支氣管哮喘兒童血清1，25－(OH)2D3與MMP－9的相關(guān)性研究

兒童支氣管哮喘是兒童最常見的慢性呼吸道疾病，是一種高氣道反應(yīng)性的炎癥性疾病，涉及到多種炎癥介質(zhì)和炎癥細(xì)胞對(duì)氣道的作用［1］。血清1，25－(OH)2D3是人體內(nèi)非常重要的維生素D活性代謝產(chǎn)物，也有文獻(xiàn)稱之為一種前體激素，其活性型為1，25－(OH)2D3。其作用原理與經(jīng)典的類固醇激素一樣，主要是通過維生素受體(Vitamin D receptor，VDR)結(jié)合而產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)。最近的流行病學(xué)研究表明補(bǔ)充1，25－二羥維生素D3不僅可以有效改善激素的治療反應(yīng)，而且還可以提高CD4+細(xì)胞在地塞米松作用下分泌IL－10的能力［2］。MMP－9是一類結(jié)構(gòu)中含有鋅和鈣等金屬離子的蛋白酶，可以降級(jí)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)蛋白，在炎癥的發(fā)病過程中起著重要作用。雖然慢性哮喘已經(jīng)證實(shí)多是由嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥因子的脫顆粒造成，但是近幾年大量研究表明氣道重塑所造成的不可逆性的氣流阻塞和肺功能損害也是慢性哮喘的重要因素之一。張玉彩等在研究中發(fā)現(xiàn)在慢性哮喘大鼠模型中1，25－(OH)2D3不但可以提高地塞米松的抗炎能力，而且還有一定的免疫調(diào)節(jié)的作用［3］。本研究通過比較三個(gè)程度哮喘兒童與正常兒童血清中1，25－(OH)2D3和MMP－9的含量來(lái)探討1，25－(OH)2D3與氣道重塑的關(guān)系，并有效地針對(duì)性地為治療兒童支氣管哮喘提供一個(gè)新的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料:收集2014年1月至10月住院并確診為哮喘的患兒90例，年齡為1～6歲，符合支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，并且根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)選取哮喘兒童輕度持續(xù)級(jí)、中度持續(xù)級(jí)和重度持續(xù)級(jí)三個(gè)級(jí)別，每組30例。隨機(jī)選取健康體檢兒童30例。所有兒童均無(wú)慢性肝腎疾病，均無(wú)其他代謝性疾病。各組間性別和年齡的構(gòu)成比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法:入托體檢的健康兒童，清晨空腹，肘正中靜脈抽血5mL;哮喘兒童在治療前，清晨空腹，肘正中靜脈抽血5mL。所有標(biāo)本3000轉(zhuǎn)/分離心10min，分離出血清，－20℃冰箱保存等待統(tǒng)一測(cè)量。提前30min從冰箱取出1，25－(OH)2D3和MMP－9檢測(cè)試劑盒(大連寶晶技術(shù)有限公司)，室溫放置。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明，使用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，實(shí)驗(yàn)過程由同一人完成，減少主觀誤差。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS軟件17.0對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P＜0.05和P＜0.01表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 從輕、中、重三個(gè)程度的哮喘患兒的血清1，25－(OH)2D3的含量來(lái)分析:輕度持續(xù)期哮喘患兒的血清1，25－(OH)2D3與對(duì)照組比較，無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中度持續(xù)期哮喘患兒的血清1，25－(OH)2D3含量低于對(duì)照組(P＜0.05);重度持續(xù)期哮喘患兒的血清1，25－(OH)2D3含量明顯低于對(duì)照組(P＜0.01)(見表1)。

表1 各組兒童1，25－(OH)2D3含量(±s)

表1 各組兒童1，25－(OH)2D3含量(±s)

注:*表示與健康體檢組比較;#表示與輕度持續(xù)組比較;Δ表示與中度持續(xù)組比較

組別例數(shù)1，25－(OH)2D3(ng/mL健康體檢組3036.17±12.87輕度持續(xù)組3028.51±6.01*中度持續(xù)組3022.21±8.41*#重度持續(xù)組3015.11±4.71*#Δ

2.2 從輕、中、重三個(gè)程度的哮喘患兒血清中的MMP －9的含量來(lái)分析:輕度持續(xù)期哮喘患兒的血清MMP－9與對(duì)照組比較，無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中度持續(xù)期哮喘患兒的血清MMP－9含量高于對(duì)照組(P＜0.05);重度持續(xù)期哮喘患兒的血清MMP－9含量明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)(見表2)。

表2 各組兒童MMP－9含量(±s)

表2 各組兒童MMP－9含量(±s)

注:*表示與健康體檢組比較;#表示與輕度持續(xù)組比較;Δ表示與中度持續(xù)組比較

組別例數(shù)MMP－9(pg/mL)健康體檢組300.53±0.25輕度持續(xù)組300.99±0.02*中度持續(xù)組303.29±1.21*#重度持續(xù)組305.87±1.43*#Δ

3 討論

兒童支氣管哮喘是一種氣道的變態(tài)反應(yīng)疾病，它由多個(gè)因子誘發(fā)，容易反復(fù)的發(fā)作。兒童的哮喘常在夜間或者清晨發(fā)作，是兒童期的常見病和多發(fā)病。哮喘的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，大量的研究資料表明嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)造成的氣道炎癥損傷已經(jīng)成為確證的結(jié)論。近幾年對(duì)哮喘的研究則把重點(diǎn)放在了氣道重塑這個(gè)方面。氣道重塑的病理結(jié)構(gòu)改變主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞的脫落和再生、杯狀細(xì)胞和腺體的增生，上皮下膠原和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的沉積平滑肌細(xì)胞聚集增多，血管形成及血管軟骨減少［5］。這種氣道的重塑最終導(dǎo)致氣流不可逆阻塞，肺功能損害。Araujo［6］研究發(fā)現(xiàn)MMP－9是ECM降解的關(guān)鍵酶，不僅是其代謝的限速酶，而且是導(dǎo)致氣道重塑的關(guān)鍵原因。除此之外，在重癥哮喘患者的支氣管平滑肌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了MMP－9的高表達(dá)，以上這些報(bào)道都表明了MMP－9參與哮喘的病理過程。

目前，對(duì)于哮喘兒童的治療主要是使用布地奈德等激素藥物的霧化治療。激素的治療效果雖然明顯，但是長(zhǎng)期使用的不良反應(yīng)更為明顯，尤其是對(duì)兒童的影響更是不容樂觀。本文旨在研究支氣管哮喘兒童血清中的1，25－(OH)2D3是否與氣道重塑有所關(guān)聯(lián)，這樣就可為臨床提供一種降低哮喘反應(yīng)的新方法。宋穎芳［7］等人僅在大鼠哮喘模型中研究過大鼠血清中1，25－(OH)2D3可以降低MMP－9的含量，降低了氣道重塑，并沒有在兒童支氣管哮喘的血清中研究過兩者的關(guān)系，沒有在兒科治療的理論上對(duì)其加以詮釋。朱永潔等［8］在研究中得出了1，25－(OH)2D3可以輔助治療兒童支氣管哮喘的結(jié)論，只是從降低氣道炎癥反應(yīng)的方面證實(shí)了其治療作用。本文研究發(fā)現(xiàn)哮喘患兒血清中的MMP－9含量高于對(duì)照組，并且與哮喘的嚴(yán)重程度相關(guān)，哮喘越嚴(yán)重，表現(xiàn)出血清中MMP－9的含量越高。這表明1，25－(OH)2D3對(duì)哮喘有一定的抑制作用，并且降低了MMP－9在支氣管平滑肌細(xì)胞的高表達(dá)，這與宋穎芳等人在大鼠模型的研究中得出的結(jié)論相一致。最近的流行病學(xué)研究表明補(bǔ)充1，25－二羥維生素D3不僅可以有效改善激素的治療反應(yīng)，而且還可以提高CD4+細(xì)胞在地塞米松作用下分泌IL－10的能力。此次實(shí)驗(yàn)從患兒血清的1，25－二羥維生素D3和MMP－9的相關(guān)性來(lái)分析，得出了1，25－二羥維生素D3可以降低患兒血清MMP－9的表達(dá)，改善氣道重塑，治療兒童支氣管哮喘的結(jié)論。以上結(jié)論提示臨床可以使用1，25－二羥維生素D3輔助治療兒童哮喘，此方法較為安全，具有一定的前景，值得進(jìn)一步的深入研究。

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［2］Xysrrakis E，Kusumakar S，Boswell S，et al.Reversing the defective induction of IL－10 secreting regulatory T cells in glucocorticoid－resistant asthma patients［J］.Clin Invest，2006，116:146～155.

［3］張玉彩，費(fèi)艷，張林.哮喘兒童血清1，25－(OH)2D3與IL－10水平及肺功能的相關(guān)性研究［J］.成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，8(3):333～335.

［4］中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)呼吸學(xué)組.兒童支氣管哮喘診斷與防治指南［J］.中華兒科雜志，2008，42(10):100～106.

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［6］Araujo BB，Dolhnikoff M，Silva LF.Extracellular matrix components and regulators in the airway smooth muscle in asthma［J］.Eur Respir，2008，32(1):61～69.

［7］宋穎芳，洪景芳.1，25－(OH)2D3對(duì)慢性哮喘小鼠氣道重塑中MMP－9及NF－κB表達(dá)的影響［J］.中國(guó)呼吸與重癥監(jiān)護(hù)雜志，2013，1(12):36～40.

［8］朱永潔，周曉英.支氣管哮喘兒童血清1，25－(OH)2D3和CRP測(cè)定的臨床意義［J］.上海預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，24(12): 702～703.

熊慧華1，溫艷1，李玉華1，劉艷芳1，張中敏2，馮毅雯1
(1.河北省承德市婦幼保健院，河北承德067000 2.承德附屬醫(yī)院承鋼分院，河北承德067102)

目的:探討支氣管哮喘患兒血清1，25－(OH)2D3與基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP－9)的關(guān)系，為治療患兒哮喘提供一個(gè)新的方法和理論依據(jù)。方法:收集本院住院的支氣管患兒90例，分為輕度持續(xù)級(jí)、中度持續(xù)級(jí)和重度持續(xù)級(jí)三個(gè)級(jí)別，每組30例。隨機(jī)選取30例健康體檢兒童為對(duì)照組。用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定各組血清中的1，25－(OH)2D3和MMP－9的含量。結(jié)果:輕度哮喘組血清中的1，25－(OH)2D3和MMP－9的含量與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中度哮喘組和重度哮喘組血清中的1，25－(OH)2D3和MMP－9的含量與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:哮喘患兒可以通過補(bǔ)充1，25－(OH)2D3來(lái)降低MMP－9在氣道的高表達(dá)，減輕氣道重塑，改善肺部功能，從而達(dá)到治療支氣管哮喘的目的。

哮喘;1，25－二羥維生素D3;基質(zhì)金屬蛋白酶9

The Correlation of Content of Serum 1，25－(OH)2D3and Level of MMP－9 of Children with Asthma

XIONG Huihua，WEN Yan，LI Yuhua，et al
(Children and Women Health Care Hospital of Chengde，Hebei Chengde067000，China)

Objective:To explore the correlation between the level of serum 1，25－(OH)2D3and MMP －9 in children with asthma.Method:90 children with asthma were considered as asthma group，30 healthy children were considered as control group.30 cases of mild persistent group，30 cases of moderate persistent group and 30 cases of severe persistent group were chosen in the asthma children.The level of 1，25－(OH)2D3and MMP－9 were measured by enzyme－linked immunosorbent assay(ELISA).Result:The level of 1，25 －(OH)2D3and MMP－9 in the persistent group was not correlated with the control group.The level of 1，25 －(OH)2D3and MMP－9 in the moderate persistent group and severe persistent group were correlated with the control group.Conclusion:1，25－(OH)2D3can down－regulate the level of the MMP－9 and alleviate the established chronic asthma－induced airway remodeling，thus 1，25－(OH)2D3can improve the lung function and treat the asthma.

Asthma;1，25－(OH)2D3;MMP－9

B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.07.024

1006－6233(2015)07－1131－04