劉素娟 邵艷秋 崔術(shù)新 盛琦

摘要：建立了靈敏、快速的高效液相色譜法測定化妝品及藥品中對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯這4種常見防腐劑含量的方法。采用Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為分離柱，以甲醇/水（80∶20，V/V）為流動(dòng)相，流速為1.5 mL/min，紫外檢測器檢測波長為254 nm，柱溫為30 ℃，在4 min內(nèi)可將4種防腐劑基線分離，方法快速準(zhǔn)確，可用于實(shí)際樣品測定，結(jié)果滿意。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；防腐劑；快速測定；化妝品；藥品

中圖分類號：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）11-2735-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.11.046

Rapid Determination of Four Preservatives in Cosmetic and Medicine Using HPLC

LIU Su-juan， SHAO Yan-qiu， CUI Shu-xin， SHENG Qi

（Department of Chemistry and Industry， Mudanjiang Normal University， Mudanjiang 157011， Heilongjiang， China）

Abstract： A high performance liquid chromatography method （HPLC） was developed for the determination of methyl p-hydroxybenzoate，ethyl p-hydroxybenzoate， propyl p-hydroxybenzoate and butyl p-hydroxybenzoate in cosmetic. A ultimate XB-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm） was used as separation column with methanol and water （80∶20，V/V） as mobile phase， and flow rate was 1.5 mL/min， the UV-detection wavelength was 254 nm， the column temperature was 30 ℃. Four preservatives were separated within 4 min. The method was fast and accurate，which was available for practical samples with satisfactory results.

Key words： HPLC； preservatives； rapid determination； cosmetic； medicine

化妝品在日常清潔、美容、護(hù)膚中起重要作用。在化妝品中添加一定量的防腐劑能有效防止化妝品腐敗變質(zhì)，延長化妝品保存時(shí)間和保持化妝品原有的功效[1]。而藥品對人們的健康更是有著至關(guān)重要的作用。近年來，對羥基苯甲酸酯類化合物被廣泛的用做化妝品及藥品的防腐劑，中國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》對這類防腐劑的使用量有嚴(yán)格規(guī)定[2]。因此化妝品及藥品中防腐劑含量測定是重要的質(zhì)量保證?；瘖y品及藥品中常用防腐劑的同時(shí)測定有采用凝膠電泳法、毛細(xì)管電泳法、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法的報(bào)道[3]。這些方法都有一定的局限性，不能滿足現(xiàn)行檢測的要求，在防腐劑檢測中受到一定限制。防腐劑大多是大分子有機(jī)物，并且有紫外吸收特性，適于用高效液相色譜分析。因此高效液相色譜法是當(dāng)前使用最廣泛的方法[4-6]。

本研究采用高效液相色譜建立了對化妝品中對羥基苯甲酸甲酯（Me-PHBA）、對羥基苯甲酸乙酯（Et-PHBA）、對羥基苯甲酸丙酯（Pr-PHBA）、對羥基苯甲酸丁酯（Bu-PHBA）4種常見防腐劑含量的測定方法。使用本方法檢測索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏兩種樣品，對實(shí)際樣品前處理進(jìn)行了改進(jìn)。結(jié)果表明，新方法簡便易行，縮短了分析時(shí)間，提高了靈敏度。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-15C型液相色譜儀（日本島津制作所），配備LC-15C型高壓泵、DGU-20A在線脫氣機(jī)、CTO-15C柱溫箱、SPD-15C型紫外-可見檢測器、LC Solution15C色譜工作站；KQ-100E型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；SBH-3型電動(dòng)離心機(jī)（山東菏澤南城益發(fā)儀器廠）；TB-214型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯標(biāo)準(zhǔn)品（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；甲醇（色譜純，J. T. Baker公司）；試驗(yàn)用水均為去離子水。

1.2 色譜條件

HPLC色譜柱為Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇/水（8∶2，V/V），流速為1.5 mL/min；檢測波長為254 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為6 μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯各0.100 0 g于100 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，搖勻，濃度均為1.000 mg/mL，作為混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 樣品前處理方法

選擇具有代表性的索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏兩種樣品進(jìn)行測定。分別準(zhǔn)確稱取0.500 0 g置于50 mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入無水乙醇50 mL，超聲30 min，4 000 r/min離心10 min后，取上清液進(jìn)行測定。以上所有樣品進(jìn)樣前均經(jīng)0.45 μm濾膜過濾。

2 結(jié)果與分析

2.1 進(jìn)樣量的確定

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)樣量條件的優(yōu)化。通過從1～8 μL改變進(jìn)樣量，發(fā)現(xiàn)當(dāng)進(jìn)樣量為1～4 μL時(shí)基線噪聲較大，當(dāng)進(jìn)樣量為8 μL時(shí)出現(xiàn)平頭峰，當(dāng)進(jìn)樣量為6 μL時(shí)峰高較適宜，所以選擇進(jìn)樣量為6 μL，見圖1。

2.2 檢測波長的確定

將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在波長220～300 nm作紫外掃描，發(fā)現(xiàn)在254 nm波長下帶寬最小，且有最大吸收，為保證較好的靈敏度及最小的干擾，選擇254 nm為檢測波長。

2.3 流動(dòng)相的選擇

2.3.1 流動(dòng)相對分離效果的影響 文獻(xiàn)多采用了緩沖鹽體系作為流動(dòng)相，本工作則采用甲醇與水體系作為流動(dòng)相。一方面用甲醇和水可以達(dá)到很好的分離效果，另一方面避開緩沖鹽，沖洗色譜柱比較方便，對整個(gè)儀器管路的維護(hù)也有好處。考察了甲醇與水多種配比作為流動(dòng)相，優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)品分離效果。包括純甲醇、甲醇/水（9∶1，V/V）、甲醇/水（8∶2，V/V）、甲醇/水（7∶3，V/V）、甲醇/水（6：4，V/V）、甲醇/水（5∶5，V/V），結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用甲醇/水（8∶2，V/V）作為流動(dòng)相時(shí)，對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯混合液能達(dá)到基線分離，峰寬較窄，且保留時(shí)間較短，見圖2。

2.3.2 分離性能 根據(jù)《中華人民共和國藥典》中規(guī)定，當(dāng)分離度大于1.5時(shí)可以認(rèn)為兩種組分已經(jīng)完全分離。選擇甲醇/水（6∶4，V/V），出峰時(shí)間太長，需要25 min，不利于試驗(yàn)的進(jìn)行。選擇甲醇/水（9∶1，V/V），雖然出峰時(shí)間縮短了，但對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸乙酯的峰重疊，無法做出區(qū)分。甲醇/水（8∶2，V/V）時(shí)分離效果最好（圖2）。

2.4 流速的確定

考察了流速為0.5～2.0 mL/min時(shí)4種防腐劑混合液分離情況。結(jié)果表明，隨著流速增大，保留時(shí)間縮短。但是當(dāng)流速大于1.6 mL/min時(shí)前兩個(gè)峰會(huì)出現(xiàn)明顯重疊，另外，高流速下泵壓力增大，會(huì)降低儀器的使用壽命，并且不能明顯縮短保留時(shí)間。綜合考慮以上因素，選擇流速為1.5 mL/min。

2.5 柱溫的確定

考察了柱溫為20～40 ℃時(shí)4種防腐劑標(biāo)準(zhǔn)混合液分離情況。結(jié)果表明，柱溫為20 ℃時(shí)，對羥基苯甲酸丁酯在4 min以后出現(xiàn)，而柱溫為30 ℃時(shí)，對羥基苯甲酸丁酯在4 min之前就出現(xiàn)了，當(dāng)柱溫為40 ℃時(shí)，峰強(qiáng)度降低較大。綜合而言，30 ℃是最佳柱溫，見圖3。

2.6 工作曲線、相關(guān)系數(shù)及檢出限

以甲醇/水（8∶2，V/V）為流動(dòng)相，流速為1.5 mL/min，紫外檢測器檢測波長為254 nm，柱溫為30 ℃，分別進(jìn)不同體積的上述標(biāo)準(zhǔn)溶液。以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表1。

2.7 回收率及精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取已檢測過的索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏各0.500 0 g，分別加入一定量的防腐劑混合標(biāo)準(zhǔn)品，按優(yōu)化的色譜條件進(jìn)行6次分析，考察本方法的回收率和精密度，結(jié)果見表2。

2.8 實(shí)際樣品分析

采用優(yōu)化后的最佳色譜條件，選擇市售的具有代表性的索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏兩種樣品，分別測定了其中所含防腐劑的種類，測定結(jié)果見圖4、圖5。

通過樣品色譜圖（圖4、圖5）與標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（圖3）的比對，結(jié)果表明，在索芙特男士保濕乳液中檢測出了對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯，且對羥基苯甲酸甲酯的峰面積比對羥基苯甲酸丙酯大，而在曲咪新乳膏中則檢測出了對羥基苯甲酸乙酯。

3 小結(jié)與討論

采用MICROSORB-MV C18為分離柱，以乙醇超聲提取樣品中防腐劑，高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，4 min內(nèi)即可同時(shí)完成4種防腐劑的色譜分離，分離速度快、前處理簡單、靈敏度高，可滿足實(shí)際樣品測定需要。

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