張曉麗 李春雷 肖國(guó)鋒 李 澤 趙雪聰 (河北北方學(xué)院生命科研究中心，河北 張家口 075000)

據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，乳腺癌發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，40～60歲之間、絕經(jīng)期前后的婦女發(fā)病率較高，僅約1% ～2%的乳腺患者是男性〔1〕。近來(lái)研究表明，乳腺癌與雌激素受體、肺耐藥蛋白、胸苷酸合成酶的表達(dá)有很大的關(guān)系〔2～5〕。雖然目前乳腺癌診斷研究進(jìn)展有很大提高，但是對(duì)如何準(zhǔn)確評(píng)估乳腺癌的預(yù)后及為臨床治療方案提供可靠的依據(jù)仍不夠理想。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)乳腺癌組織中雌激素受體(ER)、肺耐藥蛋白(LRP)、胸苷酸合成酶(TS)的表達(dá)水平，分析它們?cè)谌橄侔┙M織中表達(dá)水平與乳腺癌患者年齡、發(fā)生部位、病理組織學(xué)類型、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，探討聯(lián)合檢測(cè)ER、LRP和TS對(duì)乳腺癌診斷、治療和判斷預(yù)后的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集河北北方學(xué)院附屬醫(yī)院和張家口市第一醫(yī)院外科自2003～2010年乳腺癌手術(shù)切除腫瘤標(biāo)本130例，全部為女性，術(shù)前未做放化療，病理診斷明確?；颊咂骄挲g50.5(30～79)歲，中位年齡44歲。病理分型:非浸潤(rùn)性癌28例，浸潤(rùn)性小葉癌31例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌71例。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的72例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的58例。

1.2 標(biāo)本處理 取10 cm×10 cm×3 cm的新鮮標(biāo)本固定于10%中性甲醛內(nèi)(24 h)，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度4μm。裱片后37℃保存，待染。

1.3 免疫組化染色 兔抗LRP、ER多克隆抗體和TS單克隆抗體，SP免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB顯色試劑盒(均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。染色程序嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行，陽(yáng)性對(duì)照用已知的ER、LRP、TS陽(yáng)性切片，陰性對(duì)照用PBS代替Ⅰ抗。

1.4 結(jié)果判斷 陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色。ER和LRP陽(yáng)性部位主要集中在細(xì)胞核，TS陽(yáng)性部位在近胞膜處。根據(jù)整視野中陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例，以10個(gè)高倍鏡視野中陽(yáng)性細(xì)胞＞15%者為陽(yáng)性病例，否則為陰性病例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS14.0軟件行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用四格聯(lián)列表法。

2 結(jié)果

LRP和TS在乳腺腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)低于乳腺癌(P＜0.05)，ER在乳腺腺瘤和乳腺癌中的表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。在非浸潤(rùn)性乳腺癌內(nèi)LRP、TS陽(yáng)性率高于浸潤(rùn)性乳腺癌，但是只有TS有顯著性差異(P＜0.05)，而ER陽(yáng)性率低于浸潤(rùn)性乳腺癌(P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者LRP和TS表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P＜0.05)，而ER的表達(dá)率與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。這3種基因表達(dá)與乳腺癌患者年齡和位置無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。LRP、ER和TS的表達(dá)與乳腺癌生物學(xué)特性的關(guān)系見表1。

表1 LRP、ER和TS的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌生物學(xué)特征的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

乳腺癌的發(fā)生是遺傳與環(huán)境等多因素參與的復(fù)雜過(guò)程，目前主要認(rèn)為大多數(shù)腫瘤的發(fā)生可能涉及不同的基因突變或轉(zhuǎn)錄表達(dá)異常等，原癌基因激活、抑癌基因失活、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因失調(diào)等多基因參與的分子事件，啟動(dòng)并促發(fā)了乳腺癌的發(fā)生。

目前乳腺癌的治療以手術(shù)治療為主，內(nèi)分泌治療作為輔助治療。雌激素受體(ER)是存在于正常乳腺上皮細(xì)胞胞核內(nèi)的甾體激素受體，調(diào)節(jié)乳腺細(xì)胞的增殖和分化，其分子上有激素結(jié)合區(qū)及DNA結(jié)合區(qū)〔5〕。乳腺細(xì)胞癌變后仍能保持其激素依賴性生長(zhǎng)，臨床上激素依賴性乳腺癌約占全部乳腺癌的50%～60%〔6〕。隨著腫瘤細(xì)胞分化變差，受體表達(dá)降低，腫瘤對(duì)激素的依賴性生長(zhǎng)隨之降低，導(dǎo)致激素對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的調(diào)控作用也降低。研究表明ER率高患者，對(duì)各種治療有效尤其是對(duì)內(nèi)分泌治療敏感性高，可使腫塊縮小，癌細(xì)胞凋亡〔7〕。本實(shí)驗(yàn)顯示ER陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌術(shù)后5年生存率明顯高于陰性者，且術(shù)后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移較少。檢測(cè)ER表達(dá)程度對(duì)判斷預(yù)后，指導(dǎo)內(nèi)分泌治療具有一定的指導(dǎo)意義。

化學(xué)治療是乳腺癌術(shù)后常用的治療手段，但是對(duì)化學(xué)治療耐藥是導(dǎo)致乳腺癌治療失敗的主要原因之一。腫瘤多藥耐藥是多基因多途徑共同參與的結(jié)果。肺耐藥相關(guān)蛋白是1993年Scheper等〔8〕在無(wú)P-糖蛋白表達(dá)的多種藥物耐藥的肺癌細(xì)胞株中最先發(fā)現(xiàn)的一種與MDR有關(guān)的蛋白。研究表明LRP可能參與了藥物的核漿轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，阻止藥物作用與其在核上的靶點(diǎn)，從而引起細(xì)胞對(duì)藥物的耐受〔9〕。本研究結(jié)果提示LRP與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)系，可作為化療和預(yù)后的參考指標(biāo)。

TS是葉酸代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶，是合成胸苷酸所必需的酶，在DNA合成與修復(fù)、細(xì)胞增殖與分化中有十分重要的作用。抑制此酶將阻止 DNA合成，即抑制細(xì)胞分裂，使細(xì)胞死亡。TS是臨床廣泛使用化療藥物的5-FU的主要作用靶點(diǎn)，通過(guò)與抗腫瘤藥物結(jié)合，形成復(fù)合物而解毒，TS的過(guò)表達(dá)使得FdUMP不能完全抑制 TS的作用，腫瘤細(xì)胞對(duì)5-FU產(chǎn)生耐藥〔10，11〕。本研究結(jié)果提示TS參與了乳腺癌的發(fā)生過(guò)程，在臨床上進(jìn)行檢測(cè)可以提示乳腺癌的預(yù)后及耐藥情況。

綜上所述，ER、LRP和 TS和乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)，說(shuō)明乳腺癌的形成過(guò)程是多基因相互作用和共同調(diào)節(jié)的結(jié)果，因此，在乳腺癌組織中進(jìn)行多基因聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)乳腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移以及化療藥物的選擇和預(yù)后判斷都有重要意義。

1 南潤(rùn)玲，尚培中，王鐵山.乳腺癌易感基因BRCA1的研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011;27(12):2284-6.

2 桑 晶，韓玉貞，張志強(qiáng)，等.三陰性乳腺癌組織耐藥蛋白GST-π和LRP及TopoⅡ表達(dá)的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2011;18(7):521-3.

3 鄧燕明，梁劍苗，馮衛(wèi)能，等.非小細(xì)胞肺癌組織TS表達(dá)與培美曲塞治療療效相關(guān)性的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(21):1637-9.

4 Zhang KG，Qin CY，Wang HQ，et al.The effect of TRAIL on the expression of multidrug resistant genes MDR1，LRPand GST-π in drug-resistant gastric cancer cell SGC7901/VCR〔J〕.Hepatogastroenterology，2012;59(120):2672-6.

5 劉衛(wèi)梅，劉建民，封 琳，等.ER、PR及PS2基因在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2008;3(35):19-20.

6 Choi JE，Hur W，Jung CK，et al.Silence of 14-3-33 overexpression in hepatocellular carcinomainhibits tumor growth and enhances chemosensitiviy to cisdiammined dichloridoplatium〔J〕.Cancer Lett，2011;303(2):99-107.

7 Tewes M，Aktas B，Welt A，et al.Molecular profiling and predictive value of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer:an option for monitoring response to breast cancer related therapies〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2009;115(3):581-90.

8 Scheper RJ，Broxterman HJ，Scheffer GL，et al.Overexpression of a M(r)110，000 Vesicular protein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug resistance〔J〕.Cancer Res，1993;53(7):1475-9.

9 Yasunami T，Wang YH，Tsuji K，et al.Multidrug resistance protein expression of adult T-cell leukemia/lymphoma〔J〕.Leuk Res，2007;31(4):465-70.

10 Wang X，Wang Y，Wang Y，et al.Association of thymidylate synthase gene 3'-untranslated region polymorphism with sensitivity of non-small cell lung cancer to pemetrexed treatment:TS gene polymorphism and pemetrexed sensitivity in NSCLC〔J〕.J Biomed Sci，2013;20(1):5.

11 Ohrling K，Karlberg M，Edler D，et al.A combined analysis of mismatch repair status and thymidylate synthase expression in stageⅡandⅢcolon cancer〔J〕.Clin Colorectal Cancer，2012;12(2):128-35.