屈方政

膠體金法聯(lián)合酶聯(lián)免疫吸附測定檢測血清乙肝表面抗原

屈方政

目的 分析膠體金法（GIA）與酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）聯(lián)合用于血清乙肝表面抗原（HBsAg）檢測中的價(jià)值。方法 選取血清標(biāo)本12576份，均行膠體金法和酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 膠體金法檢測HBsAg陽性率為2.03%（255/12576），ELISA法檢測HBsAg陽性率為2.09%(263/12576)。2例血標(biāo)本膠體金法檢測為陽性，ELISA法檢測為陰性；10例血標(biāo)本膠體金法檢測為陰性，ELISA檢測為陽性。12例標(biāo)本中11例經(jīng)中和確認(rèn)或HBV-DNA檢測后確定為陽性。結(jié)論 膠體金法與酶聯(lián)免疫法檢測血清HBsAg均有較高的特異性，二者聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步提高陽性率。

膠體金法；酶聯(lián)免疫吸附測定；血清乙肝表面抗原

目前血清乙肝表面抗原（HBsAg）檢測方法有較多種，其中酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）最為常用，膠體金法（GIA）作為一種快速應(yīng)急的檢測方法也逐漸受到重視，但受檢測方法的限制，易出現(xiàn)假陰性和假陽性現(xiàn)象[1]。本研究主要探討膠體金法與ELISA兩種方法在血清HBsAg檢測中的聯(lián)合應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 本研究標(biāo)本來源于2013年1月～2013年12月在廣西桂林陽朔縣葡萄鎮(zhèn)衛(wèi)生院行健康體檢者的血液標(biāo)本，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)抗凝處理后待檢，血清標(biāo)本質(zhì)量均良好、無溶血、脂血或長菌現(xiàn)象，共收集12576份血標(biāo)本。

1.2 方法

1.2.1 試劑 HBsAg膠體金法試劑購自杭州艾康生物技術(shù)公司，HBsAg酶聯(lián)免疫法試劑購自藍(lán)十字生物藥物（北京）生物有限公司，質(zhì)控血清由衛(wèi)生部臨檢中心提供。

1.2.2 儀器 使用進(jìn)口YT-WASH 1自動(dòng)洗板機(jī)，TECAN-EVLYZER全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀，國產(chǎn)恒溫水浴箱。所有儀器性能均穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行校準(zhǔn)。

1.2.3 檢測方法 嚴(yán)格按照說明書操作要求，先采用膠體金法對(duì)12576份血清標(biāo)本進(jìn)行檢測，再使用ELISA復(fù)檢。（1）膠體金法：以微量移液器吸取80μL血清滴入各個(gè)監(jiān)測孔中，室溫下放置15～30min，觀察顯示結(jié)果，以檢測線和質(zhì)控線各出現(xiàn)紅線為陽性，僅質(zhì)控線出現(xiàn)紅線為陰性，僅檢測線出現(xiàn)紅線為檢測結(jié)果無效；（2）酶聯(lián)免疫法：在相應(yīng)孔中分別加入陰性和陽性對(duì)照血清、質(zhì)控品和待檢標(biāo)本，在各個(gè)孔中加入酶標(biāo)抗體，混勻后在37℃下孵育60min，洗板、加底物，37℃下避光反應(yīng)15min，在實(shí)驗(yàn)管理軟件中按照說明書編寫程序，自動(dòng)判讀結(jié)果以S/CO值＞1.0為陽性。對(duì)于膠體金法判讀為陽性的標(biāo)本，以ELISA復(fù)檢，若ELISA檢測S/CO值＞1.0，則則報(bào)告為陽性結(jié)果；若ELISA為陰性，則選兩種不同廠家ELISA試劑做雙孔復(fù)檢，兩種試劑重復(fù)陽性則報(bào)告為陽性，反之做HBV-DAN或中和確認(rèn)確定結(jié)果；ELISA檢測S/CO值介于0.5～1.0的標(biāo)本，使用兩種ELISA試劑做雙孔復(fù)檢，兩種試劑重復(fù)陽性則報(bào)告為陽性，反之做HBV-DAN或中和確認(rèn)確定結(jié)果；膠體金法為陰性和ELISA檢測S/CO值＜0.5的標(biāo)本，直接報(bào)告為陰性。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察比較兩種方法檢測HBsAg陽性率；對(duì)兩種方法陽性結(jié)果不同的標(biāo)本乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎E抗原（HBeAg）、乙型肝炎E抗體（HBeAb）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）和乙型肝炎病毒基因（HBV-DNA）檢測結(jié)果進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

12576份血清標(biāo)本中，GIA法檢測HBsAg陽性率為2.03%（255/12576），ELISA法檢測HBsAg陽性率為2.09%(263/12576)。2例血標(biāo)本GIA檢測為陽性，ELISA法檢測為陰性，10例血標(biāo)本GIA法檢測為陰性，ELISA檢測為陽性。見表1。此12例標(biāo)本HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb和HBVDNA檢測結(jié)果見表2。

表1 GIA法和ELISA法檢測血清HBsAg陽性結(jié)果（n）

表2 12例GIA法和ELISA法陽性結(jié)果不同的標(biāo)本檢測結(jié)果

3 討論

乙型肝炎目前已成為威脅人類健康的世界性疾病，也是我國當(dāng)前流行最廣泛、危害性最嚴(yán)重的一種疾病，HBsAg是已感染乙型肝炎病毒的標(biāo)志，其檢測結(jié)果是診斷乙型肝炎感染的重要依據(jù)[2-3]。ELISA是目前檢測HBsAg最為常用的方法之一[4]，在HBsAg檢測中的特異性、敏感性均較高，但操作過程較為繁瑣，操作過程中影響檢測結(jié)果的因素多，不適用于單份樣本檢測檢測中，同時(shí)對(duì)檢測設(shè)備及檢測人員操作技術(shù)有較高的要求[5]。 GIA法上世紀(jì)80年代末發(fā)展起來的一種免疫標(biāo)記技術(shù)，可用于HBsAg、HCG及抗雙鏈DNA抗體等的快速檢測中[6]，無沖洗過程，操作簡單，且可用于單份標(biāo)本檢測中，具有快速、簡便、無污染等多個(gè)優(yōu)點(diǎn)，但其靈敏度稍差，本研究中GIA法的陽性率即稍低于ELISA法，與同類研究報(bào)道結(jié)果一致[7-8]。由于兩種方法各具優(yōu)缺點(diǎn)，本院在檢測血清HBsAg時(shí)將兩種方法聯(lián)合使用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2例GIA法為陽性而ELISA法為陰性和10例GIA法為陰性而ELISA法為陽性的標(biāo)本，經(jīng)中和確認(rèn)或HBV-DNA檢測后11例判定為陽性，表明二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于降低假陰性和假陽性有著重要作用。

綜上所述，血清HBsAg檢測中，ELISA法和GIA法各有優(yōu)缺點(diǎn)，臨床中聯(lián)合應(yīng)用兩種方法，以GIA法為參考，以ELISA法作為最終檢測結(jié)果，發(fā)揮二者的協(xié)同作用，可進(jìn)一步提高血清HBsAg檢測準(zhǔn)確性，對(duì)于降低檢驗(yàn)結(jié)果誤差有著重要意義。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2015.4.109

廣西 541903 廣西桂林陽朔縣葡萄鎮(zhèn)衛(wèi)生院（屈方政）