒童常見呼吸道病毒檢出率逐漸下降，見表2。

表2 不同年齡組病毒檢出情況

2.3 不同月份呼吸道病毒檢出率 南通地區(qū)全年均有常見呼吸道病毒感染，但有月份差異，常見呼吸道病毒感染高發(fā)于2014年1月、3月、12月份，檢出率分別為53.63%、58.75%、53.53%；而2014年6月份病毒檢出率最低為32.39%，其余月份病毒的檢出率接近。各月份病毒檢出率之間差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=32.25，P=0.00），見表 3。

表3 2014年不同月份病毒檢出情況

2.4 不同疾病呼吸道病毒檢出率 毛細支氣管炎病毒檢出率最高62.50%，其次分別為喘息型支氣管炎49.54%、支氣管哮喘合并感染45.94%、肺炎36.12%，支氣管炎無喘息的病毒檢出率最低，為31.21%。各組疾病檢出的最主要病毒均為RSV，但占比各有不同，毛細支氣管炎為80.00%，支氣管炎伴有喘息患兒RSV的感染率為50.00%，肺炎組檢出的RSV 57.02%，支氣管炎無喘息組RSV感染率47.72%，哮喘合并感染患兒檢出RSV占35.29%，見表4。

3 討 論

從傳染病預防控制的角度，對病原學和流行病學的病因了解至關(guān)重要，兒童90%以上的呼吸道感染是由病毒引起。研究表明，呼吸道病毒中呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus，RSV），流感病毒（influenza viruses，IFA）、副流感病毒（parainfluenza viruses，PIV）、腺病毒（adenovirus，ADV）是兒童急性呼吸道感染的主要病原[6]。目前我國雖有多個地區(qū)已對當?shù)爻Ｒ姾粑啦《靖腥具M行了研究，但由于ARI的病原學受地理位置、季節(jié)、流行病學狀況等多種因素影響，不同地區(qū)的病原學資料也不相同。我國許多地區(qū)仍長時間缺乏多種病原學的可靠檢測資料，且各地區(qū)的流行病學又不盡一致。因此，盡快建立各地區(qū)系統(tǒng)的兒童呼吸道感染病原譜成為當務(wù)之急。

表4 不同下呼吸道感染疾病病毒檢出情況 例

為了解南通地區(qū)兒童呼吸道感染常見病毒病原學特征，本研究對2014年在本院診斷為下呼吸道感染的患兒進行了常見7種呼吸道病毒檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)7種呼吸道病毒總檢出率為42.1%，高于北京地區(qū)（36.1%）、上海地區(qū)（38.1%）、重慶地區(qū)（36.2%），略低于溫州地區(qū)（43.3%）和山東地區(qū)（45.88%）[7]。這種差異的存在，提示呼吸道感染病毒病原體和地域有關(guān)，其次也與檢測方法以及所測病毒種類有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)RSV病毒檢出陽性率最高，其次為PIVⅢ，而其余5種相對較少，表明RSV是南通地區(qū)2014年急性下呼吸道感染兒童最主要的病毒病原。在兒童急性下呼吸道感染的病原體檢測中，國內(nèi)外研究均發(fā)現(xiàn)RSV陽性檢出率最高，其余病毒的檢出率則與地域有關(guān)。提示在各個地區(qū)RSV是兒童急性下呼吸道感染的重要病原。

以往報道表明冬、春季是病毒高發(fā)期，本研究也發(fā)現(xiàn)2014年1月、3月、12月是病毒感染的高峰期，說明兒童呼吸道病毒感染有一定的季節(jié)性，且以冬、春季為高發(fā)。本研究還發(fā)現(xiàn)不同年齡組患兒病毒的檢出率不同，以0～6月、6月~1歲年齡段病毒檢出率最高，并隨著年齡增加，其病毒的檢出率隨著降低。嬰兒病毒感染率高，與其機體免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，氣道粘膜上皮細胞缺乏分泌性IgA的保護有關(guān)。RSV在5歲以下兒童ALRI中為檢出率最高的病毒，且年齡越小檢出率越高[8]。

本研究同時發(fā)現(xiàn)不同下呼吸道疾病中病毒的檢出率存在差異，其中毛細支氣管炎的病毒檢出率最高，且下呼吸道感染伴有喘息的患兒中病毒檢出率（49.54%）明顯高于無喘息者（31.21%），提示病毒感染更容易導致喘息，增加喘息發(fā)作頻率[9]。七種呼吸道病毒中RSV在喘息患兒中檢出率最高，原因可能是RSV感染的患兒呼吸道常有上皮細胞和移行細胞浸潤，且有纖維素、痰液混合和水腫，從而導致患兒呼吸道明顯阻塞，引起喘息發(fā)作[10]。

綜上所述，2014年南通地區(qū)兒童急性下呼吸道感染的主要病毒病原體為RSV，病毒感染多見于5歲以下兒童，并隨著年齡增加而降低，于冬、春季好發(fā)，且不同下呼吸疾病病毒檢出率不同。

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