張 虹,李樹偉,李春燕,袁 寒,白紅麗,郭俊明

(1.紅河學(xué)院 云南省高校農(nóng)作物優(yōu)質(zhì)高效栽培與安全控制重點實驗室，云南 蒙自 661100; 2.云南民族大學(xué) 民族藥資源化學(xué)國家民委-教育部重點實驗室，云南 昆明 650500)

顯脈旋覆花根中總黃酮提取方法的研究

張 虹1,李樹偉1,李春燕1,袁 寒1,白紅麗2,郭俊明2

(1.紅河學(xué)院 云南省高校農(nóng)作物優(yōu)質(zhì)高效栽培與安全控制重點實驗室，云南 蒙自 661100; 2.云南民族大學(xué) 民族藥資源化學(xué)國家民委-教育部重點實驗室，云南 昆明 650500)

以顯脈旋覆花根為試驗材料，用乙醇和甲醇為提取劑，采用浸提法分別對顯脈旋覆花根中總黃酮進(jìn)行提取，并用紫外分光光度法進(jìn)行了測定.結(jié)果表明：乙醇70%,甲醇體積分?jǐn)?shù)50%，浸提時間均為24 h時，總黃酮的提取效果較好，乙醇和甲醇提取的總黃酮得率分別為2.33%和1.84%，乙醇的提取效果優(yōu)于甲醇，總黃酮測定方法平均回收率為99.89 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.89%，結(jié)果可靠.

顯脈旋覆花根;總黃酮;提取

顯脈旋覆花(inulanervosawall)，又稱小黑藥，云威靈仙，草威靈，黑威靈等，哈尼語為Ciqnav(遲那)[1，2].為菊科多年生草本植物，高30～50 cm，根莖短，莖圓柱形，淡紅色或紅褐色，密生銹色柔毛，產(chǎn)于四川、廣西、貴州、云南，越南、緬甸、泰國等，在主要云南主要分布省紅河、玉溪、昆明、麗江等地，生于海拔 1 500～2 000 m的山坡草叢、灌木叢中.主要以根入藥，秋季采收，其性平，味微苦，有滋補(bǔ)的作用，功能為祛風(fēng)除濕、活絡(luò)止痛，健胃消食等[3-4].是一種藥食兩用的保健食品，顯脈旋覆花燉肉是人們青睞的美食趙麗等[3]研究了顯脈旋覆花的化學(xué)成分，顯脈旋覆花含有50多種化學(xué)成分，主要有百里香酚、異丁酸百里香酯、戊酸百里香酯等，這些成分具有殺菌、防腐的功能等.目前國內(nèi)尚未見有顯脈旋覆花黃酮類物質(zhì)的研究的報道，而黃酮類化合物具有多種生物活性和藥理作用,無毒副作用，有顯著的的清除人體內(nèi)清除自由基[5-6]，增強(qiáng)心血管功能，抗氧化,增強(qiáng)免疫力降血糖和血脂、降低心肌耗氧量、軟化血管、抗心律不齊、使冠脈和腦血管流量增加等功能等功能，在防癌和脂肪酶等方面有明顯的效果，并且具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用[7-12].

本試驗以顯脈旋覆花根為試驗材料，用不同濃度乙醇、甲醇為總黃酮提取劑，采用浸提法，提取顯脈旋覆花根中的總黃酮，并用紫外分光光度法進(jìn)行了測定，為顯脈旋覆花根的藥用研究提供一定依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗材料

新鮮顯脈旋覆花根購于蒙自市草藥市場.

1.2 儀器及主要試劑

紫外分光光度儀(UV-4802S型紫外-可見分光光度計，上海尤尼柯儀器有限公司).

試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，氫氧化鈉，甲醇、乙醇、硝酸鋁、亞硝酸鈉等均為分析純試劑.

1.3 試驗方法

將新鮮顯脈旋覆花根洗凈，曬干后，剪成小段，置于高速粉碎機(jī)中粉碎，過 0.441 nm 篩，備用.

1.3.1 配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液及標(biāo)準(zhǔn)測定

準(zhǔn)確稱取干燥的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，置100 mL容量瓶中，加入適量60 ℃的70%乙醇或甲醇使其溶解，冷卻后分別用70%乙醇或甲醇稀釋至刻度，搖勻.標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL.精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0，1，2，4，6，8，10 mL分置于25 mL容量瓶中；加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，混勻，放置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，混勻，放置6 min；加4%氫氧化鈉溶液4.0 mL，加30%乙醇或甲醇分別定容至刻度，搖勻，放置16 min.以試劑空白為參比，在510 nm波長處測定溶液的吸光度[13].

以吸光度A為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得到線性回歸方程：甲醇：A=10.354C-0.005 9，R2=0.999 1.乙醇：A=9.892 9C-0.000 9，R2=0.999 4.

1.3.2 樣品提取液的制備

分別稱取4 g顯脈旋覆花根干粉置于100 mL帶塞三角瓶中，分別加入50 mL 30%、50%、70%、80%、95%的乙醇或甲醇溶液，在室溫下，浸泡12、24、36 h后過濾，濾液用相應(yīng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇或甲醇定溶到100 mL的容量瓶中，為樣品提取液.

1.3.3 顯脈旋覆花根總黃酮含量的測定

準(zhǔn)確吸取2 mL提取液，置于25 mL容量瓶中,按1.3.1節(jié)的方法操作，在510 nm下平行測定3次.根據(jù)回歸方程，計算總黃酮的濃度.總黃酮得率%=[提取液濃度×稀釋倍數(shù)×體積/樣品干重×1000]×100%.

1.3.4 穩(wěn)定性試驗

準(zhǔn)確吸取2.0 mL 70%乙醇的提取液于25 mL容量瓶中，按1.3.1節(jié)方法操作，放置1 h，每隔10 min測定一次吸光度.

1.3.5 加樣回收率試驗

取70%乙醇提取液2.0 mL置于25 mL容量瓶中，加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)1.0 mg，余下部分按1.3.1節(jié)方法操作，平行測定5次，計算加標(biāo)回收率.

2 結(jié)果與分析

表1 乙醇提取顯脈旋覆花根總黃酮得率 %

表2 甲醇提取顯脈旋覆花根總黃酮得率 %

由表1～2可知，顯脈旋覆花根以乙醇和甲醇為總黃酮提取劑時，在相同體積分?jǐn)?shù)下，均表現(xiàn)出在浸提時間24 h時總黃酮得率最高，乙醇在36 h最低，甲醇在12 h時最低.

在相同浸提時間內(nèi)，隨體積分?jǐn)?shù)的增加總黃酮得率也不同，乙醇在70%時的總黃酮得率最高， 與80%時總黃酮得率相比最高相差0.27%，以50%時的總黃酮得率相比最高相差0.75%，而甲醇在50%時的總黃酮得率最高，甲醇80%次之，乙醇和甲醇均以30%時的總黃酮得率最低.

以乙醇和甲醇為顯脈旋覆花根總黃酮提取劑時，在相同體積分?jǐn)?shù)下，乙醇的提取效果比甲醇好，乙醇總黃酮的最高得率與甲醇總黃酮的最高得率相比相差0.49%.

2.1 穩(wěn)定性試驗

結(jié)果表明，1 h內(nèi)顯脈旋覆花根總黃酮提取液的穩(wěn)定性良好，RSD為0.90%.

2.2 加樣回收率試驗

顯脈旋覆花根中總黃酮提取方法的加樣平均回收率為99.89%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.89%，表明測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，符合測定要求.

3 結(jié)論與討論

本試驗采用30%、50%、70%、80%乙醇和甲醇為顯脈旋覆花根中總黃銅的提取劑，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%和甲醇體積分?jǐn)?shù)50%時，浸提時間為24 h時的總黃酮得率最高分別為2.33%和1.84%，乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%時，乙醇浸提時間為36h時的總黃酮得率最低為1.13%.甲醇體積分?jǐn)?shù)均為30%時，浸提時間為12 h總黃酮得率最低為1.01%.乙醇的提取效果好于甲醇.

黃酮類化合物廣泛存在于植物各個部分，一般是以甙的形式存在，高體積分?jǐn)?shù)的乙醇適宜于提取黃酮甙元，60%左右體積分?jǐn)?shù)的乙醇適宜于提取黃酮甙類[14-16].而本試驗在甲醇50%和乙醇70%時顯脈旋覆花根的總黃酮得率最高,說明顯脈旋覆花根中黃酮類物質(zhì)可能與黃酮甙類物質(zhì)有關(guān).

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(責(zé)任編輯 莊紅林)

Study on the extraction method of the total flavonoids in the roots ofInulanervosa

ZHANG Hong1,LI Shu-wei1,LI Chun-yan,YUAN Han,BAI Hong-li2,GUO Jun-ming2

(1. Key Laboratory of Crops with High-quality and Efficient Cultivation and Security Control of Yunnan Higher Education Institutions, Honghe University,Mengzi 661100,China; 2. Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resources,State Ethnic Affairs Commission and Ministry of Education of China,Yunnan Minzu University,Kunming 650031,China)

In this test,the roots of Inula nervosa were used as the test materials,and their total flavonoids were extracted by alcohol- and methanol-based cold-maceration. The content of the extracted total flavonoids was determined with UV spectrophotometer. The results were the following: while alcohol was 70% and methanol 50%,and the extracting time was 24 h,the extraction of the total flavonoids had a good effect. The extraction rate of alcohol and methanol was 2.33% and 1.84% respectively. Alcohol had a better effect than methanol. The average recovery of this method was 99.89%,and the relative standard deviation(RSD) of the method was 0.89%. Its results are reliable.

roots ofInulanervosa; total flavonoids; extraction

郭俊明(1962-)，男，碩士,教授,碩士生導(dǎo)師.主要研究方向:無機(jī)非金屬及生物化學(xué).

2014-12-02.

民族藥資源化學(xué)國家民委-教育部重點實驗室開放基金(MZY1405).

張虹(1962-)，女，教授.主要研究方向:生物技術(shù).

R284.2

A

1672-8513(2015)02-0112-03