安鳳娟，何宇新

(西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川 成都 610039)

·基礎(chǔ)學(xué)科·

正交試驗(yàn)優(yōu)選金釵石斛含片提取工藝

安鳳娟，何宇新*

(西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川 成都 610039)

為找到金釵石斛含片的最佳提取，采用正交試驗(yàn)方法，以總多糖含量、總皂苷含量和干浸膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：金釵石斛含片的最佳提取條件為提取溶媒體積為金釵石斛質(zhì)量的8倍，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.5 h。在最佳提取條件下，總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為78.85 mg/g，總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.87 mg/g，干浸膏得率為18.43%。

總多糖；總皂苷；正交試驗(yàn)；金釵石斛含片

金釵石斛含片是由金釵石斛、人參等藥材經(jīng)提取加工而制成的含片，具有免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老作用，適用于亞健康以及患糖尿病、腫瘤、心血管、胃肝病等免疫功能低下者。金釵石斛具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗白內(nèi)障等作用[1-5]。我國(guó)的金釵石斛及其他石斛，在東南亞，美國(guó)、韓國(guó)、日本等也有廣闊的市場(chǎng)[6]。目前很多產(chǎn)品開(kāi)發(fā)處于低水平重復(fù)建設(shè)階段，新產(chǎn)品及深加工產(chǎn)品缺乏，且市場(chǎng)上魚(yú)龍混雜[7]；因此按照中醫(yī)藥理論和石斛的特點(diǎn)來(lái)科學(xué)研發(fā)出具有較高科技含量的石斛保健品，具有巨大的市場(chǎng)空間[8]。生產(chǎn)工藝是中藥保健品生產(chǎn)過(guò)程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，而穩(wěn)定的工藝是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性、安全獨(dú)立性、功能學(xué)等的可靠保證。本研究以總多糖含量、總皂苷含量及干浸膏得率為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)金釵石斛含片的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

金釵石斛、人參、靈芝(四川省中藥飲片廠)；人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所)；葡萄糖、濃硫酸、苯酚、乙醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸等化學(xué)試劑均為分析純。

D101大孔樹(shù)脂，10 mL注射器，752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。

1.2總多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

采用苯酚-硫酸顯色法[9]測(cè)定總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。通過(guò)測(cè)定488 nm波長(zhǎng)下不同濃度葡萄糖溶液的吸光度繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.009 4x-0.021 4，R2=0.998 6，線性范圍：12～84 μg。取樣品溶液適量，用水適當(dāng)稀釋?zhuān)捎帽椒?硫酸顯示法處理得到供試品溶液，測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.3總皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定方法

采用保健品中總皂苷測(cè)定法[10-11]測(cè)定總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)。通過(guò)測(cè)定560 nm波長(zhǎng)下不同濃度人參皂苷Re溶液的吸光度繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.004 2x-0.093 2，R2=0.998 0，線性范圍：40～200 μg。取樣品溶液適量，用水適當(dāng)稀釋?zhuān)捎帽＝∑分锌傇碥諟y(cè)定法處理得到供試品溶液，測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.4精密度考察

分別精密量取同一對(duì)照品溶液6份，隨行做空白，依法測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD值，總多糖RSD為2.49%，總皂苷RSD為2.91%，說(shuō)明精密度良好。

1.5浸膏得率的測(cè)定

分別吸取定容后樣品液20 mL，置已干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速稱(chēng)質(zhì)量，計(jì)算干浸膏得率，以藥材干質(zhì)量計(jì)。

1.6工藝條件及參數(shù)的優(yōu)選

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，提取溶媒用量(A)、提取次數(shù)(B)、提取時(shí)間(C)是影響煎煮效果的主要因素，因此對(duì)此三因素進(jìn)行考察，按L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以總多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mg/g)、總皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mg/g)、浸膏得率(%)作為考察指標(biāo)，對(duì)提取工藝進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。因素水平表見(jiàn)表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2 結(jié)果

由表2、表3可知：提取次數(shù)對(duì)總多糖含量有顯著的影響(P<0.05)，提取溶媒用量和提取時(shí)間對(duì)總多糖含量的影響不顯著；各因素對(duì)總皂苷含量的影響不顯著(P<0.05)，但提取次數(shù)對(duì)總皂苷含量影響最大；提取次數(shù)對(duì)干浸膏得率的影響是極顯著的(P<0.01)，提取溶媒用量對(duì)干浸膏得率有顯著的影響(P<0.05)，而因素C(提取時(shí)間)對(duì)干浸膏得率的影響是不顯著的。所以在確定最佳工藝時(shí)應(yīng)主要考慮提取次數(shù)和提取溶媒用量。各個(gè)因素對(duì)提取過(guò)程的影響依次為B>A>C。由表3可知提取次數(shù)對(duì)金釵石斛含片的提取工藝有顯著影響。由表2正交試驗(yàn)直觀分析結(jié)果可知，金釵石斛含片的最佳提取工藝是A2B3C2，即最佳提取溶媒用量應(yīng)該為金釵石斛質(zhì)量的8倍，最佳提取次數(shù)為3次，最佳提取時(shí)間是1.5 h。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析

注：F0.05(2,2)=19.00；F0.01(2,2)=99.00；“*”表示顯著；“**”表示極顯著

3 結(jié)論

為了驗(yàn)證最佳工藝的準(zhǔn)確性，保證生產(chǎn)工藝的合理性和穩(wěn)定性，按照上述工藝進(jìn)行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，3次驗(yàn)證的結(jié)果基本一致，總多糖平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為78.85 mg·g-1，總皂苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.87 mg·g-1以上，干浸膏平均得率為18.43%。說(shuō)明此工藝條件合理可行，穩(wěn)定可靠，具有可操作性和重現(xiàn)性。

[1]鄭曉珂,曹新偉,馮衛(wèi)生,等.金釵石斛的研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志,2005,14(7): 826-829.

[2]朱華,黃學(xué)萃,楊海廣,等.石斛屬多糖的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)導(dǎo)報(bào),2007,26(12): 1476-1478.

[3]李小瓊,葛曉軍,鄭斯卓,等.金釵石斛多糖的提取及部分理化性質(zhì)分析[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2008,18(5):446-447.

[4]蔣玉蘭,羅建平.藥用石斛多糖藥理活性及化學(xué)結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2011, 22 (12):2986-2988.

[5]陳超琴,蔣麗華,趙黎明,等.石斛多糖的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2012,33(2): 441-444.

[6]王琳,葉慶生, 劉偉.金釵石斛研究概況[J].亞熱帶植物科學(xué),2004,33(2):73-76.

[7]劉煥蘭,尚子乂,曲衛(wèi)玲.鐵皮石斛保健產(chǎn)品的研究開(kāi)發(fā)價(jià)值[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥, 2010,19(18):29.

[8]張明.論鐵皮石斛保健品的開(kāi)發(fā)[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2011,13(11):57-59,62.

[9]陳麗瓊,傅蔚蘭.金釵石斛總多糖提取工藝研究[J].中藥研究,2007,5(4):24-25.

[10]黃雨三.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)[M]. 北京:清華同方電子出版社,2003: 140-1142.

[11]代純，何宇新，周書(shū)來(lái)，等.無(wú)患子藥材及總皂苷HPLC指紋圖譜[J].西華大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2014，33(3)：103-107.

(編校：葉超)

OptimizationoftheExtractingTechnologyforJinchaiShihuBuccalTabletBasedonOrthogonalTest

AN Feng-juan1, HE Yu-xin*

(SchoolofFoodandBioengineering,XihuaUniversity,Chengdu610039China)

Taken the content of total polysaccharides and sapoins and the yield of dry extract as indicators, the extracting technology for Jinchai Shihu Buccal Tablet was studied based on orthogonal test. The optimal extraction conditions are as follows: 8 times of the extraction solvent, extracting one half hour and three times. Under optimum conditions, the content of total polysaccharides is 78.85mg/g, the content of total saponins is 4.87mg/g, dry extract yield is 18.43%.

total polysaccharides; total sapoins; orthogonal test; Jinchai Shihu buccal

2014-03-21

：何宇新(1976—)，男，教授，博士，主要研究方向?yàn)橹兴幮轮苿?。E-mail:524225843@qq.com

R284.2

：A

：1673-159X(2015)03-0101-03

10.3969/j.issn.1673-159X.2015.03.021

*