李 娜,王欣之,2,吳 皓,2,*,易瑞灶,劉 睿,2,王令充,2,賀蓓蓓,謝冬云,陳 濤

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇省海洋藥用生物資源研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇南京 210023；2.江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇南京 210023；3.國家海洋局第三海洋研究所，福建廈門 361005)

江蘇東部沿海四種低值貝類軟體中?；撬釀?dòng)態(tài)積累規(guī)律與適宜采收期研究

李 娜1,王欣之1,2,吳 皓1,2,*,易瑞灶3,劉 睿1,2,王令充1,2,賀蓓蓓1,謝冬云1,陳 濤1

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇省海洋藥用生物資源研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇南京 210023；2.江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇南京 210023；3.國家海洋局第三海洋研究所，福建廈門 361005)

以采自江蘇東部沿海的文蛤、青蛤、四角蛤蜊及菲律賓蛤仔四種低值貝類為樣本,研究其軟體中?；撬岬膭?dòng)態(tài)變化規(guī)律,探討這四種貝類的最適采收期。建立以鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生化結(jié)合HPLC-UV測(cè)定?；撬岬姆椒?以Kromasil 50mm×2.1mm C18為分離柱,甲醇-0.05mol/L乙酸鈉(pH6.0)23∶77為流動(dòng)相,流速0.3mL/min洗脫,紫外檢測(cè)波長為330nm。該方法可以準(zhǔn)確測(cè)定四種貝類軟體中?；撬岬暮?且靈敏度高,重現(xiàn)性好。貝類的生長具有明顯季節(jié)性,一般春夏季較秋冬季生長較快,尤其夏季水溫為25～28℃時(shí)為快速生長期,此時(shí),貝類軟體中?；撬岷窟_(dá)到最高。菲律賓蛤仔?；撬岷孔罡咴?月,約為42.79mg/g；而文蛤、青蛤、四角蛤蜊軟體中?；撬岷孔罡咴?月,分別約為27.48、16.59、15.00mg/g。若從產(chǎn)量和有效成分?；撬岬暮孔兓暇C合考慮,建議菲律賓蛤仔?；撬嶙罴巡墒掌跒?月,文蛤、青蛤、四角蛤蜊最佳采收期為6月。

?；撬?高效液相色譜法,采收期,貝類軟體

牛磺酸(Taurine)又稱為2-氨基乙磺酸,是一種含硫的β-氨基酸,具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng),主要體現(xiàn)在:促進(jìn)大腦發(fā)育[2-3]；增強(qiáng)細(xì)胞抗病毒侵害能力[4]；增強(qiáng)心血管系統(tǒng)的功效[5-6]；保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)[7]、免疫系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)[8]的作用；抗衰老、抗高血壓和高血脂[9]；防治糖尿病[10]；抗腫瘤活性[11]等幾個(gè)方面。

國內(nèi)外市場(chǎng)上使用的?；撬嵊谢瘜W(xué)合成牛磺酸和天然?；撬?。其中廣泛使用的為化學(xué)合成品,但化學(xué)合成的?；撬岽嬖谠隙拘源?、工藝操作復(fù)雜、環(huán)境污染等嚴(yán)重問題[12],隨著生活水平的提高和綠色化學(xué)的進(jìn)展,人們?cè)絹碓教岢褂锰烊惶崛〉呐；撬帷Ｌ烊慌；撬嶂饕嬖谟诤．a(chǎn)品及哺乳動(dòng)物的幾乎所有臟器中,尤其是在海洋貝類軟體中,且以游離形式存在[13],故從海洋貝類中提取天然牛磺酸具有很大的應(yīng)用前景。江蘇省沿海灘涂面積廣大,灘涂海洋生物資源豐富,其中四角蛤蜊、文蛤、青蛤、菲律賓蛤仔等貝類資源尤為豐富。因此,了解這些貝類軟體中?；撬岬奶N(yùn)藏量,總結(jié)不同采收期貝類軟體中牛磺酸的動(dòng)態(tài)積累規(guī)律,對(duì)江蘇沿海貝類的品質(zhì)分析以及天然?；撬豳Y源的開發(fā)具有重大的科學(xué)指導(dǎo)意義。

目前,鮮有海洋貝類軟體中?；撬岷繙y(cè)定方法的研究,更缺乏貝類軟體中?；撬岬膭?dòng)態(tài)變化規(guī)律的報(bào)道。因此,本文通過鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生化結(jié)合HPLC法[14],首次對(duì)江蘇東部沿海所產(chǎn)的不同采收期的菲律賓蛤仔、文蛤、青蛤以及四角蛤蜊中?；撬岬暮窟M(jìn)行系統(tǒng)研究,探討在一年之中四種貝類軟體中牛磺酸的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,以期了解江蘇沿海貝類的品質(zhì),并確定其最佳的采收期。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

菲律賓蛤仔、文蛤、青蛤、四角蛤蜊軟體(批號(hào):201208-201307),由江蘇省海洋水產(chǎn)研究所提供,經(jīng)江蘇省海洋水產(chǎn)研究所萬夕和研究員鑒定來源分別為:簾蛤科動(dòng)物菲律賓蛤仔、文蛤和青蛤,蛤蜊科動(dòng)物四角蛤蜊。

牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)品,純度大于99% 上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇 色譜純,美國TEDIA 天地試劑有限公司；鄰苯二甲醛 上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；無水乙醇、氫氧化鈉、硼酸、磷酸二氫鉀、乙酸鈉等分析純?cè)噭?均為南京化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。

衍生化試劑的制備:稱取0.5g 鄰苯二甲醛于100mL容量瓶中,加10mL甲醇溶解,再加入5mL 2-巰基乙醇,并用硼酸鈉緩沖液(0.4mol/L,pH9.5,NaOH 調(diào)制)定容至100mL。密封后置于4℃冰箱中避光保存。在使用過程中,每隔兩天加入1mL 的2-巰基乙醇,使用期限1周[15]。

Waters 2695高效液相色譜儀 Waters 2489 UV/Visible Detector檢測(cè)器 美國Waters公司；TGL-16G型高速離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；KQ-500 DE型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；BT-125D型電子分析天平 賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；UNIQUE-s15超純水機(jī) 廈門銳思捷科學(xué)儀器有限公司；LABCONCO凍干機(jī) 美國。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 分離柱:Kromasil C18(2.5mm×50mm)；流速0.3mL/min,進(jìn)樣體積2μL,流動(dòng)相A為甲醇,流動(dòng)相B為0.05mol/L乙酸鈉溶液(pH6.0,冰醋酸調(diào)制),VA∶VB=23∶77,等度洗脫；紫外檢測(cè)器,波長330nm；柱溫40℃。牛磺酸對(duì)照品及四種貝類軟體樣品的色譜圖見圖1。

圖1 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)(A)、樣品(B菲律賓蛤仔、 C文蛤、D青蛤、E四角蛤蜊)色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of Taurine solution of standards(A)and samples(B,C,D,E)

1.2.2 衍生劑濃度 稱取OPA 500mg溶解于10mL甲醇中,加入1mL 2-巰基乙醇,并加入硼酸鈉緩沖液定容于100mL 容量瓶中,搖勻,避光放置,使用前加硼酸鈉緩沖液稀釋為濃度分別為0.1、0.2、0.25、0.5、1.0、1.5、2.5、5mg/mL的系列濃度,依法衍生。

1.2.3 衍生反應(yīng)時(shí)間 在其他條件不變的情況下,精密吸取1mL 0.20014mg/mL的?；撬釋?duì)照品溶液與1mL 5mg/mL OPA反應(yīng)液進(jìn)行不同時(shí)間的反應(yīng),然后通過柱分離測(cè)定其峰面積。

1.2.4 流動(dòng)相考察 分別選擇不同配比的流動(dòng)相甲醇-純水(80∶20、70∶30、60∶40、55∶45、30∶70)、甲醇-酸水(70∶30、60∶40、45∶55、30∶70)、甲醇-乙酸鈉水溶液(75∶25、40∶60、35∶65、23∶77),進(jìn)行?；撬針?biāo)準(zhǔn)品和樣品的色譜分離實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 檢測(cè)波長的選擇 取?；撬釋?duì)照品適量,用蒸餾水配成50mg/L濃度的對(duì)照品溶液。取該對(duì)照品溶液1mL于10mL容量瓶中,加入OPA衍生試劑1mL,搖勻,室溫反應(yīng)1.5min后,立即加入0.1mol/L磷酸二氫鉀終止液1mL,搖勻,加甲醇定容至刻度。進(jìn)行紫外全波掃描,確定最佳檢測(cè)波長。

1.2.6 提取條件考察 分別考察提取方法、提取溶劑、提取溶劑比例、提取時(shí)間及提取次數(shù)對(duì)貝類軟體中?；撬崽崛⌒Ч挠绊憽Ｌ崛》椒?提取溶劑純水、提取溶劑比例1∶30、提取時(shí)間60min,比較超聲提取與水煎煮加熱回流提取兩種提取方法的提取效率。提取溶劑:超聲提取,溶劑比例1∶30、提取時(shí)間60min,分別考察比較不同提取溶劑(純水、不同比例的甲醇溶液、不同比例的乙醇溶液)對(duì)?；撬岬奶崛⌒省Ｌ崛∪軇┍壤?超聲提取,70%乙醇,提取時(shí)間60min,不同溶劑提取比例1∶10、1∶15、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50。提取時(shí)間:超聲提取,70%乙醇,提取比例1∶30,提取時(shí)間分別為30、60、90、120min。

提取次數(shù):超聲提取,70%乙醇,溶劑比例1∶30,提取60min,提取次數(shù)分別為1、2、3次。

1.2.7 供試品溶液的制備 將購置的貝類軟體置于籃中,化凍,洗凈,靜置過夜,勻漿,于凍干機(jī)上凍成干粉。即為實(shí)驗(yàn)中所用的貝類軟體的凍干粉。

取貝類軟體凍干粉約0.5g,精密稱定,置于100mL具塞錐形瓶中,加70%乙醇溶液15mL,超聲處理(功率300W,頻率100kHz)60min 后,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,再向殘?jiān)屑尤?5mL 70%乙醇溶液,超聲處理60min,重復(fù)三次,合并續(xù)濾液,并定容至50mL 容量瓶中,保存?zhèn)溆肹16]。

精密量取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各1mL,分別置10mL量瓶中,各加入鄰苯二甲醛(OPA)衍生試劑1mL,搖勻,室溫反應(yīng)1.5min 后,立即加入0.1mol/L磷酸二氫鉀終止液1mL,搖勻,加甲醇定容至刻度,即得。

1.2.8 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取?；撬釋?duì)照品適量,精密稱定,加蒸餾水制成每1mL含1.0007mg的溶液。

分別移取1.0007mg/mL?；撬針?biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.5、1、2、5、8mL于10mL容量瓶中,加超純水定容至刻度,搖勻,得到7個(gè)濃度系列的?；撬針?biāo)準(zhǔn)品溶液。分別精密吸取以上各濃度對(duì)照品溶液,依法進(jìn)行衍生化反應(yīng),過0.45μm微孔濾膜,吸取2μL注入Waters 2695高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定。

1.2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 稱取?；撬釋?duì)照品0.06010g,精密稱定,加蒸餾水定容至10mL。取文蛤(201208)凍干粉0.25g,精密稱定,按80%、100%、120%的比例加入對(duì)照品,每個(gè)比例平行三份,再分別加入70%乙醇溶液補(bǔ)足到15mL,依照樣品處理方法處理,保存?zhèn)溆谩?/p>

2 結(jié)果與討論

2.1 衍生反應(yīng)條件的優(yōu)化

2.1.1 衍生劑濃度 從圖2可以看出,當(dāng)衍生試劑濃度小于1mg/mL時(shí)峰面積隨衍生試劑濃度的增大而增大,表明在此濃度范圍內(nèi)衍生反應(yīng)不充分。濃度在1.0～5mg/mL時(shí)峰面積穩(wěn)定。為保證衍生反應(yīng)完全,確定衍生試劑的濃度為5mg/mL。

圖2 衍生劑濃度對(duì)?；撬酧PA衍生物色譜峰面積的影響Fig.2 Effect of OPA concentration on HPLC peak area of Taurine OPA derivation

2.1.2 衍生反應(yīng)時(shí)間 衍生反應(yīng)時(shí)間的長短對(duì)?；撬崤cOPA反應(yīng)的程度有著直接的關(guān)系。時(shí)間過短,則反應(yīng)不徹底；時(shí)間過長,則會(huì)使OPA衍生物迅速破壞。這都將影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性或者重現(xiàn)性。因此,準(zhǔn)確的控制衍生反應(yīng)時(shí)間將是整個(gè)測(cè)定的關(guān)鍵。從圖3可以看出,衍生時(shí)間不同,峰面積會(huì)有所變化,在衍生時(shí)間1.5min時(shí)峰面積達(dá)到最大,其檢測(cè)靈敏度最高,隨后開始下降,所以應(yīng)將衍生時(shí)間準(zhǔn)確控制在1.5min。

圖3 衍生反應(yīng)時(shí)間對(duì)牛磺酸OPA 衍生物色譜峰面積的影響Fig.3 Effect of reaction time on HPLC peak area of Taurine OPA derivation

2.2 色譜條件

實(shí)驗(yàn)研究表明,隨著流動(dòng)相中甲醇比例的減少,?；撬岬某龇鍟r(shí)間明顯推遲,且?；撬岬姆逍巫儗?。當(dāng)選用甲醇-純水、甲醇-酸水時(shí),牛磺酸的峰形很寬且拖尾很嚴(yán)重；當(dāng)選用甲醇-0.05mol/L乙酸鈉作為流動(dòng)相,在流速為0.3mL/min,甲醇-0.05mol/L乙酸鈉水溶液(pH6.0),23∶77,?；撬岬某龇鍟r(shí)間是9.805min,此時(shí),樣品中牛磺酸峰與其鄰峰可以達(dá)到完全分離。

2.3 檢測(cè)波長的選擇

紫外全波掃描結(jié)果顯示,?；撬嵩?30nm處有一個(gè)很大的吸收峰,故選擇330nm作為?；撬岬臋z測(cè)波長。

2.4 提取條件的考察

2.4.1 提取方法 實(shí)驗(yàn)中分別考察了超聲提取和水煎煮加熱回流提取兩種方法的提取效率,結(jié)果顯示,超聲三次和水煎煮加熱回流三次提取出的牛磺酸含量相近,考慮操作的復(fù)雜程度,選擇超聲提取的方法提取?；撬?。結(jié)果見圖4a。

2.4.2 提取溶劑 提取溶劑分別為純水、不同比例的甲醇溶液、不同比例的乙醇溶液對(duì)?；撬岬奶崛⌒室妶D4b。由圖4b可知,甲醇作為溶劑對(duì)?；撬岬奶崛⌒Ч黠@低于乙醇,故選擇乙醇作為提取溶劑。同時(shí)考察不同濃度的乙醇可知,隨著乙醇的提高,?；撬岬奶崛÷食氏壬吆笙陆档淖兓厔?shì),提取溶劑為70%乙醇?；撬岬奶崛⌒Ч詈?。乙醇濃度升高可以增大牛磺酸的溶解度,進(jìn)而提高提取效果,但是當(dāng)乙醇濃度為100%時(shí)會(huì)造成?；撬岬暮肯陆怠?/p>

2.4.3 提取溶劑比例 提取溶劑比例分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50對(duì)?；撬岬奶崛⌒室妶D4c。由圖4c可知,在溶劑比例為1∶10～1∶50范圍內(nèi),?；撬岬奶崛『侩S著溶劑比例的升高而提高,當(dāng)溶劑比例大于1∶30時(shí),?；撬岬奶崛『坎辉僭鲩L,故提取溶劑的比例為1∶30。

2.4.4 提取時(shí)間 提取時(shí)間分別為30、60、90、120min時(shí)?；撬岬奶崛⌒Ч妶D4d。從圖4d可以看出,在30～60min范圍內(nèi),四種貝類軟體中?；撬岬奶崛『侩S提取時(shí)間的延長而升高,之后若再延長時(shí)間,提取率不再增長。在一定范圍內(nèi)延長提取時(shí)間有利于?；撬岬某浞秩艹?但提取時(shí)間過長,雖能增加牛磺酸的提取率,但需要耗費(fèi)太多的時(shí)間、精力及功耗,考慮經(jīng)濟(jì),最后提取時(shí)間定為60min。

2.4.5 提取次數(shù) 提取次數(shù)分別為1、2、3、4次的提取效果見圖4e。由圖4e可以看出,牛磺酸的提取含量會(huì)隨著提取次數(shù)的增加而提高。在一定范圍內(nèi)增加提取次數(shù),能夠使?；撬岬奶崛『匡@著升高；但提取次數(shù)過多,雖能稍微提高?；撬崽崛⌒Ч?卻需要耗費(fèi)更多的時(shí)間、能耗。綜合考慮,提取次數(shù)為3次。

圖4 不同提取方法對(duì)?；撬酧PA衍生物含量的影響Fig.4 Effect of different extraction methods on the content of Taurine OPA derivation

2.5 線性關(guān)系考察

以各色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)Y,濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)X,計(jì)算回歸方程。進(jìn)樣濃度與峰面積呈良好的線性正相關(guān),相關(guān)系數(shù)R2=0.9995,回歸方程y=13098x-1696.3。取對(duì)照品溶液,用蒸餾水依次稀釋制成一系列由高到低的梯度濃度溶液,然后進(jìn)行衍生化反應(yīng),測(cè)定峰面積為噪音3倍(S/N=3)時(shí)進(jìn)樣濃度的檢出限(LOD)為0.5003μg/mL:測(cè)定峰面積為噪音10倍(S/N=10)時(shí)進(jìn)樣濃度的定量限(LOQ)為1.5011μg/mL。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

分別精密移取“2.5”項(xiàng)下0.20014、0.010007mg/mL和0.80056mg/mL?；撬釋?duì)照品溶液,依法衍生,每種濃度平行處理3份,當(dāng)日連續(xù)進(jìn)樣6次,則日內(nèi)精密度RSD分別為2.82%、2.35%、1.70%。此外,連續(xù)三天分別進(jìn)樣3次,記錄峰面積,并計(jì)算三種濃度點(diǎn)日間精密度RSD值分別為1.89%、2.69%、2.33%。

2.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取文蛤軟體凍干粉(2012.8)0.5g,精密稱定,按供試品溶液制備方法平行制備6份,依法衍生,經(jīng)0.45μm微孔濾膜,吸取2μL進(jìn)樣,每個(gè)樣品平行測(cè)定3次,記錄峰面積,計(jì)算其中?；撬岬钠骄禐?3.60g/kg,RSD值為1.88%。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

移取“2.7”項(xiàng)下樣品1溶液,依法衍生,經(jīng)0.45μm微孔濾膜,每隔半個(gè)小時(shí)進(jìn)樣一次(2μL),觀察測(cè)定時(shí)間對(duì)待測(cè)物穩(wěn)定性的影響。在衍生反應(yīng)后的4h之內(nèi),測(cè)得的?；撬岷康腞SD值小于5%；而4h后,測(cè)得的?；撬岷康腞SD值大于5%。結(jié)果如圖5。所以,在4h之內(nèi),衍生物是穩(wěn)定的。

圖5 衍生物穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.5 Stability experiment results of Taurine OPA derivation

表2 菲律賓蛤仔、文蛤、青蛤和四角蛤蜊不同采收時(shí)間軟體原料中?；撬岷繙y(cè)定結(jié)果Table 2 Contents of Taurine in different harvest time of Ruditapes philippinarum, Meretrix meretrix Linnaeus,Cyclina sinensis,and Mactra veneriformis Reeve

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

分別移取上述溶液1mL,依法衍生,進(jìn)樣分析,記錄峰面積,采用外標(biāo)法計(jì)算其中?；撬岬臐舛?。結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Recovery experiment results

2.10 樣品含量測(cè)定

分別取菲律賓蛤仔、青蛤、文蛤、四角蛤蜊蛤的軟體2012年8月～2013年7月共12個(gè)月的凍干粉0.5g,精密稱定,每份樣品平行處理三份,按“1.2.7”項(xiàng)下方法制備樣品溶液及衍生化反應(yīng),按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,進(jìn)樣量2μL,測(cè)得峰面積,由峰面積外標(biāo)法定量,結(jié)果見表2。

從表2可以看出,四種貝類軟體中都含有較為豐富的牛磺酸,其中,菲律賓蛤仔軟體中牛黃酸的含量是相對(duì)較高的,其含量在13.50～42.79mg/g范圍之內(nèi),且最高是在七月份,約為42.79mg/g。其次是文蛤軟體,含量為14.61～27.48mg/g,其中含量最高是在六月份,約為27.48mg/g。而青蛤和四角蛤蜊軟體中牛磺酸的含量是很接近的,分別為7.62～16.59、9.09～15.00mg/g,且二者的最高含量的月份是在六月份,分別約為16.59、15.00mg/g。

3 結(jié)論

鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生化結(jié)合HPLC-UV測(cè)定?；撬崾菄沂称窐?biāo)準(zhǔn)中所采用的分析方法,OPA與巰基試劑在堿性條件下與?；撬嵫杆侔l(fā)生衍生反應(yīng),生成唯一的衍生產(chǎn)物,該產(chǎn)物具有紫外和熒光吸收。已有研究報(bào)道,高加龍等人[16]采用鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生化結(jié)合HPLC-UV測(cè)定馬氏珍珠貝中?；撬岷?。故本課題組也嘗試首次采用鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生化結(jié)合HPLC-UV測(cè)定四角蛤蜊、文蛤、青蛤、菲律賓蛤仔軟體中?；撬岷?結(jié)果表明衍生產(chǎn)物穩(wěn)定,準(zhǔn)確性高,精密度好,在330nm處有良好吸收。

四種貝類軟體最佳采收期的確定(以?；撬釣橹笜?biāo)成分):從表2可以看出,四角蛤蜊、文蛤、青蛤、菲律賓蛤仔四種貝類軟體均含有豐富的?；撬?其中以6、7月份中?；撬岬暮肯鄬?duì)較高。四種貝類中?；撬岬暮肯啾容^而言,菲律賓蛤仔軟體中含有?；撬岬暮渴亲罡叩?尤其是7月份,最高可達(dá)約42.79g/kg,其次是文蛤,其軟體中牛磺酸含量最高是在6月份,約為27.48g/kg。而青蛤和四角蛤蜊軟體中?；撬岬暮肯鄬?duì)較低且含量也較接近,含量最高都是在6月份,分別為16.59、15.00g/kg。

貝類的生長具有較為明顯的季節(jié)性,一般春夏季生長較快,其中夏季水溫25～28℃時(shí)是它的快速生長期,秋冬季生長緩慢。通常在5月至7月期間是貝類生長繁殖最為旺盛,各種營養(yǎng)成分也較為豐富,肥滿度也是最高的,由此我們推測(cè),若從產(chǎn)量和有效成分?；撬岬暮孔兓暇C合考慮,菲律賓蛤仔最佳采收期在7月,而文蛤、青蛤、四角蛤蜊最佳采收期在6月。本實(shí)驗(yàn)通過探討并總結(jié)一年之中四種貝類軟體中牛磺酸的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,證實(shí)海洋貝類軟體含有豐富的?；撬?其對(duì)沿海貝類的品質(zhì)分析具有重大的科學(xué)指導(dǎo)意義,且能夠?yàn)樘烊慌；撬豳Y源的利用提供理論依據(jù)。

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Study on the dynamic accumulation of taurine in four shellfish fleshof Jiangsu east costal and the appropriate harvest times

LI Na1,WANG Xin-zhi1,2,WU Hao1,2,*,YI Rui-zao3,LIU Rui1,2,WANG Ling-chong1,2,HE Bei-bei1,XIE Dong-yun1,CHEN Tao1

(1.Jiangsu Key Laboratory of Research and Development in Marine Bio-resource Pharmaceutics,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210023,China;2.Jiangsu collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization,Nanjing 210023,China；3.The 3rd Institute of Oceanography State Oceanic Administration,Xiamen 361005,China)

Four kinds of shellfish from the east coast of Jiangsu province were collected to research the dynamic changes of taurine in the shellfish flesh,in order to investigate the appropriate harvest times. To determine the content of taurine,a method of HPLC-UV combined with opthaldialdehyde was established,and the samples extracted by 70% alcohol were separated by a Kromasil 50mm×2.1mm C18column with the column temperature of 40℃. The mobile phase was composed of 23% methanol and 77% 0.05mol/L sodium acetate(pH6.0)at the flow rate of 0.3mL/min with gradient elution. The UV detection wavelength was 330nm. This method,with high sensitivity,good reproducibility,could accurately determine the content of taurine in four shellfish. Generally,the growth of shellfish had an obvious seasonal characteristic and its growth faster in spring and summer than autumn and winter,especially when water temperature was 25 to 28℃ in summer-the rapid growth period. During the period,the content of taurine reached its peak. Moreover,the content of taurine ofRuditapesphilippinarumreached highest was July,with 42.79mg/g.MeretrixmeretrixLinnaeus,Cyclinasinensis,MactraveneriformisReeve was in June,when the content of taurine was up to 27.48,16.59,15.00mg/g,respectively. In combination production with content changes of effective constituent-taurine,the best harvest time ofRuditapesphilippinarumwas recommended in July,withMeretrixmeretrixLinnaeus,Cyclinasinensis,MactraveneriformisReevewas in June.

Taurine；HPLC；harvest time；shellfish flesh

2014-05-04

李娜(1989-)，女，碩士研究生，研究方向：海洋藥物。

*通訊作者:吳皓(1957-)，女，博士，教授，從事海洋藥物研究開發(fā)以及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

國家公益性行業(yè)專項(xiàng)基金(201305007)。

TS254.1

A

1002-0306(2015)03-0054-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.03.002