陳影 曹武 曾宋君

摘 ?要 ?葉子花屬植物的組織培養(yǎng)是其種苗繁殖最有效的手段之一，同時(shí)，還能為其性狀改良提供有效的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。從葉子花組織培養(yǎng)外植體的選擇、基本培養(yǎng)基類型、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的選擇和組培苗的移栽等方面綜述了葉子花組織培養(yǎng)的研究現(xiàn)狀，并詳細(xì)介紹了葉子花組織培養(yǎng)的再生方式和影響因素，最后，探討了葉子花組織培養(yǎng)研究中存在的問題以及未來的研究和發(fā)展方向。

關(guān)鍵詞 ?葉子花;組織培養(yǎng);外植體;培養(yǎng)基;植物生長調(diào)節(jié)劑

中圖分類號 ?S685.99 ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ?A

Tissue Culture Advances of Bougainvillea

CHEN Ying1，2， CAO Wu2， ZENG Songjun1*

1 Key Laboratory of South China Agricultural Plant Molecular Analysis and Gene Improvement，

South China Botanical Garden， Chinese Academy of Sciences， Guangzhou， Guangdong 510650， China

2 Zhongkai University of Agriculture and Engineering， Guangzhou， Guangdong 510225， China

Abstract ?Tissue culture is one of the most effective means of rapid propagation of Bougainvillea， which also can provide an effective genetic transformation system for character improvement. This paper summarized the advances of Bougainvillea tissue culture， including explant types， basic medium， plant growth regulators， and introduced the regeneration methods and influence factors of Bougainvillea tissue culture. In addition， main problems in Bougainvillea tissue culture were analyzed， the research and development direction in the future was also discussed.

Key words ?Bougainvillea;Tissue culture; Explants;Medium;Plant growth regulator

doi ?10.3969/j.issn.1000-2561.2015.08.029

葉子花 （Bougainvillea）又稱三角梅、三角花、九重葛、勒杜鵑、簕杜鵑、寶巾、寶荊等，紫茉莉科葉子花屬常綠藤本植物。該屬植物約有14～18個(gè)種，300多個(gè)品種，原產(chǎn)于南美巴西附近的沿海島嶼。中國引種栽培的葉子花有3個(gè)原生種、1個(gè)自然雜交種和100多個(gè)品種。3個(gè)原生種為葉子花（B. glabra Choisy）、毛葉子花（B. spectabilis Willd）和秘魯葉子花（B. peruviana Bonpl.），自然雜交種為葉子花和秘魯葉子花雜交的布蒂娜葉子花（B. x buttiana Holttum & Standl）[1-4]。由于葉子花品種豐富，生命力強(qiáng)，栽培適應(yīng)范圍廣，且花色豐富、花期長，是應(yīng)用廣泛的園林綠化植物和盆栽花卉[5-6]，此外，它還含有對人類健康以及環(huán)境保護(hù)有積極作用的化學(xué)物質(zhì)，如天然色素和黃酮等[7-13]。葉子花是贊比亞的國花，也是中國海南省?？?、三亞，廣東省深圳、惠州、江門、中山、 珠海，福建省廈門、三明、惠安，廣西壯族自治區(qū)北海、梧州，云南德宏、臨倉、宜良，貴州黔西南，浙江洞頭和臺(tái)灣省屏東等18市的市花[2]。葉子花屬植物，特別是栽培品種在我國栽培時(shí)極難結(jié)實(shí)，其常規(guī)繁殖常采用扦插，有時(shí)采用嫁接和壓條，但葉子花的常規(guī)繁殖增殖系數(shù)較小、生根時(shí)間較長、繁殖時(shí)間受季節(jié)限制等不利因素的影響[14-19]，而對于一些數(shù)量稀少的新品種及一些扦插繁殖生根難的品種，采用傳統(tǒng)的扦插繁殖方法繁殖難以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量種苗滿足市場需求。而組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)能夠在短期內(nèi)獲得基因型一致的大量的優(yōu)質(zhì)苗木，并能保持母株的優(yōu)良特性且防止品種退化，同時(shí)種苗生產(chǎn)不受季節(jié)的限制，是一種有效的苗木規(guī)?；姆敝撤绞?。另外，建立葉子花的植株再生體系，還能為其性狀改良提供有效的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。全世界對葉子花屬植物的組織培養(yǎng)已進(jìn)行了較多的研究[20-44]，本文對這些文獻(xiàn)進(jìn)行綜述， 以期為以后葉子花屬植物組織培養(yǎng)的研究和生產(chǎn)應(yīng)用提供有價(jià)值的參考。

1 ?組織培養(yǎng)的品種及外植體的選擇

1.1 ?組織培養(yǎng)概況

葉子花組織培養(yǎng)研究的最早報(bào)道是1978年Chaturvedi等[21]和1981年Sharma等[24]以莖尖為外植體，成功地對葉子花品種B. glabra ‘Magnifica進(jìn)行了不定芽的誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)并移栽到大田獲得與親本性狀一致的正常開花的植株。中國最早關(guān)于葉子花組織培養(yǎng)的報(bào)道是 1983年譚文澄[37]利用葉子花的側(cè)芽進(jìn)行的。在全世界能檢索到的24篇有關(guān)葉子花屬植物的組織培養(yǎng)中，有關(guān)葉子花（B. glabra）的論文10篇，有關(guān)毛葉子花（B. spectabilis）的論文9篇，有關(guān)布蒂娜葉子花（B. x buttiana）的論文1篇，以及同時(shí)進(jìn)行2個(gè)或以上品種的論文4篇[20-44]。Duhoky和Al-Mizory[22]的研究結(jié)果表明，雜交種布蒂娜葉子花的組織培養(yǎng)比原生種葉子花和毛葉子花要容易得多，無論是愈傷組織的誘導(dǎo)、不定芽的分化還是生根都表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢。布蒂娜葉子花在最適愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基WPM[45]+2.0 mg/L BA（6-芐氨基腺嘌呤）+0.2 mg/L NAA（萘乙酸）上的誘導(dǎo)率為92.86%，葉子花和毛葉子花為71%和82.4%;而它們的器官發(fā)生率分別為96.43%、78.57%和89.29%。程治英[27]以葉子花4個(gè)品種的帶腋芽的未木質(zhì)化的莖段為外植體進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)時(shí)，也發(fā)現(xiàn)雜交種（Red and White）比原生種葉子花和毛葉子花更易進(jìn)行組織培養(yǎng)。而張小紅等[42]發(fā)現(xiàn)紅色葉子花和紫色葉子花最適的芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基不同，紫色品種的最適培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L BA+0.4 mg/L NAA，紅色品種的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA。

1.2 ?外植體的選擇和滅菌

目前，已報(bào)道葉子花組織培養(yǎng)中所采用的外植體主要有莖尖、莖段、側(cè)芽、葉片、花器官等，其中最常用的是莖尖和莖段。外植體滅菌最常采用的方法是75%的酒精浸泡30～60 s，無菌水沖洗3～5次后，再用0.1%的 HgCl2溶液浸泡8～12 min，最后用無菌水沖洗5～8次。周俊輝等[43]為了提高外植體滅菌的成功率，將帶健壯腋芽的半木質(zhì)化枝條剪成4～5 cm的小段后先用1%的洗衣粉水浸泡30 min，流水沖洗后，再用100 mg/L的慶大霉素溶液浸泡30 min再進(jìn)行常規(guī)消毒。孫利娜等[36]對葉子花（B. glabra）的不同外植體消毒和愈傷組織誘導(dǎo)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。他們選擇生長健壯無病蟲害的葉子花的花、苞片、莖尖、葉片、葉柄、幼嫩莖段、半木質(zhì)化莖段作為外植體，采用75%的酒精滅菌25～35 s，再用0.1%升汞消毒7～11 min。消毒效果由好到劣的外植體依次為半木質(zhì)化莖段>幼嫩莖段>葉柄>葉片>苞葉、花、頂芽。其中苞葉、花、頂芽未成功獲得既未污染又成活的外植體。其它4種外植體中，最佳消毒方法為先用濃度75%酒精溶液滅菌30 s，無菌水沖洗5次后，再用0.1%升汞溶液消毒9 min，最后用無菌水沖洗7～8次;同時(shí)，他們研究發(fā)現(xiàn)而不同外植體具有不同的愈傷組織誘導(dǎo)能力，其中最佳外植體為半木質(zhì)化莖段，它在最佳的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA培養(yǎng)基上，愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)90.6%，而幼嫩莖段、葉片、葉柄分別為75%、62.5%、12.5%。葉頂英和張健[39]在對葉子花的莖尖、莖節(jié)和葉片進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)時(shí)發(fā)現(xiàn)，它們的再生能力表現(xiàn)為莖尖>莖節(jié)>葉片。杜天奎和徐青[29]以莖尖和莖節(jié)為外植體進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)和增殖時(shí)，發(fā)現(xiàn)毛葉子花莖尖的最佳誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA，而莖節(jié)的最佳誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA（吲哚丁酸）。

2 ?基本培養(yǎng)基及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)選擇

2.1 ?基本培養(yǎng)基

葉子花組織培養(yǎng)研究中最常采用的基本培養(yǎng)基是MS[46]、1/2 MS和1/4 MS（其中1/2 MS和1/4 MS多用于生根培養(yǎng)），也有采用WPM和B5[47]等作為基本培養(yǎng)基的報(bào)道[22，30]。Duhoky和AL-Mizory[22]對布蒂娜葉子花、葉子花和毛葉子花的愈傷組織誘導(dǎo)、器官發(fā)生和生根在以WPM和MS為基本培養(yǎng)基的組織培養(yǎng)情況進(jìn)行了研究，布蒂娜葉子花、毛葉子花在WPM培養(yǎng)基上比在MS培養(yǎng)基上的愈傷組織誘導(dǎo)、器官發(fā)生方面均表現(xiàn)出較好的效果，葉子花的器官發(fā)生同樣表現(xiàn)出較好的效果，但愈傷組織誘導(dǎo)率差異不大。而在生根培養(yǎng)方面，除布蒂娜葉子花在1/4 WPM和1/4 MS上的生根率均為100%外，其它2個(gè)種類及蒂娜葉子花在1/2 WPM培養(yǎng)基和1/4 WPM上比在1/2 MS培養(yǎng)基和1/4 MS上均表現(xiàn)出較好的效果。龔偉等[30]報(bào)道葉子花莖段愈傷組織的誘導(dǎo)和分化效果在MS培養(yǎng)上比在1/2 MS和B5培養(yǎng)上好。

2.2 ?生長調(diào)節(jié)物質(zhì)選擇

在葉子花的組織培養(yǎng)中，常用的植物生長調(diào)節(jié)劑有BA，2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸），IAA（吲哚乙酸），IBA和NAA。KT和2，4，5-三氯苯氧基乙酸也曾被用于葉子花的組織培養(yǎng)中。Chaturved等[21]和Sharma等[24]報(bào)道在改良的MS培養(yǎng)中加入KT（激動(dòng)素）時(shí)，不能誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生，僅在高濃度時(shí)產(chǎn)生愈傷組織;而在培養(yǎng)基中加入2，4，5-三氯苯氧基乙酸有利于葉子花的生根。

2.2.1 ?愈傷組織的誘導(dǎo)和分化 ? 葉子花的組織培養(yǎng)目前多采用叢生芽繁殖。但葉子花在組織培養(yǎng)過程中，外植體基部常會(huì)產(chǎn)生愈傷組織，多被切除丟棄而未進(jìn)行增殖和分化出芽實(shí)驗(yàn)。有關(guān)葉子花愈傷組織的誘導(dǎo)論文只有3篇，而利用愈傷組織分化出苗只有龔偉等[30]進(jìn)行了報(bào)道，其研究表明，光葉子花（B. glabra）莖段在MS+3.0 mg/L BA+0.2 mg/L 2，4-D+mg/L NAA 0.1培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果取好，愈傷組織的誘導(dǎo)率和分化率分別達(dá)78.2%和25.6%。孫利娜等[36]對葉子花（B. glabra）的不同外植體消毒和愈傷組織誘導(dǎo)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。發(fā)現(xiàn)6-BA在葉子花的愈傷組織誘導(dǎo)中起著非常重要的作用，濃度為0.5～2.0 mg/L均可誘導(dǎo)出愈傷，比2，4-D的效果更好，在培養(yǎng)基中添加NAA時(shí)具有一定的促進(jìn)作用。杜天奎和徐青[29]報(bào)道毛葉子花葉片愈傷組織的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2，4-D。

2.2.2 ?不定芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng) ? ?葉子花不定芽的誘導(dǎo)增殖有時(shí)會(huì)使用同一種培養(yǎng)基，有時(shí)會(huì)有所差別。MS或改良的MS培養(yǎng)中附加BA是最常見的，大多數(shù)的情況下還會(huì)附加NAA、IAA或IBA。BA和NAA、IAA或IBA的濃度范圍從0.2 mg/L至2.0 mg/L。Chaturvedi等[21]報(bào)道，葉子花的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良的MS+0.2 mg/L BA+1.0 mg/L IAA，而最佳的增殖培養(yǎng)基為改良的MS+0.5 mg/L BA+1.5 mg/L NAA。譚文澄[37]報(bào)道，葉子花不定芽的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良的MS+2.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA+5 000 mg/L水解乳蛋白，而最佳的增殖培養(yǎng)基為改良的MS+1.0 mg/L BA+1.5 mg/L IAA+10 mg/L 腺嘌呤+10 mg/L硫銨素。Javed等[23]報(bào)道毛葉子花最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良的MS+0.25 mg/L BA+0.25 mg/L NAA，最佳的增殖培養(yǎng)基為改良的MS+2.0 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+250 mg/L谷氨酸。周俊輝[43]報(bào)道毛葉子花最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.2 mg/L BA+1.0 mg/L IAA，而最佳的增殖培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L BA+1.5 mg/L NAA。在不定芽誘導(dǎo)和增殖采用的同一種培養(yǎng)基的研究中張波等[41]報(bào)道葉子花的最佳誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)為MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA，不定芽的增殖倍數(shù)可達(dá)到12;郭海濱等[31]報(bào)道葉子花最佳誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)為MS+0.5 mg/L BA+0.2 mg/L NAA;李師翁等[34]報(bào)道毛葉子花的最佳誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)為MS+0.5 mg/L BA+0.05 mg/L NAA。

2.2.3 ?生根培養(yǎng) ? 葉子花的生根率較低，在生根過程中有時(shí)會(huì)伴隨愈傷組織的產(chǎn)生。而不同的葉子花品種的生根培養(yǎng)基不同。葉子花生根實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)中常使用的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)有IBA、NAA和IAA，這3種激素均能誘導(dǎo)葉子花生根，是單獨(dú)使用還是混合使用更有利于葉子花的生根目前還沒有統(tǒng)一的結(jié)論。Duhoky和AL-Mizory[22]對布蒂娜葉子花、葉子花和毛葉子花的生根研究發(fā)現(xiàn)，布蒂娜葉子花比葉子花和毛葉子花具有更高的生根率，它在1/4 WPM和1/4 MS上的生根率均為100%，而葉子花和毛葉子花在1/4 WPM培養(yǎng)基上比1/4 MS培養(yǎng)基上具有更高的生根率，葉子花的生根率分別為89.29%和82.14%，毛葉子花的生根率分別為96.43%和85.71%。葉頂英[38]在以1/2 MS、3/8 MS和1/4 MS為基本培養(yǎng)附加不同濃度的IBA（0.5、1.0、1.5 mg/L）、NAA（0、0.05、0.1 mg/L）和活性炭（0、0.5、1.0 mg/L）進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基上，獲得的最高生根率的培養(yǎng)基為1/4 MS+1.5 mg/L IBA+0.05 mg/L NAA，生根率達(dá)92.53%。杜天奎和徐青[29]發(fā)現(xiàn)毛葉子花的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2 MS+0.3 mg/L NAA。Shah等[25]發(fā)現(xiàn)毛葉子花品種‘Texans Dawn的最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+2.5 mg/L NAA+2.5 mg/L IBA。Ahmad等[20]發(fā)現(xiàn)兩步法最有利于生根，即先將無根的小苗培養(yǎng)在1/2 MS+5.0 mg/L IAA+5.0 mg/L IBA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)后再在1/2 MS+0.5 mg/L IAA+0.5 mg/L IBA培養(yǎng)。Javed等[23]報(bào)道毛葉子花品種‘Texans Dawn在改良的MS培養(yǎng)基+5.0 mg/L NAA+5.0 mg/L IBA培養(yǎng)基上，生根率可達(dá)70%。

利用愈傷組織分化獲得的試管苗由于較瘦弱，在生根培養(yǎng)前需要進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。龔偉等[20]報(bào)道壯苗培養(yǎng)基以MS+0.2 mg/L BA+0.5 mg/L GA3+0.1 mg/L NAA的效果最好，經(jīng)過壯苗培養(yǎng)的小苗在MS+3.0 mg/L NAA培養(yǎng)基上生根率達(dá)到88.3%。

由于一些葉子花的組培苗試管內(nèi)不生根，同時(shí)為了降低試管苗的生產(chǎn)成本，可進(jìn)行試管苗的試管外生根。葉頂英[38]報(bào)道，葉子花在20 ℃～25 ℃，基質(zhì)水分及空氣濕度控制在60%～90%，有較強(qiáng)的散射光的條件下，利用25、50、100 mg/L的IBA和ABT處理均能生根。在ABT濃度為50 mg/L效果最佳，試管外生根率為可達(dá)43%。

3 ?培養(yǎng)條件

已報(bào)道葉子花的培養(yǎng)溫度范圍為20 ℃～30 ℃，其中23 ℃～27 ℃應(yīng)用最多[20-44]。光照范圍1 000～4 000 lx，多為1 500～3 000 lx。韓建軍[32]對葉子花的頂芽和帶腋芽的莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)條件與玻璃化具有較大的相關(guān)性。在MS培養(yǎng)基中附加0.2、0.5和2.0 mg/L BA時(shí)，隨著BA濃度的升高，外植體玻璃化的比率升高。而在高溫（35 ℃）和陰暗的弱光培養(yǎng)條件下也易產(chǎn)生玻璃化。

4 ?組培苗的移栽

組培苗移栽是關(guān)系到能否實(shí)現(xiàn)工廠化育苗的關(guān)鍵，目前對葉子花組培苗移栽報(bào)道的主要是從基質(zhì)、移栽溫度和濕度方面的研究。張波等[41]報(bào)道葉子花試管苗在選用基質(zhì)為翻曬過的河沙與腐殖土作基質(zhì)時(shí)，在腐殖土上的移栽成活率為96%，而在河沙上僅為85%。龔偉等[30]報(bào)道將發(fā)育良好的生根苗移出培養(yǎng)室，在室溫散射光下培養(yǎng)3 d，打開封口膜于溫室大棚中預(yù)2 d，洗去根部培養(yǎng)基，移栽于經(jīng)福爾馬林消毒的河沙和蛭石（1 ∶ 1）為基質(zhì)的小花盆中，置于半蔭處，并用地膜覆蓋保濕10 d，每天揭開地膜通風(fēng)30 min，注意澆水，15 d后去除遮蔭網(wǎng)直接在自然條件下生長，30 d時(shí)成活率可達(dá)90%以上。李師翁[34]采用二步法移栽，即先鋪5 cm厚珍珠巖制作苗床，將生根苗洗凈培養(yǎng)基液后，均勻移入苗床，搭設(shè)塑料棚，并加遮陽網(wǎng)，使棚內(nèi)光強(qiáng)在10 000 lux以下，保持濕度85%以上，溫度35 ℃以下，嚴(yán)格管理約4～5周后成活，然后將成活苗移入配制機(jī)制的營養(yǎng)缽中再進(jìn)行常規(guī)管理，平均成活率達(dá)97%以上。

程治英[27]報(bào)道，試管苗的開花比扦插苗早，扦插苗開花約需2 a時(shí)間，而試管苗雙色葉子花（B. Red and white）移栽后83 d就開了花，多花葉子花（B. double）95 d開花，單花的毛葉子花（B. spectabilis）150 d開花。

5 ?問題與展望

國內(nèi)外葉子花的組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)有了一定的基礎(chǔ)，但還沒有形成一個(gè)比較完善的技術(shù)體系，較少應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。其主要原因有：（1）外植體表面滅菌污染率高;（2）組織培養(yǎng)過程中易產(chǎn)生愈傷組織而愈傷組織又難再生植株;（3）生根困難;（4）移栽成活率較低;（5）生產(chǎn)成本較高。這些都是實(shí)現(xiàn)葉子花工廠化育苗的瓶頸。針對外植物體污染的問題，可以采用3個(gè)方面的措施進(jìn)行防止：①對母株進(jìn)行預(yù)處理，采集外植體時(shí)盡量選取帶菌少的材料;②采用合適的消毒方法，如給外植體消毒的時(shí)候，一般使用酒精和升汞結(jié)合的消毒方法[48]，還有一些比較特殊的方法，如減壓滅菌法[49]、臭氧消毒法[50]、間隙消毒法[51]、超聲波振動(dòng)滅菌等[52];③培養(yǎng)基中加放適量抗生素等抗菌劑[48，52]。針對組織培養(yǎng)過程中易產(chǎn)生愈傷組織而愈傷組織難再生植株的問題，我們可從兩個(gè)方面進(jìn)行解決。如果是進(jìn)行優(yōu)良品種的種苗生產(chǎn)，可通過采用培養(yǎng)基的優(yōu)化、改變培養(yǎng)條件等方法盡量減少愈傷組織的產(chǎn)生，而如果需要進(jìn)行葉子花的轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究時(shí)，由于通過愈傷組織再生植物途徑是最有效的方式，我們同樣可以通過培養(yǎng)基的優(yōu)化和改變培養(yǎng)條件等方法建立高效的愈傷組織再生體系。對于葉子花組織培養(yǎng)過程中生根難度大的問題，我們可以在優(yōu)化培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，采用濾紙橋等方式等進(jìn)行生根誘導(dǎo)[53]或進(jìn)行體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)[54-55];也可以采用兩步生根法進(jìn)行生根誘導(dǎo)，即先在含有生長素的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，再轉(zhuǎn)移到不含激素但含活性碳的培養(yǎng)上完成根的生長[48，56]。對于移栽成活率低的問題，可通過煉苗，嚴(yán)格控制移栽環(huán)境的溫濕度來提高移栽的成活率。如果生產(chǎn)的品種是優(yōu)良品種且規(guī)模較大，并且有高效的再生體系，生產(chǎn)成本自然也會(huì)大幅度降低而在市場上具有競爭力。總之，在以后的工作中， 要加強(qiáng)葉子花不同品種組織培養(yǎng)技術(shù)體系的研究， 獲得針對不同品種的高效、實(shí)用、標(biāo)準(zhǔn)的組培快繁體系;其次，在外植體處理及不定芽的誘導(dǎo)、增殖分化、生根壯苗等各個(gè)階段，對基本培養(yǎng)基類型、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、培養(yǎng)基中添加物的選擇、培養(yǎng)條件等方面進(jìn)行優(yōu)化。

此外， 在葉子花組培快繁體系的基礎(chǔ)上， 應(yīng)拓寬研究方向。如在建立穩(wěn)定的葉子花再生體系的基礎(chǔ)上，通過誘變技術(shù)或轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育葉子花新品種。目前，世界上葉子花的新品種選育主要通過芽變選種來實(shí)現(xiàn)的，也有通過物理和化學(xué)誘導(dǎo)選育新品種的報(bào)道[57-61]。葉子花的芽變選種即是從發(fā)生優(yōu)良芽變的植株上選取變異部分的芽或枝條，用無性繁殖的方法使變異性狀得到延續(xù)和固定，經(jīng)過初選、復(fù)選、決選等程序的選擇、觀察和鑒定，最后選出優(yōu)良株系育成新品種[57]，而物理和化學(xué)誘導(dǎo)也能獲得葉型、葉色、花型、花色變化的植株[58-61]。由于獲得的新品種材料常常稀少，采用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行種苗大規(guī)模繁殖是最有效的方法。同時(shí)，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以定向地在基因水平上進(jìn)行植物性狀的改變，如培育出抗鹽堿、抗寒、耐澇等抗逆性強(qiáng)的品種，以擴(kuò)大葉子花在北方和惡劣環(huán)境的栽植面積;改變?nèi)~子花的葉型、葉色、花型、花色或延長花期并培養(yǎng)出具有芳香的品種， 而基因工程技術(shù)更是建立在以組織培養(yǎng)為基礎(chǔ)的有效轉(zhuǎn)化體系的基礎(chǔ)上。

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