楊孟雪，許 潔，俞 捷，楊 波，甘 華，沈 清，李顯文，高 琳

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 內(nèi)分泌科，貴州 遵義 563099； 2.遵義醫(yī)學(xué)院 公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 遵義 563099；3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 腎內(nèi)科,重慶 400016)

專題研究

2型糖尿病腎病不同腎功能時(shí)期血清25(OH)D與部分炎癥因子的相關(guān)性分析

楊孟雪1，許 潔2，俞 捷2，楊 波1，甘 華3，沈 清3，李顯文1，高 琳1

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 內(nèi)分泌科，貴州 遵義 563099； 2.遵義醫(yī)學(xué)院 公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 遵義 563099；3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 腎內(nèi)科,重慶 400016)

目的 測(cè)定正常人群和2型糖尿病腎病(Diabetic kidney disease，DKD)患者血清25 (OH)D濃度及血糖和相關(guān)炎癥因子(TNF-ɑ和IL-8)的水平，探討25 (OH)D與糖代謝和相關(guān)炎癥因子的關(guān)系。方法 收集正常人群、單純2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)和T2DM并DKD患者外周血分離血清，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)所有研究對(duì)象血清25 (OH)D水平，用ELISA法檢測(cè)血清TNF-ɑ及IL-8濃度，同時(shí)測(cè)定血糖參數(shù)進(jìn)行比較。結(jié)果 T2DM患者HBA1c、空腹血糖、餐后2 h血糖水平均高于正常對(duì)照人群，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清25 (OH)D水平T2DM患者低于NGR組(12.8 ± 6.1 ng/mL比 28.0±12.0 ng/mL,P<0.05) , DKD尿毒癥組明顯低于單純T2DM組和早期DKD組，單純T2DM組和早期DKD組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。NGR、單純T2DM患者及早、晚期DKD患者比較，血清TNF-ɑ及IL-8水平均呈逐漸升高趨勢(shì)，NGR組<單純T2DM組<早期DKD組<晚期DKD組(P<0.05)。血清25 (OH)D水平與TNF-ɑ呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 T2DM并DKD患者血清25 (OH)D水平顯著降低，與血清炎癥細(xì)胞因子TNF-ɑ相關(guān)，且隨著DKD病變程度的加重，維生素D缺乏逐漸加重，提示25(OH)D可能與炎癥細(xì)胞因子水平的病理生理變化有關(guān)，并在DKD發(fā)病過(guò)程中可能起一定的作用，檢測(cè)血清維生素D水平或許可為T(mén)2DM腎病的防治提供一些新線索。

2型糖尿??；糖尿病腎?。?5羥維生素D

糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是終末期腎病的一個(gè)主要病因，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)DN與炎癥相關(guān)[1-2]。2007 年美國(guó)腎臟病基金會(huì)(NKF)制定了腎臟病生存質(zhì)量指導(dǎo)指南指南建議用 DKD(diabetic kidney disease)取代 DN。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)DKD患者體內(nèi)也存在微炎癥狀態(tài)[3]。維生素D是一組內(nèi)分泌激素，維生素D除具有調(diào)控鈣、磷代謝和骨穩(wěn)定狀態(tài)等作用外，還參與了宿主防御、炎癥、免疫調(diào)節(jié)和修復(fù)等一系列病理生理過(guò)程。既往認(rèn)為糖尿病和DKD是一種以自然免疫激活和低度炎癥為特征的疾病[4-5]。大量研究證實(shí)維生素D缺乏或不足與糖尿病發(fā)病相關(guān)[6-9]。但維生素D缺乏或不足與DKD的關(guān)系，尤其不同時(shí)期2型DKD患者血清25 (OH)D的水平變化及其與炎癥細(xì)胞因子關(guān)系如何，目前鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)測(cè)定不同時(shí)期2型DKD患者血清25 (OH)D濃度、血清TNF-ɑ、IL-8濃度及血糖代謝指標(biāo)的水平，旨在探討25 (OH)D與炎癥細(xì)胞因子和糖代謝的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 收集2009年5月至2014年10月遵義醫(yī)學(xué)院體檢正常者20例，男性10例，女性10例，平均年齡：59±12歲，經(jīng)檢查體格健康，并排除糖尿病、高血壓、冠心病及腎病等內(nèi)分泌代謝性疾病病史，均無(wú)糖尿病家族史。同時(shí)收集2009年5月至2014年10月重慶醫(yī)科大學(xué)及遵義醫(yī)學(xué)院腎內(nèi)科及內(nèi)分泌科2型DN尿毒癥患者30例，男性16例，女性14例，平均年齡：59±10歲，早期2型DKD患者10例，男性6例，女性4例，平均年齡：56±7歲。糖尿病診斷均符合1999年世界衛(wèi)生組織(WHO)糖尿病診斷和分型標(biāo)準(zhǔn)[10]。谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)水平<1.0，空腹血糖低于9.0 mmoL/L，HbAlc低于8.0%納入。2型DKD患者診斷均符合2007年ADA的DN診斷標(biāo)準(zhǔn)。2型DKD尿毒癥患者符合美國(guó)腎臟基金會(huì)制定的慢性腎衰竭(尿毒癥期)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]：內(nèi)生肌酐清除率<15 mL/min，且病情穩(wěn)定，未接受透析治療(4組入選者基本情況見(jiàn)表1)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①1型及繼發(fā)性糖尿??；②急性感染性疾??；③心、肝功能不良；④近3個(gè)月發(fā)生糖尿病急性并發(fā)癥及感染；⑤妊娠、哺乳；⑥其他腎病、結(jié)締組織病和自身免疫性疾病；⑦腫瘤、心腦血管意外、哮喘、使用對(duì)研究有影響的藥物等。所有入選者為中國(guó)漢族彼此間無(wú)親緣關(guān)系的人群。本研究獲得患者本人同意及重慶醫(yī)科大學(xué)和遵義醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑與材料 GADA測(cè)定：采用美國(guó)BioMerica公司試劑盒，用酶聯(lián)免疫法測(cè)定。TNF-ɑ、IL-8測(cè)定：采用美國(guó)Biosource公司試劑盒，用酶聯(lián)免疫法測(cè)定。HbA1c測(cè)定：采用電化學(xué)發(fā)光法，應(yīng)用Diastar 糖化血紅蛋白分析儀檢測(cè)。血常規(guī)應(yīng)用XE-2100全自動(dòng)分析儀檢測(cè)。空腹血糖和血脂的測(cè)定：空腹抽取靜脈血，采用奧林帕斯全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。25 (OH)D檢測(cè)采用美國(guó)羅氏公司試劑盒，用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定。

1.3 血標(biāo)本的采集 采集研究對(duì)象晨起空腹靜脈血20 mL,立即將3 mL標(biāo)本送檢驗(yàn)科檢測(cè)血糖、血脂等指標(biāo)，2 mL血標(biāo)本室溫靜置30 min后，血液不抗凝，3 000 r/min，低溫離心，15min，取上層血清，置-80 ℃冰箱保存待用。

2 結(jié)果

2.1 病人的基線特征 4組間性別、年齡、BMI、LDL-c和HDL-c差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)； 2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)患者HBA1c、空腹血糖、餐后2h血糖水平高于正常對(duì)照人群，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表1)。

組別男/女年齡(歲)BMI(kg/m2)HBA1c(%)空腹血糖(mmol/L)餐后2h血糖(mmol/L)正常對(duì)照10/1059±1223．6±3．55．8±0．95．2±0．57．6±1．9單純T2DM組13/1258±1923．9±2．17．8±0．5?7．2±1．9?12．5±3．9?早期DKD組6/456±7 23．0±2．86．8±1．2?#8．1±1．6?#10．6±5．2?#DKD尿毒癥組16/1459±1023．6±4．27．5±0．9?Δ8．8±2．7?#Δ9．8±3．1?#ΔP0．8160．520．580．0450．0240．016

*P<0.05 vs正常對(duì)照組；#P<0.05 vs單純T2DM組；ΔP<0.05 vs早期DKD組。

2.2 不同組間血清25 (OH)D水平的比較(見(jiàn)圖1) T2DM合并DKD患者病情由輕到重血清25 (OH)D水平逐漸降低，單純T2DM組(15.5±5.2 ng/mL)、早期DKD組(12.8±5.6)和DKD尿毒癥組(8.2±4.5)ng/mL，均明顯低于NGR組(28.0±12.0 ng/mL，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與單純T2DM組比較，早期DKD組和DKD尿毒癥組血清25 (OH)D水平均低于單純T2DM組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DKD尿毒癥組血清25 (OH)D水平比早期DKD低，差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

NGR：正常糖調(diào)節(jié)；T2DM：?jiǎn)渭?型糖尿??；T2DM-E：早期DKD組; T2DM-L：晚期DKD組 。* P < 0.05 vs 正常對(duì)照組； # P < 0.05 vs單純T2DM組；Δ P < 0.05 vs早期DKD組。

2.3 不同組間血清TNF-ɑ及IL-8水平的比較(見(jiàn)表2) NGR、單純T2DM患者及早、晚期DKD患者比較，血清TNF-ɑ及IL-8水平均呈逐漸升高趨勢(shì)，NGR組<單純T2DM組<早期DKD組<晚期DKD組(P<0.05)。

組別TNF-ɑIL-8正常對(duì)照組18．5±10．74．2±0．6單純T2DM組20．8±10．5?5．8±0．8?早期DKD組23．4±9．6?#5．4±1．2?DKD尿毒癥組35．5±11．9?#Δ6．6±1．9?#Δ

*P<0.05 vs正常對(duì)照組；#P<0.05 vs單純T2DM組；ΔP<0.05 vs早期DKD組。

2.4 相關(guān)分析 相關(guān)分析顯示血清25 (OH)D水平與TNF-ɑ呈負(fù)相關(guān)(r=-0.368,P<0.05)。

3 討論

糖代謝紊亂參與了DKD的發(fā)病[11]，本研究也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。此外，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)DKD發(fā)病還可能與炎癥相關(guān)[1-3]。本研究也發(fā)現(xiàn)DKD尿毒癥患者血清TNF-ɑ及IL-8水平明顯高于其它2組T2DM患者和NGR組,提示血漿炎癥細(xì)胞因子可能與T2DM和DKD的發(fā)生和發(fā)展有一定的關(guān)系。

維生素D是一種新的神經(jīng)內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)激素，維生素D除具有調(diào)控鈣、磷代謝和骨穩(wěn)定狀態(tài)等作用外，還參與了炎癥及免疫調(diào)節(jié)等一系列病理生理過(guò)程。 然而，維生素D缺乏或不足與DKD的關(guān)系，尤其不同時(shí)期2型DN患者血清25 (OH)D的水平變化及其與炎癥細(xì)胞因子關(guān)系如何，目前鮮見(jiàn)報(bào)道。為此，本研究測(cè)定了糖尿病和不同時(shí)期DN患者血清25 (OH)D與相關(guān)炎癥細(xì)胞因子TNF-ɑ和IL-8水平，并與NGR組進(jìn)行了比較，同時(shí)分析了以上研究對(duì)象血清25 (OH)D與相關(guān)炎癥細(xì)胞因子和與糖代謝指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果表明血清25 (OH)D水平T2DM患者低于NGR組, DKD尿毒癥組明顯低于單純T2DM組和早期DKD組，單純T2DM組和早期DKD組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與前人研究結(jié)果一致[12-13]。

本研究還發(fā)現(xiàn)4組血清TNF-ɑ及IL-8水平均呈逐漸升高趨勢(shì)，NGR組<單純T2DM組<早期DKD組<晚期DKD組，提示DKD發(fā)病還可能與炎癥相關(guān)，這與前人研究結(jié)果相似[1-2]。同時(shí)，本研究線性相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，血清25 (OH)D水平與TNF-ɑ呈負(fù)相關(guān)。提示炎癥細(xì)胞因子對(duì)T2DM和DKD發(fā)生發(fā)展的整個(gè)過(guò)程可能都存在影響，且25 (OH)D可能與炎癥細(xì)胞因子水平的病理生理變化有關(guān)。

由于DKD患者機(jī)體存在極其復(fù)雜的代謝、免疫功能紊亂，一旦發(fā)展到終末期腎衰竭，往往比其它腎臟疾病治療更加辣手。因此進(jìn)一步探索其發(fā)病機(jī)制，以便制定更加有效的防治措施，已成為當(dāng)前糖尿病和腎臟病學(xué)界十分熱點(diǎn)的課題。

總之，本文研究結(jié)果初步揭示了DKD患者外周血25 (OH)D水平與炎癥細(xì)胞因子的關(guān)系，從而可能為有效防治DKD的發(fā)生發(fā)展提供一定依據(jù)，但其具體機(jī)制目前不清楚，有待進(jìn)一步研究探索。

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[收稿2015-01-25;修回2015-03-10]

(編輯：王福軍)

Correlation between the serum 25 (OH) D and part inflammatory cytokines levels in patients with type 2 diabetic nephropathy during different periods

YangMengxue1，XuJie2，YuJie2，YangBo1，GanHua3，ShenQing，LiXianwen1，GaoLin1

(1.Deparment of Endocrinology,The First Affliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099, China；2.School of Public Health, Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China；3.Department of Nephrology,The First Affliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400016,China)

Objective To measure the levels of serum 25 (OH) D concentrations, blood glucose, lipids and relevant inflammatory factors (TNF-ɑ and IL-8) in healthy people and type 2 diabetic kidney disease (DKD) patients and further determine the relationship among 25 (OH) D, glucose metabolism and relevant inflammatory factors.Methods The separated peripheral blood serum in healthy people, simple type 2 diabetes mellitus (T2DM) and type 2 DKD patients were collected. Serum 25 (OH) D levels were measured by chemiluminescence method. Serum TNF-ɑ and IL-8 concentrations were assayed by ELISA. Meanwhile, the glycemic parameters were detected and compared.Results HBA1c, fasting blood glucose, 2-h postprandial glucose levels in T2DM patients were significantly higher than those in healthy control groups (P<0.05). Serum 25 (OH) D level (12.8+6.1 ng/ml) in patients with T2DM was lower than that in NGR grourp (28+12 ng/ml). Serum 25 (OH) D level in DKD uremic group was significantly lower than that in the simple T2DM and early DKD groups, while no significant difference of serum 25 (OH) D level between early DN group and simple T2DM group was shown (P>0.05). Serum TNF - ɑ and IL - 8 levels showed an increased tendency in the following compared groups (NGR group

type 2 diabetes；diabetic nephropathy；25 (OH)D

貴州省科技攻關(guān)項(xiàng)目[NO：黔科合SY字(2012)3116]；貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目[NO： 黔科合J字LKZ(2013)53]；遵義醫(yī)學(xué)院博士啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(NO：F-588)。

R587.1

A

1000-2715(2015)02-0133-04