李 巖王 彤趙俊華

(1.吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所,白城 137000: 2. 吉林省白城市實(shí)驗(yàn)高級(jí)中學(xué),白城 137000)

HPLC測(cè)定五味子丸中五味子醇甲的含量

李 巖1王 彤2趙俊華1

(1.吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所,白城 137000: 2. 吉林省白城市實(shí)驗(yàn)高級(jí)中學(xué),白城 137000)

目的建立五味子丸中五味子醇甲的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法 譜柱Agilent C18,流動(dòng)相:甲醇:水(65:35);檢測(cè)波長(zhǎng):250nm。柱溫:30℃,流速:1.0ml/min結(jié)果五味子醇甲在0.1076—1.614μg范圍內(nèi),線性良好(r=0.9998)?！?】平均加樣回收率為99.6%,RSD%＝0.2%。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確,重復(fù)性好,可用來(lái)控制五味子丸的質(zhì)量。

五味子醇甲;五味子丸;高效液相色譜法。

五味子丸由五味子、肉蓯蓉(酒制)、茯苓、菟絲子(酒炒)、車前子(鹽制)、巴戟天(制)中藥組成,滋補(bǔ)陰氣,填精益髓。用于腎氣不足,腰膝疼痛,記憶衰退,頭暈耳鳴,四肢無(wú)力。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【3】中不含含量測(cè)定項(xiàng)五味子醇甲,為了控制五味子丸的質(zhì)量,研究設(shè)立了高效液相色譜法(Hplc)測(cè)定五味子丸中五味子的有效成分五味子醇甲的含量,此方法操作很簡(jiǎn)單,數(shù)據(jù)比較穩(wěn)定,結(jié)果很準(zhǔn)確

1 材料與儀器

1.1 材料 五味子丸批號(hào):20141012、20141013、20141014;五味子丸陰性對(duì)照藥材(亳州光大藥業(yè)股份有限公司);對(duì)照品:五味子醇甲(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)11548-20140203共含量測(cè)定用);含量測(cè)定所用的甲醇為青島試劑廠生產(chǎn)的色譜純,其它試劑均為分析純。

1.2 使用的儀器 Agilent高效液相色譜儀;工作站為Sepμ 3000色譜:島津uv-2600紫外可見分光光度計(jì)

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:AgilentC18色譜柱(4.6×250mm,5μm);柱溫30℃。流速:1.0ml/min、流動(dòng)相:甲醇:水(55:45);檢測(cè)波長(zhǎng):250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不得低于3500?！?】【7】

2.2 對(duì)照品溶液的配置:精密稱取對(duì)照品五味子醇甲適量加甲醇使溶解,制成每1ml含50μg 的五味子醇甲對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的配置:取重量差異項(xiàng)下的本品5g,精密稱定加甲醇50ml加熱回流1小時(shí),加甲醇補(bǔ)足減失總量。濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?0ml使溶解,置25ml棕色容量瓶中,再加甲醇稀釋至刻度,作為供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)及檢測(cè)波長(zhǎng)的確定:按照五味子丸的處方制備方法配置缺少五味子藥材的模擬樣品。按照處理供試品溶液的方法制成五味子陰性對(duì)照溶液。將五味子陰性對(duì)照溶液、五味子供試品溶液及五味子醇甲對(duì)照品溶液分別注入液相色譜儀器中再進(jìn)行檢測(cè)。島津uv-2600紫外可見分光光度計(jì)對(duì)五味子醇甲進(jìn)行掃描,經(jīng)掃描五味子醇甲在紫外光譜區(qū)250nm處有最大吸收,因此選定250nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。五味子丸供試品中五味子醇甲的光譜吸收?qǐng)D標(biāo)顯示,供試品的最大吸收波長(zhǎng)與對(duì)照品完全一致,而五味子陰性對(duì)照定光譜吸收在與五味子醇甲峰相同的保留時(shí)間處沒有吸收峰。因此說明配方中的其它藥品五味子醇甲的檢測(cè)無(wú)擾,見圖 1 。

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取50μg/ml的五味子醇甲對(duì)照品溶液2.0,5.0,10.0,15.0,20.0,30.0μl,注入高效液相色譜儀(Hplc)中,按照上述條件測(cè)定吸收峰面積,縱坐標(biāo)設(shè)為峰面積積分值,橫坐標(biāo)設(shè)為對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg),繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到五味子醇甲回歸方程Y=3.6571×106X+6782r=0.9998,可見,五味子醇甲在0.1076—1.614μg 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

圖1 HPLC色譜圖

表1 五味子丸中五味子醇甲的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.6 藥物穩(wěn)定性的試驗(yàn) 精密吸取同一份供試液,依次在0,3,6,12,24小時(shí)進(jìn)行測(cè)定,共考察24小時(shí)。五味子醇甲峰面積平均的RSD為0.85%,說明五味子醇甲至少在24小時(shí)內(nèi)比較穩(wěn)定,能滿足測(cè)試要求。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液10μl,連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣9次,測(cè)定吸收峰面積,結(jié)果供試品中五味子醇甲的評(píng)均含量0.062mg/g,RSD為1.0%(n=9)。表明精密度良好

2.8 系統(tǒng)重復(fù)性試驗(yàn) 取對(duì)同一批量的樣品按以上敘述含量測(cè)定方法連續(xù)進(jìn)行9次平行試驗(yàn)測(cè)定,計(jì)算其含量,結(jié)果供試品中五味子醇甲的平均含量為0.062mg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為為1.0%(n=9)。

2.9 方法回收率試驗(yàn) 精密稱取已知明確含量的供試品5份,每份為5g,分別精密注入五味子醇甲對(duì)照液(50μg/ml).2ml,按上述試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算其回收率,結(jié)果見表1。

2.10 樣品測(cè)定結(jié)果 按照前述方法配置供試品溶液與對(duì)照品溶液,分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10μl,注入高效液相色譜儀,測(cè)定計(jì)算其含量,樣品測(cè)定的結(jié)果見表2。

表2 五味子丸中五味子醇甲的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 《中西新藥轉(zhuǎn)正》15冊(cè)【4】,衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》[S]第一冊(cè)【2】,五味子丸均沒有對(duì)五味子醇甲的含量進(jìn)行測(cè)定。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局,《中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分》內(nèi)科[S]2005:9-13【1】對(duì)五味子醇甲進(jìn)行了薄層色譜鑒別,但無(wú)含量測(cè)定?！吨形餍滤庌D(zhuǎn)正》15冊(cè)五味子丸【4】,中有關(guān)五味子醇甲的含量測(cè)定方法是薄層掃描法,但是薄層掃描法,靈敏度沒有高效液相法準(zhǔn)確,靈敏。因此我們決定采用高效液相色譜法來(lái)測(cè)定五味子丸的五味子醇甲的含量。

3.2在供試品溶液的制備過程中, 為了保證樣品中五味子醇甲的充分提取, 本實(shí)驗(yàn)考察了相關(guān)文獻(xiàn)【5-19】報(bào)道方法后, 采用加入 70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超聲提取,70%乙醇、90%甲醇、 100%甲醇回流提取并對(duì)不同提取時(shí)間進(jìn)行了試驗(yàn),結(jié)果表明,70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超聲提取,提出雜質(zhì)比較多; 70%乙醇、 90%甲醇,不能完全提取充分,100%甲醇回流1小時(shí), 提取效果佳, 故選定此方法。

3.3樣品檢測(cè)中, 曾以不同比例的甲醇-0.1%醋酸,乙腈-水,甲醇- 水-冰醋酸為流動(dòng)相等度和梯度洗脫, 結(jié)果表明,以甲醇-0.1%醋酸,乙腈-水,甲醇- 水-冰醋酸洗脫時(shí)分離效果均不好,而《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版五味子項(xiàng)下測(cè)定五味子醇甲以甲醇-水(65:35)為流動(dòng)相,測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)樣品分離度差,經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn),選定甲醇-水(55:45)作為流動(dòng)性進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果顯示供試品溶液峰形較好,五味子醇甲能夠達(dá)到基線分離,理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不得低于3500。故最終采用此流動(dòng)相。【2.5.6.7.8.11】

3.4 本實(shí)驗(yàn)是對(duì)五味子丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步提高,原標(biāo)準(zhǔn)無(wú)含量測(cè)定,現(xiàn)選擇增加五味子醇甲的含量測(cè)定,可以在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)五味子藥材的來(lái)源質(zhì)量進(jìn)行控制,從而達(dá)到對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行更好的監(jiān)控。

[1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局,《中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分》內(nèi)科[S]2005:9-13

[2] 《中國(guó)藥典》一部[S]2010:61

[3] 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》[S]第一冊(cè),1998;35

[4] 《中西新藥轉(zhuǎn)正》第15冊(cè)五味子丸[S];109

[5] 趙寨紅．RP-HPLC測(cè)定小青龍顆粒中五味子醇甲的含量［J］黑龍江醫(yī)藥, 2013 (6):971.

[6] 徐道情 HPLC測(cè)定通脈養(yǎng)心丸中五味子醇甲的含量［J］天津藥學(xué), 2012 .24(4):6.

[7] 韓寧寧．RP-HPLC測(cè)定益氣固本糖漿中五味子醇甲的含量［J］湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2013.6.15.3(36)

[8] 潘建鋒;莊波陽(yáng) HPLC法測(cè)定太太靜心助眠口服液中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量［J］福建醫(yī)藥雜志, 2013.02

[9] 楊錫 倪琳 HPLC法同時(shí)測(cè)定生脈飲中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素［J］中成藥, 2012 (5):120.

[10] 周竹琇 不同產(chǎn)地生五味子飲片中五味子醇甲含量比較 ［J］《亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥》, 2014 (23)

[11] 王芳 半仿生提取-高效液相色譜法測(cè)定芪白平肺膠囊中五味子醇甲的含量［J］海峽藥學(xué), 2013 (25)-8.85.

[12] 趙艷 HPLC法測(cè)定三子降酶膠囊中五味子醇甲的含量［J］中國(guó)藥物警戒,2014 06.

[13] 趙鷹 HPLC同時(shí)測(cè)定五子顆粒中補(bǔ)骨脂素和五味子醇甲含量［J］天津藥學(xué),2014、 03.

[14] 羅艷 HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定復(fù)方益肝靈膠囊中水飛薊賓和五味子醇甲的含量［J］中國(guó)藥師,2013、 12.

[15] 單鑫 HPLC同時(shí)測(cè)定復(fù)方五味含片中葛根素、甘草苷、甘草酸銨、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素［J］南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014、01.18.

[16] 周山 HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方五仁醇軟膠囊中綠原酸、芍藥苷、五味子醇甲、五味子乙素［J］南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014、 01.20.

[17] 張秀麗RP-HPLC法測(cè)定腦靈素膠囊中五味子醇甲的含量［J］中國(guó)醫(yī)藥指南,2014、 11.20.

[18] 陳麗萍 五味通心膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］生物技術(shù)世界,2014、 05.15.

[19] 潘國(guó)良 市售生脈飲中五味子醇甲含量的比較分析［J］中國(guó)處方藥,2014.1.30.

HPLC determination of the content of fructus schisandrae alcohol armour in fructus schisandrae pill

Li Yan1, Wang Tong2, Zao Junhua1
(1.The baicheng city of jilin province food and drug inspection. Baicheng city of jilin province, baicheng 137000;2. The baicheng of jilin province experimental high school, baicheng 137000)

Objective to establish determination method of the content of fructus schisandrae alcohol armour in fructus schisandrae pill.Methodsusing HPLC spectrum of Agilent using C18 column, mobile phase: methanol: water (65:35). : detection wavelength 250 nm. Column temperature: 30 ℃, velocity: 1.0 ml/min .Resultsfructus schisandrae alcohol armour, within the scope of 0.1076-1.614 mu g, good linear (r = 0.9998).【1】the average sample recovery rate was 99.6%, RSD % = 0.2%.Conclusionthis method is simple and accurate, and reproducible, can be used to control the quality of the fruit of Chinese magnoliavine pill.

fructus schisandrae alcohol armour; Fructus schisandrae pill; High performance liquid chromatography.

R19[文獻(xiàn)表示碼]A

1672-5654(2015)2(C)-0000-00

李巖(1981,11—),男,民族：漢族 籍貫：吉林白城,學(xué)歷：大學(xué)本科 職稱：主管藥師 從事10多年的藥品檢驗(yàn)工作，現(xiàn)主要從事藥品檢驗(yàn)及綜合性規(guī)范的制定工作。

期刊郵寄地址：吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所 白城市海明西路50號(hào)，郵編：137000收件人：李巖，電話：1384609650