曾林子，曾義學(xué)，劉學(xué)成,袁 偉,張立杰,2,祁 騰，周興余,2

四川省鉤端螺旋體病高發(fā)縣報告病例的準(zhǔn)確性調(diào)查研究

曾林子1，曾義學(xué)1，劉學(xué)成1,袁 偉1,張立杰1,2,祁 騰1，周興余1,2

目的 了解四川省鉤端螺旋體病高發(fā)地區(qū)報告鉤體病例準(zhǔn)確性，為進一步控制鉤體病流行提供科學(xué)依據(jù)。方法 采集2012年鉤體病高發(fā)地區(qū)報告臨床診斷病例血清進行鉤體菌培養(yǎng)，血清學(xué)診斷，對鉤體病檢測結(jié)果為陰性的標(biāo)本進行乙腦、出血熱和立克次體檢測。結(jié)果 共采集87例報告病例的血清標(biāo)本，培養(yǎng)出4株鉤體菌，鉤體菌培養(yǎng)陽性率為4.6%。采集64份病例急性期和恢復(fù)期雙份血清進行鉤體病檢測，其中54例陽性，陽性率為84.4%，采集23份病例單份血清，其中6份鉤體菌檢測陽性，陽性率為26.1%。對27份鉤體檢測陰性標(biāo)本進行乙腦ELISA檢測，陽性1例，出血熱、立克次體檢測結(jié)果均為陰性。結(jié)論 四川省鉤體病高發(fā)地區(qū)臨床診斷鉤體病準(zhǔn)確性較高，但依然需要加強病例雙份血清采集和檢測。

鉤端螺旋體病;高發(fā);準(zhǔn)確性調(diào)查

鉤端螺旋體病簡稱鉤體病，是由致病性鉤端螺旋體引起的動物疫源性傳染病。近年來，全國發(fā)病率和死亡率有所下降，但四川省的發(fā)病率和死亡率仍居于全國前列。因此鉤端螺旋體病的研究和防治仍然是四川省的重點防治工作之一。四川省鉤體病疾病監(jiān)測系統(tǒng)顯示，2006年至2011年共報告1 015例鉤體病病例，實驗室診斷病例僅占5.6%(57/1 015)，其余均為臨床診斷。確診病例所占比例低的原因之一是由于很多病例未采集血清標(biāo)本檢測，在1 015例報告的鉤體病病例中，只有15%(150/1 015)的病例采集了血清標(biāo)本，而且主要以單份血清為主，采集到雙份血清的病例占全部報告病例的4.9%。而四川省鉤體病發(fā)病率最高的縣(儀隴縣)2010年和2011年報告的120例病例均為臨床診斷，無實驗室確診病例。低采樣率對鉤體病的診斷造成很大影響，導(dǎo)致無法證實目前監(jiān)測系統(tǒng)中報告的臨床診斷鉤體病病例是否為鉤體病，因此對于鉤體病的整體流行病學(xué)特征難以作出判斷。為了解四川省疾病監(jiān)測系統(tǒng)報告的鉤體病病例診斷的可靠性，特開展本研究，以明確監(jiān)測系統(tǒng)報告病例的可靠程度，為進一步完善鉤體病監(jiān)測系統(tǒng)提供參考。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本采集 選取近3年來四川省鉤體病報告病例最多的3個縣：儀隴縣、樂至縣和安岳縣，于2012年鉤體高發(fā)季節(jié)采集臨床診斷鉤體病例急性期和恢復(fù)期雙份血清。

1.2 方法 就診醫(yī)院采集病例急性期血液進行鉤端螺旋體病原培養(yǎng)，并將剩余血液分離血清，56 ℃水浴滅活30 min,置低溫冰箱備檢并將離心后血清和血塊冷凍保存。待病例發(fā)病3～4周后，由縣疾病預(yù)防控制中心(CDC)專業(yè)人員入戶采集病例恢復(fù)期血清，送至四川省CDC實驗室進行鉤體病，乙腦、出血熱檢測，對急性期離心分離的血塊進行普氏和莫氏立克次體檢測。

1.2.1 鉤體病原培養(yǎng)、分離 在無菌操作條件下將病例急性期血液分別接種EMJH培養(yǎng)基中，置28 ℃培養(yǎng)，每周用暗視野顯微鏡觀察1次，陽性者轉(zhuǎn)種，菌種生長良好后，進行血清分群鑒定。培養(yǎng)分離出的鉤體菌株按中國藥品生物制品檢定所的菌株檢定程序進行鑒定，標(biāo)準(zhǔn)血清購自中國藥品生物制品檢定所。

1.2.2 血清學(xué)實驗 按照《WS 290-2008鉤端螺旋體病診斷標(biāo)準(zhǔn)》[1]對鉤體抗體檢測為陰性的標(biāo)本進行乙腦、出血熱快速檢測；對急性期離心分離的血塊按照《WS215-2008流行性和地方性斑疹傷寒診斷標(biāo)準(zhǔn)》進行普氏和莫氏立克次體檢測[2]。

1.2.3 鉤體標(biāo)準(zhǔn)菌株 國內(nèi)15群15型鉤端螺旋體標(biāo)準(zhǔn)代表株由衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所提供。

2 結(jié) 果

2012年3個鉤體高發(fā)縣共報告病例87例，完成87例病例采血,其中采集64例病例雙份血清，23例病例單份血清。

2.1 鉤體病原培養(yǎng)、分離 從87份病例急性期血液中培養(yǎng)出4株鉤體菌，陽性率為4.6%。其中儀隴縣分離出3株陽性菌株為七日熱群，安岳縣分離出1株陽性菌株為澳洲群。

2.2 鉤體血清學(xué)檢測 對患者恢復(fù)期血清較急性期血清抗體效價有4倍及4倍升高，或單份血清效價≥1∶400，判斷為陽性。64份雙份血清陽性率為84.4%(54/64),23份單份血清陽性率為26.1%(6/23)，見表1。

表1 四川省3個鉤體病高發(fā)縣2012年血清抗體檢測結(jié)果

2.3 群型分布 60份陽性血清，共計4個血清型。其中以黃疸出血群為主38份，其次為秋季群14份，七日熱群和澳洲群分別為6份和2份。

2.4 其它檢測 對27份鉤體檢測陰性標(biāo)本(雙份10份，單份17份)開展立克次體(普氏和莫氏)、乙腦、出血熱檢測，從儀隴縣1例病例雙份血清中查出乙腦雙份血清抗體IgG 4倍增高，出血熱快診檢測儀隴縣和樂至縣各1名IgG陽性，既往感染過出血熱，見表2。

3 討 論

鉤體病是由致病性鉤體引起的一種全身性感染和免疫反應(yīng)的臨床病理過程，臨床以早期鉤端螺旋體敗血癥，中期的各器官損害和功能障礙，以及后期的各種變態(tài)反應(yīng)并發(fā)癥為特點。重癥患者可發(fā)生肝腎功能衰竭和肺彌漫性出血，常危及患者生命，世界衛(wèi)生組織曾估計20 世紀(jì)末時全球鉤體病年發(fā)病數(shù)高達50萬例[3]。

近年全國鉤體病例主要分布在南方地區(qū)的四川、云南、貴州及沿海地區(qū)如廣東和福建省[4]。四川省發(fā)病數(shù)在全國發(fā)病數(shù)位居第一，主要集中在儀隴縣、安岳縣和樂至縣，而此3個縣并非鉤體病國家監(jiān)測點。

儀隴縣、樂至縣、安岳縣疑似鉤體病人血清鉤端螺旋體抗體檢測結(jié)果表明，感染以黃疸出血群為主，陽性率為63.3%，其次為秋季群、七日熱群，澳洲群，分別為23.3%，10%，3.3%，這與四川省鉤端螺旋體病患者間主要流行菌群、主要宿主動物流行菌群基本一致[5-8]。因此，此3縣易感人群應(yīng)接種以黃疸出血群、秋季群和七日熱群為主的多價疫苗，從而起到保護作用。

表2 3個縣鉤體病檢測陰性其他鑒別診斷

Note: *fast diagnosis test, **ELISA test, ***PCR test.

從鉤體菌培養(yǎng)結(jié)果來看，87份血液標(biāo)本只分離培養(yǎng)出4株菌，原因可能在于病例發(fā)病初期癥狀不典型，在前往醫(yī)院就診之前已經(jīng)使用抗生素。因此，疾控人員在鉤體流行季節(jié)，應(yīng)針對農(nóng)村地區(qū)下田收割水稻人群進行健康宣傳。菌株鑒定結(jié)果表明，儀隴縣分離的3株菌均為七日熱群，安岳縣分離的1株菌株為澳洲群，與血清抗體檢測結(jié)果一致。

從儀隴縣2009-2012年報告的143例病例職業(yè)分布來看，農(nóng)民占97.2%，高于全國或其他南方省份報告病例職業(yè)分布[4,9]，農(nóng)民由于經(jīng)濟條件落后和自我防護意識差，收割農(nóng)田時赤腳進入水田，極易接觸到帶菌動物的尿液。因此鉤體病高發(fā)縣在進行鉤體病防治宣傳時應(yīng)強調(diào)放干稻田水再進行稻谷收割的重要性，加強群眾防護意識，下田勞作時注意手腳的防護，建議穿筒靴下田，避免接觸疫水。近幾年來，由于鉤體病發(fā)病率較低，群眾防病意識逐漸淡漠，鉤體疫苗副作用大，大多數(shù)群眾不會主動接種鉤體疫苗，免疫力下降，極易引起鉤體病的流行。應(yīng)加強健康教育工作，廣泛地開展鉤體病防治知識宣傳，并在監(jiān)測基礎(chǔ)上對儀隴、樂至、安岳高發(fā)地區(qū)人群開展有針對性地鉤體菌苗的全程預(yù)防接種。

通過此次調(diào)查，3個鉤體高發(fā)縣醫(yī)療單位醫(yī)務(wù)人員對于鉤端螺旋體臨床診斷正確，與實驗室診斷基本一致，診斷準(zhǔn)確性較高，但是還需加強實驗室檢驗?zāi)芰?，使得臨床診斷與實驗室診斷相輔相成，更快速地找準(zhǔn)病原，及時進行治療，保護人民身體健康。

[1]Standardization Administration of the People's Republic of China, WS 290-2008 Diagnostic Criteria For Leptospirosis[S].Beijing:People’s Health publishing House,2008. (in Chinese) 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)委員會. WS 290-2008鉤端螺旋體病診斷標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：人民出版社，2008.

[2]Standardization Administration of the People's Republic of China WS 215-2008, Diagnostic Criteria For Epidemic Typhus And Endemic Typhus[S].Beijing:People’s Health publishing House,2008. (in Chinese) 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)委員會. WS215-2008流行性和地方性斑疹傷寒診斷標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：人民出版社，2008.

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Accuracy investigation of the reported leptospirosis cases in high prevalence counties in Sichuan Province, China

ZENG lin-zi1,ZENG Yi-xue1,LIU Xue-cheng1,YUAN Wei1,ZHANG Li-jie2,QI Teng1,ZHOU Xing-yu1,2

(1.SichuanCenterforDiseaseControlandPrevention,Chengdu610041,China; 2.ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China)

To analyze the diagnosis accuracy of the reported cases in high prevalence counties in Sichuan province and to provide a scientific basis for prevention of leptospirosis, sera of clinical diagnosis cases in three high incident areas in 2012 were collected and examined by microscopic agglutination test (MAT). Pathogens were isolated from the samples and then cultured, and the strains were identified by MAT. Negative samples were conducted differential detection of Japanese encephalitis, haemorrhagic fever, and rickettsia. Results showed that 87 cases of leptospirosis were reported in three high prevalence counties in 2012. All cases sera were examined and cultivated for 4 strains ofLeptospira. Pathogens culture positive rate was 4.6%. Totally 64 cases of double serum were collected, of which 54 cases were positive for antibodies againstLeptospira, positive rate was 84.4%. A total of 23 cases of single serum were testes and 6 were positive, with the positive rate of 26.1%. The 27 negative serum samples were conducted Japanese encephalitis ELISA detection, and 1 was positive, and the haemorrhagic fever and rickettsia test results were negative. The diagnosis accuracy of the reported cases in high prevalence counties in Sichuan Province is high, but still need to strengthen collecting and testing of double serum for patient.

leptospirosis; high prevalence counties; accuracy investigation

Zhou Xing-yu, Email: zhouxingyu572@sina.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2015.12.024

周興余，Email:zhouxingyu572@sina.com

1.四川省疾病預(yù)防控制中心，成都 610041; 2.中國疾病預(yù)防控制中心，北京 102206

R514.4

A

1002-2694(2015)12-1200-04

2015-05-07；

2015-08-04