曲學偉

摘 要：高效液相色譜技術(shù)以其高效、快速、準確度高的特點，使其在藥品的主成分含量及雜質(zhì)檢測中得到廣泛應(yīng)用，隨著該技術(shù)的不斷探索與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來越重要。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；藥品檢驗；主成分含量

高效液相色譜法是20世紀70年代開始發(fā)展起來的高效、快速、準確度高、適用范圍廣的一項化學分析及分離的技術(shù)，高效液相色譜具有高壓、高速、高效、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣、柱子可反復(fù)使用以及樣品量少、容易回收等特點，受到人們廣泛的關(guān)注及重視[1-3]。該檢測方法也越來越成熟，得到各行業(yè)的認可及利用，已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用[4-6]。高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗中也被廣泛的應(yīng)用，其對于藥品中的主成分含量、藥品中的雜質(zhì)檢測等藥物分析中有著快速、準確、高效的檢測優(yōu)點及效果[7-9]。

1 概述

1.1高效液相色譜定義

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析[10，11]。

高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相） 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。高效液相色譜應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領(lǐng)域。

1.2 特點：

高相液相色譜具有高壓的特點，流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓；高速的特點，分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時；高效的特點，分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍；高靈敏度的特點，紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數(shù)量級；應(yīng)用范圍廣的特點，百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢；柱子可反復(fù)使用的特點，用一根柱子可分離不同化合物；樣品量少、容易回收的特點。樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備[12]。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應(yīng)”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

2在藥品檢驗中的應(yīng)用

高效液相色譜技術(shù)與很多先進的檢測儀器融合在一起，在藥品檢驗中的應(yīng)用越來越廣泛。目前采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合的方式去檢驗藥品的主成分含量及相關(guān)雜質(zhì)等，大大提高了藥品檢驗的效率和準確性。

2.1 藥品主成分含量的測定

藥品的主成分含量可以通過高效液相色譜法得到高效準確的檢測。原理為該物質(zhì)（的官能團）在某一特定波長下有吸收，并且，該物質(zhì)濃度和峰面積成正比。利用高效液相色譜法可以避免藥品輔料對主成分檢測的干擾，使檢測結(jié)果更準確。

例如：使用高效液相色譜技術(shù)對米諾磷酸片中主成分米諾膦酸含量進行檢測，測定方法簡便，測定結(jié)果準確、可靠。主要方法為將片劑研碎，取一定量用相應(yīng)試劑進行溶解、過濾、上樣檢測。使用流動相為焦磷酸鈉-四丁基溴化銨-甲醇，檢測波長為226nm，結(jié)果顯示在0.104～31.283μg/ml范圍內(nèi)線性良好，樣品檢測中重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定。

2.2 藥品中雜質(zhì)的測定

高效液相色譜法要求要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的了解樣品的有關(guān)性質(zhì)，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點及其應(yīng)用范圍[13]。選擇色譜分離方法的主要根據(jù)是樣品的相對分子質(zhì)量的大小，在水中和有機溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學結(jié)構(gòu)等物理、化學性質(zhì)。

利用高效液相色譜技術(shù)對藥品中的雜質(zhì)進行檢測，由于靈敏度高，相對比較小的可能一般檢測方法難以檢測出的雜質(zhì)，高效液相色譜可以定性及定量的檢測，檢測結(jié)果更準確，更接近真實值，簡便、可靠、重復(fù)性高、線性關(guān)系良好、回收率理想，對藥品中的雜質(zhì)可以更好的反饋，對藥品的藥代及藥效動力學的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。進而更好的保證藥品的使用安全，保證人民的生命安全[14]。

3結(jié)束語

高效液相色譜技術(shù)具有很大的應(yīng)用空間及發(fā)展前景，在藥品檢驗的領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，它以其獨特的優(yōu)勢，大大提高了檢測的時效性及準確性。高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗中起著越來越重要的作用，尤其是在藥品主成分含量檢測、及藥品雜質(zhì)檢測[15，16]。高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用于多個領(lǐng)域，具有很大的發(fā)展?jié)摿?，隨著該技術(shù)的不斷改進與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來越重要。

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