王呂 熊斯誠 鄒旭強(qiáng) 陳超超 邵輝鋒 陳雪嵐
摘 要 以驢抗鼠二抗包被微孔板,以捕獲方式包被抗赭曲霉毒素A(OTA)單克隆抗體,利用噬菌體隨機(jī)七肽庫篩選OTA模擬抗原表位,并以其替代檢測(cè)抗原,建立了基于噬菌體展示技術(shù)的酶聯(lián)免疫吸附分析(Phage ELISA)檢測(cè)OTA的方法。結(jié)果表明,篩選獲得的模擬OTA 抗原表位七肽氨基酸序列為GMSWMMA?;谀M表位噬菌體建立的Phage ELISA方法半數(shù)抑制濃度(IC50值)為(0.15 ± 0.02) ng/mL,檢測(cè)OTA的線性范圍為0.03~0.50 ng/mL,OTA的檢出限為0.03 ng/mL,且Phage ELISA與其它4種常見真菌毒素(黃曲霉毒素B1、伏馬毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及玉米赤霉烯酮)無交叉反應(yīng)。大米樣品OTA加標(biāo)實(shí)驗(yàn)表明,批內(nèi)加標(biāo)回收率為97.0%~115.2%,批間加標(biāo)回收率為107.2%~123.1%,與ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較,無顯著性差異。
關(guān)鍵詞 赭曲霉毒素A;噬菌體展示肽庫;模擬表位;酶聯(lián)免疫吸附法endprint