譚佐祥　于躍

摘 要：目的：建立水飛薊提取物中水飛薊賓的含量測定方法。方法：本實驗采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色譜柱；流動相為甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5；檢測波長為288nm；每次進樣量20？滋L；流速：0.8mL/min；結果：水飛薊賓在2.12～64.36？滋g范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關系?；貧w方程是y=41676X+178737，R2=0.9984。結論：本實驗采用HPLC測定水飛薊提取物中主要成分水飛薊賓的含量，方法簡便、結果準確、重現(xiàn)性好，可用于水飛薊提取物中水飛薊賓的含量測定方法。

關鍵詞：水飛薊；水飛薊賓；HPLC

水飛薊中黃酮類物質是自菊科植物水飛薊種子中提取的藥用有效成分，是一類以二氫黃酮醇與苯丙素類衍生物縮合而成的具有C-9取代基的黃酮木質素類化合物[1，2]。其中主要成分有水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭四種同分異構體。其中水飛薊賓含量最高，保肝活性最強[3，4]，是水飛薊中黃酮類物質含量測定的標準物質[5，6]。本文采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色譜柱，以甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5為流動相；在288nm檢測波長下，采用HPLC測定水飛薊提取物中主要成分水飛薊賓的含量，取得了較理想效果。

1 實驗儀器與材料

PL203電子天平（上海江儀儀器有限公司）；KQ-100E型超聲波處理器（濟南華舜儀器有限公司）；Waters 2695高效液相色譜儀（美國沃特世waters有限公司）；水飛薊賓對照品（中國生物藥品檢驗所）；水飛薊黃酮類物質提取物（東寧縣龍翔中藥飲片有限公司）；其他試劑均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

本實驗采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色譜柱；流動相為甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5；檢測波長為288nm；每次進樣量20？滋L；流速：0.8mL/min；理論板數(shù)按水飛薊賓峰計算應不低于4000。取對照品溶液及供試品溶液在該色譜條件下分別各進樣20？L，記錄色譜。詳見圖1、圖2。由圖可知，水飛薊賓與其它組分分離良好。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取水飛薊賓對照品50mg（精確至0.01mg），置于500mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含500？滋g的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

精確稱取水飛薊黃酮類物質提取物50mg（精確至0.01mg），置50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超聲處理30min。冷卻后，加甲醇稀釋至刻度，搖勻并濾過。精確量取5mL，置50mL容量瓶中，加入流動相稀釋至刻度，搖勻備用。

2.3 線性關系考察

精確量取水飛薊賓對照品溶液1.0，2.0，4.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0

mL，分別置50mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。各精密量取20？滋L，分別注入高效液相色譜儀，以水飛薊賓峰面積為縱坐標，以水飛薊賓濃度（mg/mL）為橫坐標進行線性回歸處理。結果說明，水飛薊賓在2.12～64.36？滋g范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關系?；貧w方程是y=41676X+178737，R2=0.9984。

2.4 精密度試驗

取水飛薊賓濃度約為20？滋g/mL的對照品溶液，重復進樣6次，測定峰面積，RSD=0.84%，結果說明該法精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗

取樣品，按供試品溶液制備方法制成6份，照水飛薊賓方法測定含量， RSD=1.33%，結果說明該法重現(xiàn)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取濃度約為50？滋g/mL的水飛薊賓對照品液適量，每隔2h進行測定一次，共進行6次，測定峰面積，RSD=0.21%，結果說明本品12小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品（水飛薊提取物：含水飛薊賓34.16%，批號為131026）適量（約相當于水飛薊賓2.5mg）共6份，精密加入對照品水飛薊賓2.5mg，置250mL量瓶中，按供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件測定。計算水飛薊黃酮類提取物中水飛薊賓的含量及回收率。平均回收率為101.0%，RSD=1.5%，結果表明該法具有良好回收率。

3 結束語

該實驗中通過線性關系考察制定回歸方程，得出水飛薊中水飛薊賓含量測定的計算方法，并進行了精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和加樣回收率試驗。精密度試驗中6次重復測定按對照品溶液峰面積計算RSD=0.15%，結果說明，精密度良好；6次穩(wěn)定性試驗按對照品溶液峰面積計算，RSD=0.15%，結果說明，12小時內(nèi)穩(wěn)定性良好；6次重現(xiàn)性試驗，RSD=1.33%，結果說明，重現(xiàn)性良好。最終結果表明該方法簡便，準確、重現(xiàn)性好，可用于水飛薊提取物中水飛薊賓的含量測定方法。

參考文獻

[1]張淑麗，楊世海，張海 .水飛薊有效成分及其提取方法研究進展[J].人參研究，2012（4）.

[2]董巖，孔春燕.水飛薊有效成分的提取研究[J].中成藥，2010（7）.

[3]劉洪玲.水飛薊素的化學成分及藥理作用研究進展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2008（7）.

[4]張立海，慈慧.水飛薊素保肝的藥理作用及臨床應用[J].首都醫(yī)藥，2012（8）.

[5]周采菊，黃華瑞.HPLC法測定水飛薊素及制劑中水飛薊賓的含量[J].中國藥品標準，2008，9（3）.

[6]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業(yè)出版社，2010：76.