反復(fù)性自然流產(chǎn)不孕的封閉抗體檢驗(yàn)與治療分析

王娜

目的 探究反復(fù)性自然流產(chǎn)不孕患者的封閉抗體水平，并對其進(jìn)行淋巴細(xì)胞免疫治療。方法 選取反復(fù)性自然流產(chǎn)不孕患者50例為研究對象，對所有患者進(jìn)行封閉抗體水平測定，隨后給予淋巴細(xì)胞免疫治療，并對治療后的患者再次進(jìn)行封閉抗體水平測定，記錄患者成功妊娠的情況。結(jié)果 50例患者在未進(jìn)行淋巴細(xì)胞免疫治療前封閉抗體陽性率占比0.0%，均無法正常妊娠，而50例患者經(jīng)過淋巴細(xì)胞免疫治療后，封閉抗體轉(zhuǎn)為陽性例數(shù)37例，封閉抗體陽性率占74.0%，妊娠幾率較之前大幅度提高；患者經(jīng)淋巴細(xì)胞免疫治療后的封閉抗體陽性率相比治療前顯著增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 反復(fù)性自然流產(chǎn)不孕患者的封閉抗體水平大多為陰性，流產(chǎn)次數(shù)較多的患者其抗體陰性率更高，采用淋巴細(xì)胞免疫治療對部分患者的效果較好，能有效促進(jìn)患者產(chǎn)生封閉抗體，同時提高患者成功妊娠的幾率，具有一定的臨床借鑒價值。

反復(fù)性自然流產(chǎn)；不孕；封閉抗體；淋巴細(xì)胞免疫治療

反復(fù)流產(chǎn)是妊娠期婦女常見的一種并發(fā)癥，在整個已婚婦女中的發(fā)病率占到10%[1]，該病受遺傳因素、生殖道畸形、內(nèi)分泌紊亂及感染等因素的影響，目前為止原因不明的因素約有

40%～80%。近年來，隨著免疫學(xué)研究的深入，臨床證實(shí)大部分原因不明的反復(fù)自然流產(chǎn)與患者的免疫機(jī)能相關(guān)[2]。本研究對50例反復(fù)性自然流產(chǎn)不孕的患者進(jìn)行封閉抗體測試，同時對其采取淋巴細(xì)胞免疫治療，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月～2013年1月山東省淄博市桓臺縣婦幼保健醫(yī)院收治的反復(fù)性自然流產(chǎn)不孕患者50例為研究對象，對所有患者進(jìn)行封閉抗體水平測定?；颊吣挲g23～41歲，平均年齡（28.5±4.1）歲；流產(chǎn)次數(shù)3～8次，平均（3.5±2.1）次。所有患者均行婦科常規(guī)檢查，結(jié)果提示未見明顯異常。本次研究均告知患者及家屬，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗(yàn) 采用補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗(yàn)對患者的封閉抗體進(jìn)行檢測，抽取丈夫4mL靜脈血，并加入適量肝素抗凝。取等體積抗凝血的淋巴細(xì)胞分離液加入試管內(nèi)，隨后將4mL抗凝血沿著試管壁緩慢的加入分離液內(nèi)，離心0.5h，將淋巴細(xì)胞液層輕輕的吸出，使用20倍的生理鹽水將淋巴細(xì)胞液洗滌3次，并將其濃度調(diào)節(jié)20×106～40×106/mL。抽取患者的2mL靜脈血進(jìn)行血清分離。

取丈夫的淋巴細(xì)胞懸液20μL，并將其加入妻子的20μL血清中，混合均勻后放置于37℃的溫水浴中保溫0.5h，最后再加入40μL兔補(bǔ)體進(jìn)行混合，37℃的溫水浴中保溫1h。加入10μL濃度為2%的臺盼藍(lán)，染色10min后進(jìn)行制片，在光鏡下對細(xì)胞進(jìn)行觀察，并記錄死亡細(xì)胞的數(shù)量，若死亡細(xì)胞超過10%為陽性，反之則為陰性[3]。

1.2.2 淋巴細(xì)胞免疫治療方法 將配偶的外周全血抽取20mL，經(jīng)過淋巴細(xì)胞分離液將其中的淋巴細(xì)胞分離出來，并將細(xì)胞數(shù)調(diào)節(jié)到20×106～40×106/mL。每過3周給予患者進(jìn)行免疫注射一次，每次在患者雙側(cè)前臂處的多個點(diǎn)進(jìn)行0.3～0.5mL的注射，持續(xù)治療4次為1個療程。于最后1次治療結(jié)束后的7～10d進(jìn)行抗體封閉復(fù)查，若復(fù)查結(jié)果提示升高，則告知患者進(jìn)行妊娠，若仍未受孕，則以后的每3周加強(qiáng)1次治療，直達(dá)妊娠后的每3周進(jìn)行1次治療，一直持續(xù)到妊娠的16周。治療次數(shù)為3～14次。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察患者經(jīng)免疫治療后機(jī)體封閉抗體水平的變化，并隨訪患者的妊娠情況[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本次研究使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，其中計(jì)數(shù)資料以“n（%）”表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用“±s”表示，采用t檢驗(yàn)；P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者經(jīng)淋巴細(xì)胞免疫治療后的封閉抗體水平變化治療前陰性例數(shù)為50例，占100.0%，陽性例數(shù)為0例，占0.0%；治療后陰性例數(shù)13，占26.0%，陽性例數(shù)為37例，占74.0%，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=116.87，P＜0.05）。見表1。

表1 患者經(jīng)淋巴細(xì)胞免疫治療后的封閉抗體水平變化（n）

2.2 患者經(jīng)淋巴細(xì)胞免疫治療后的妊娠結(jié)局 50例患者經(jīng)過淋巴細(xì)胞免疫治療后，最終達(dá)到妊娠目的的患者33例，妊娠幾率高達(dá)66.0%。

3 討論

隨著現(xiàn)階段臨床醫(yī)學(xué)對生殖免疫學(xué)的深入研究，對于妊娠期孕婦發(fā)反復(fù)性自然流產(chǎn)的關(guān)注度越來越高。原發(fā)性習(xí)慣性自然流產(chǎn)或與患者對半同種抗原以及胚胎的反應(yīng)性較低相關(guān)[5]，同時機(jī)體無法適應(yīng)妊娠產(chǎn)生的封閉抗體造成胚胎受到排斥，引發(fā)流產(chǎn)。妊娠早期就可進(jìn)行封閉抗體檢出，而孕中期時封閉抗體將達(dá)到最大值。封閉抗體在體內(nèi)具有以下特性：（1）妊娠初期時即可對產(chǎn)婦進(jìn)行檢測，其含量會隨著妊娠時間的增加而升高，分娩結(jié)束數(shù)周即可消失[6]；（2）血清中IgG會直接反映封閉抗體的活性[7]；（3）胎盤內(nèi)IgG活性與血清內(nèi)的封閉抗體相同；（4）丈夫的B淋巴細(xì)胞會將孕婦體內(nèi)的封閉抗體活性[8]。

采用配偶的淋巴細(xì)胞對缺乏封閉抗體的患者進(jìn)行免疫治療，其目的在于淋巴細(xì)胞可對母體進(jìn)行刺激并誘導(dǎo)母體產(chǎn)生同種免疫反應(yīng)，使其產(chǎn)生封閉抗體保護(hù)母體，防止胚胎或是胎兒因父系的抗原引發(fā)母系免疫系統(tǒng)對其進(jìn)行識別與殺傷，最終起到產(chǎn)生免疫的作用，提高患者再次妊娠的成功率[9]。本研究對50例患者進(jìn)行封閉抗體檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，患者在治療前抗體均呈（-），而經(jīng)過淋巴細(xì)胞免疫治療后其抗體轉(zhuǎn)化為（+）的共37例，相比治療前差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而最終妊娠成功的患者共有33例。

綜上所述，采用配偶的淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫治療不僅能有效提高患者的免疫功能，增加體內(nèi)的封閉抗體含量，同時方法簡單，技術(shù)要求相對簡便，發(fā)生交叉感染的危險系數(shù)低，患者再次成功妊娠的幾率高，是一種值得臨床借鑒的治療方法。

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[2] 徐璐,高建軍,馬麗,等.194例封閉抗體不足致反復(fù)性自然流產(chǎn)患者淋巴細(xì)胞主動免疫治療的臨床分析[J].中國保健營養(yǎng)（中旬刊）,2013,11(11):635-636.

[3] 許紅,孫東蘭,高虹,等.封閉抗體與原發(fā)和繼發(fā)反復(fù)自然流產(chǎn)的關(guān)系[J].河北醫(yī)藥,2011,33(21):3298.

[4] 劉繼龍.淋巴細(xì)胞免疫治療反復(fù)性流產(chǎn)的療效分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,8(17):187-188.

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[7] 沈伶,盧煥霞,胡瑞霞,等.兩種免疫治療方法治療封閉抗體陰性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的療效觀察[J].新醫(yī)學(xué),2011,42(6):402-405.

[8] 崔艷萍,鐘小燁,班清媚,等.淋巴細(xì)胞主動免疫治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的療效研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2011,38(9):1626-1627.

[9] 張艷華,劉梅梅,李佩玲,等.淋巴細(xì)胞主動免疫聯(lián)合丙種球蛋白治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的研究[J].國際免疫學(xué)雜志,2012,35(5):398-402.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.28.026

山東 256400 山東省淄博市桓臺縣婦幼保健醫(yī)院檢驗(yàn)科 （王娜）