高笫筱 孫 俊 章楚光 周平玉，* . 安徽醫(yī)科大學(xué)上海市皮膚病臨床學(xué)院（上海 00050）； . 上海市皮膚病醫(yī)院

人乳頭狀瘤病毒與陰莖癌及其癌前病變關(guān)系的初步研究

高笫筱1孫 俊2章楚光2周平玉1，2*1. 安徽醫(yī)科大學(xué)上海市皮膚病臨床學(xué)院（上海 200050）； 2. 上海市皮膚病醫(yī)院

目的 初步探索人乳頭狀瘤病毒（HPV）與陰莖癌及其癌前病變的關(guān)系。方法 收集2011年1月至2015 年 5月上海市皮膚病醫(yī)院病理確診為陰莖癌、癌前病變、鮑溫樣丘疹病及尖銳濕疣患者89例，采用流式熒光Luminex技術(shù)的HPV-DNA分型檢測方法檢測皮損部位的HPV-DNA含量及基因型。結(jié)果 12例陰莖癌中HPV陽性有3例，高危型2例；10例增殖性紅斑中HPV陽性4例，高危型3例；11例鮑溫病中HPV陽性8例，高危型7例；26例鮑溫樣丘疹病中HPV陽性13例，高危型8例；30例尖銳濕疣患者HPV陽性23例，高危型11例。原位癌、癌前病變HPV陽性檢出率明顯高于陰莖癌（57.14%vs25.00%）。癌前病變、原位癌高危型HPV陽性檢出率高于尖銳濕疣和鮑溫樣丘疹?。?3.33% vs 47.83%， 83.33%vs61.54%），陰莖癌高危型HPV陽性檢出率也高于尖銳濕疣和鮑溫樣丘疹?。?6.67% vs 47.83%， 66.67% vs 61.54%）。結(jié)論 高危型HPV感染在生殖器癌的演變進(jìn)程中可能發(fā)揮著重要作用。

陰莖腫瘤； 人乳頭瘤病毒； 癌前狀態(tài)； 尖銳濕疣

陰莖癌是陰莖最常見的惡性腫瘤，大約占陰莖腫瘤的90～97%［1］。據(jù)美國最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，陰莖癌的發(fā)病率占男性惡性腫瘤的0.79%［2］，但其他發(fā)展中國家陰莖癌的發(fā)病率可達(dá)男性惡性腫瘤的10%［3］。已證實(shí)人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus， HPV）高危型與宮頸癌及癌前病變的發(fā)生密切相關(guān)，然而與男性生殖器腫瘤發(fā)病是否相關(guān)，目前研究尚不多見。研究也顯示HPV與陰莖癌的發(fā)病相關(guān)［3-5］。鑒于HPV在男性人群中的感染率從3.6% 到84%不等［6］，而性病門診中HPV感染多見，本研究就HPV與陰莖癌及其癌前病變的關(guān)系作初步探討。

材料與方法

一、研究對象

收集2011年1月至2015 年 5月上海市皮膚病醫(yī)院生殖器癌癥、癌前病變/原位癌、鮑溫樣丘疹病及尖銳濕疣男性患者89例，采用流式熒光Luminex技術(shù)HPV-DNA分型檢測方法半定量檢測生殖器標(biāo)本HPVDNA 的含量，所有入組樣本均進(jìn)行活組織病理檢查，具體入組流程見圖1。

圖1 病例入選流程圖

二、檢測方法

（一）石蠟樣本DNA抽提

根據(jù)天根生物科技公司研發(fā)的石蠟包埋組織基因組快速提取試劑盒說明書操作。取石蠟切片5到8張，將組織切片中釋放的DNA利用特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱進(jìn)行DNA提取，懸空滴加超純水30μl，洗脫離心后的產(chǎn)物用于后續(xù)PCR擴(kuò)增。

（二）HPV分型檢測

根據(jù)上海透景生物科技公司研發(fā)的HPV流式熒光法檢測試劑盒說明書操作，探針可同時(shí)檢測27種人乳頭瘤病毒（HPV）亞型（HPV6，11，16，18，26，31，33，35，39，40，42，43，44，45，51，52，53，55，56，58，59，61，66，68，81，82，83，Globin）。按照設(shè)定的PCR程序擴(kuò)增待檢測樣品，將PCR產(chǎn)物與Biotin標(biāo)記的探針微球48℃孵育35min，然后加入StrepAvidin-PE熒光標(biāo)記物48℃孵育15min，最后在流式熒光檢測儀上檢測熒光信號，所得到的數(shù)據(jù)經(jīng)軟件分析后可以直接判斷結(jié)果。

三、結(jié)果判斷

HPV 陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)定為：任何HPV型別特異性探針的信號≥150，即可判斷為陽性；陽性內(nèi)對照Globin的信號≥150，即代表整個(gè)實(shí)驗(yàn)成功（說明書上標(biāo)準(zhǔn)）。HPV-DNA 含量為檢測樣本的相對光單位（relative light unit，RLU）/標(biāo)準(zhǔn)陽性對照的RLU≥150，相當(dāng)于標(biāo)本中檢出的HPV負(fù)荷量≥150pg/mL，即診斷為HPV 陽性。所有生殖器病變的診斷均以活檢和組織病理學(xué)檢查結(jié)果作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間差異采用卡方檢驗(yàn)和Fisher's精確檢驗(yàn)。P值小于0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

本研究病理確診的陰莖癌有12例，平均年齡59.75歲（39～78）歲，發(fā)病數(shù)最高的年齡段為56～65歲（41.67%），其中陰莖頭部皮損最多（50%），4例有炎癥反應(yīng)（33.33）%，12例均呈侵襲生長。原位癌或癌前病變21例（包括增殖性紅斑10例，鮑溫病11例，其中增殖性紅斑按組織病理結(jié)果分為癌前病變或原位癌，若病理中只有少量細(xì)胞間變，則認(rèn)為是癌前期病變；若組織病理中出現(xiàn)了細(xì)胞大小不一、有核分裂相、細(xì)胞排列紊亂、染色不一等，但沒有突破皮膚基底膜，則認(rèn)為是原位癌），平均年齡為55.81歲（28～78）歲，發(fā)病數(shù)最高的年齡段亦是56歲至65歲（30.43%），但陰莖部皮損最多（30.43%），16例有炎癥反應(yīng)（76.19%），5例呈侵襲生長（23.81%）。鮑溫樣丘疹病26例（29.21%），平均年齡41.42歲，28～45歲發(fā)病人數(shù)最多。尖銳濕疣30例（33.71%），平均年齡54.50歲，46～65歲發(fā)病數(shù)最多，見表1。

表1 89例患者的年齡、臨床及病理特征_

89 例患者中51例擴(kuò)增出了HPV-DNA，其余38例中，36例不能擴(kuò)增出 HPV-DNA（病理確診7例為尖銳濕疣，3例鮑溫病，7例陰莖癌，6例增殖性紅斑，13例鮑溫樣丘疹?。?，2例組織缺失。15例HPV 陽性樣本中癌前病變或原位癌12例（80%），陰莖癌3例（20%），見表2。10例增殖性紅斑HPV陽性4例，高危型3例；11例鮑溫病8例檢測出HPV，高危型7例。感染類型以 HPV16（46.67%）和6型（46.67%）為主，其中高危型HPV感染12例，以 HPV16型為主。鮑溫樣丘疹病和尖銳濕疣患者56例，其中HPV陽性36例，以HPV6型為主，見表2。

從表3中可以看出 HPV 感染與皮損部位、有無炎癥反應(yīng)以及侵襲性之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外，陰莖癌、原位癌及癌前病變檢出HPV的高危型與低危型之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

26例鮑溫樣丘疹病10例病理呈非典型改變（38.46%），6例HPV陽性，高危型3例。在10例隨訪病例中，有3例病理示疾病進(jìn)展。在這3例中，2例PCR擴(kuò)增出了高危型HPV-DNA，其中一例為HPV 35/42，另一例為HPV16。

討 論

本研究12例陰莖癌患者，平均發(fā)病年齡為59.75歲，好發(fā)于陰莖頭，但皮損好發(fā)部位、有無炎癥反應(yīng)與HPV感染狀態(tài)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。這一結(jié)果與de Sousa等［6］的研究結(jié)果一致。之前研究顯示，30%～50%的陰莖癌有HPV感染證據(jù)［7，8］，HPV的陽性檢出率20%～75%不等［5，6］。本研究盡管在25%的陰莖癌中檢出了HPV-DNA，檢出率在上述研究結(jié)果的范圍的低限，但這些研究結(jié)果差異是否由于樣本量不同，檢測技術(shù)不一樣，亦或地域差異以及衛(wèi)生條件等因素造成尚需進(jìn)一步的研究證實(shí)。

研究顯示，鮑溫病和增殖性紅斑損害中HPV感染率可達(dá)60～100%［3］，本研究中，鮑溫病和增殖性紅斑HPV陽性檢出率分別為72.73%（8/11），40%（4/10），高危型分別占87.5%，75.0%。這兩組高危型HPV分別與尖銳濕疣的高危型相比，即87.5%vs47.8%，差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這些結(jié)果提示：臨床上應(yīng)該加強(qiáng)對尖銳濕疣患者的關(guān)注，盡可能對這類患者進(jìn)行HPV型別檢測，對高危型HPV感染的患者建議隨訪，對持續(xù)感染者建議關(guān)注局部組織學(xué)改變，以及時(shí)發(fā)現(xiàn)癌前期病變。

表2 尖銳濕疣、癌前病變及陰莖癌中HPV的發(fā)病率、分布及PCR檢測型別情況

表3 31例陰莖癌、癌前病變患者的臨床及病理特征與HPV感染的相關(guān)性

表4 HPV高危、低危型與陰莖癌及癌前病變的關(guān)系

生殖器部位的癌前期病變或原位癌及時(shí)清除后預(yù)后良好，而發(fā)展成侵襲性陰莖癌則預(yù)后差。研究顯示，約30%的增殖性紅斑會(huì)發(fā)展成陰莖癌［9］。本研究一例增殖性紅斑1個(gè)月后發(fā)展成為鱗狀細(xì)胞癌，一例鮑溫病7個(gè)半月演變?yōu)轺[狀細(xì)胞癌，提示，臨床及時(shí)識(shí)別癌前期病變或原位癌的重要性。鮑溫樣丘疹病大多由HPV感染導(dǎo)致，目前認(rèn)為該病的臨床結(jié)局大多為良性，對其是否可能發(fā)展為鮑溫病或增殖性紅斑或陰莖癌的研究少見［3］。本研究中26例鮑溫樣丘疹病，HPV陽性檢出率為50%，高危型占61.54%。其中10例出現(xiàn)細(xì)胞或鱗狀上皮非典型改變，1例1年后轉(zhuǎn)化為鮑溫病，這一疾病的演變進(jìn)程提示高危型HPV感染在陰莖惡性腫瘤發(fā)病過程中可能發(fā)揮重要作用

本研究顯示，癌前病變、原位癌中HPV陽性檢出率及高危型HPV均高于陰莖癌（57.14%vs25%，83.33%vs66.67%）。這可能與HPV E6、E7基因有關(guān)。研究顯示， E6、E7基因可以完整地整合到宿主細(xì)胞DNA中，為早期癌蛋白的表達(dá)創(chuàng)造條件［10］，因此，HPV整合后能夠被檢測到的病毒顆粒減少。這可能可以用來解釋陰莖癌中HPV陽性檢出率低的原因。本研究中陰莖癌中高危型HPV占66.67%，高于Miralles-Guri等［4］的研究結(jié)果。這一差異進(jìn)一步提示在本地區(qū)開展特定人群HPV監(jiān)測的重要性，也為后續(xù)研究奠定了一定基礎(chǔ)。

研究證實(shí)：有部分陰莖癌與低危型HPV感染有關(guān)［11-13］。在陰莖癌皮損中可以檢到侵皮膚性HPV8，但其是否參與陰莖癌的發(fā)病以及如何發(fā)揮作用目前尚不清楚。既往研究指出感染率較高的HPV6/11在陰莖癌的發(fā)病過程中作用不大［4］，但本研究中1例陰莖癌，2例原位癌及癌前病變中可檢測出低危型HPV6及HPV6/11，這些病毒是致癌的因素還是共感染病毒目前尚無法證實(shí)。HPV低危型的致癌性有待進(jìn)一步研究。

1 吳階平主編. 陰莖腫瘤. 吳階平泌尿外科學(xué). 濟(jì)南： 山東科學(xué)技術(shù)出版社， 1013-1024

2 Siegel RL， Miller KD， Jemal A. Cancer statistics， 2015. CA Cancer J Clin 2015； 65（1）： 5-29

3 Bleeker MC， Heideman DA， Snijders PJ， et al. Penile cancer： epidemiology， pathogenesis and prevention. World J Urol 2009； 27（2）： 141-150

4 Miralles-Guri C， Bruni L， Cubilla AL， et al. Human papillomavirus prevalence and type distribution in penile carcinoma. J Clin Pathol 2009； 62（10） ： 870-878

5 翟建坡， 李鳴， 王其艷， 等. CD82、hTERT蛋白的表達(dá)及HPV感染與陰莖癌的關(guān)系研究. 中華男科學(xué)雜志2011； 17（9）： 817-822

6 de Sousa ID， Vidal FC， Branco Vidal JP， et al. Prevalence of human papillomavirus in penile malignant tumors：viral genotyping and clinical aspects. BMC Urol 2015； 15（1）： 13

7 Backes DM， Kurman RJ， Pimenta JM， et al. Systematic reviewofhuman papillomavirus prevalence ininvasive penile cancer. Cancer Causes Control 2009； 20（4）： 449-457

8 Cubilla AL， Lloveras B， Alejo M， et al. The basaloid cell is the best tissue marker for human papillomavirus in invasive penile squamous cell carcinoma： a study of 202 cases from Paraguay. Am J Surg Pathol 2010； 34（1）： 104-114

9 Wieland U， Jurk S， Weissenborn S， et al. Erythroplasia of queyrat： coinfection with cutaneous carcinogenic human papillomavirus type 8 and genital papillomaviruses in a carcinoma in situ. J Invest Dermatol 2000； 115（3）：396-401

10 Ruttkay-Nedecky B， Jimenez Jimenez AM， Nejdl L， et al. Relevance of infection with human papillomavirus： the role of the p53 tumor suppressor protein and E6/E7 zinc nger proteins （Review）. Int J Oncol 2013； 43（6）： 1754-1762

11 Dorfman S， Cavazza M， Cardozo J. Penile cancer associated with so-called low-risk human papilloma virus. Report of Wve cases from rural Venezuela. Trop Doct 2006； 36（4）： 232-233

12 Senba M， Kumatori A， Fujita S， et al. The prevalenceof human papillomavirus genotypes in penile cancers from Northern Thailand. J Med Virol 2006； 78（10）： 1341-1346

13 Pierce Campbell CM， Messina JL， Stoler MH， et al. Cutaneous human papillomavirus types detected on the surface of male external genital lesions： a case series within the HPV Infection in Men Study. J Clin Virol 2013； 58（4）：652-659

（2015-05-27收稿）

The prevalence of human papillomavirus in penile carcinoma and penile intraepithelial neoplasia： a preliminary study

Gao Zixiao1， Sun Jun2， Zhang Chuguang2， Zhou Pingyu1，2*
1 Shanghai Skin Disease Hospital， Clinical School of Anhui Medical University， Shanghai 200050 China；
2. Shanghai Skin Disease Hospital

Zhou Pingyu， E-mail： zpyls@yahoo.com

Objective To investigate the prevalence of human papillomavirus （HPV） in penile carcinoma and penile intraepithelial neoplasia. Methods From January 2011 to May 2015， skin samples were collected from 89 male patients histopathologically diagnosed with penile carcinoma， penile intraepithelial neoplasia， bowenoid papulosis or condyloma acuminatum in Shanghai Skin Disease Hospital. Luminex ow cytometry uorescence technology was used to detect HPVDNA and determine genotypes. Results The positive ratios of HPV-DNA were 3 out of 12 patients with penile carcinoma，4 out of 10 patients with erythroplasia， 8 out of 11 patients with Bowen's disease， 13 out of 26 patients with Bowenoid papulosis， and 23 out of 30 patients with condyloma acuminatum. High risk HPV infection was observed in 2 patients with penile carcinoma， 3 patients with erythroplasia， 7 patients with Bowen's disease， 8 patients with Bowenoid papulosis， and 11 patients with condyloma acuminatum. A higher rate of HPV infection was observed among patients with carcinoma in situ and precancerosis than penile carcinoma （57.14% vs. 25%）. Patients with carcinoma in situ， precancerosis and penile carcinoma were more likely to infect with high risk genotypes of HPV than those with condyloma acuminatum or Bowenoid papulosis （80% vs. 47.83%， 80% vs. 61.54%）. Conclusion High risk genotypes of HPV may play a critical role in the development of malignant lesions of male genitals.

penile neoplasms； human papillomavirus； precancerous conditions； condylomata acuminata

10.3969/j.issn.1008-0848.2015.07.007

R 737.27； R 752.53

*通訊作者： Email： zpyls@yahoo.com