王金等

摘要：以蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum imai）為研究對象，以多糖得率衡量超聲波輔助提取工藝。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝。結(jié)果表明，影響口蘑多糖得率的因素依次為提取溫度>鹽酸濃度>提取時(shí)間>料液比，最佳提取工藝為0.2 mol/L鹽酸、料液比1∶40（g∶mL），50 ℃超聲波提取20 min。在此提取條件下，口蘑多糖的得率為（16.65±0.29）%，該提取方法簡便、快速，可以為蒙古口蘑的質(zhì)量控制和合理開發(fā)提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum imai）；多糖；超聲波輔助提取

中圖分類號：S646.9；R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）12-2978-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.12.044

Optimization of Ultrasound-assisted Extraction and Content Determination of Polysaccharide from Tricholoma mongolicum Imai

WANG Jin1，DING Ge-sheng2，TIAN Liu1，YU Cheng-fang1，WANG Zhi-bao1

（1.Department of Pharmacy， Hebei North University， Zhangjiakou 075000， Hebei，China；

2.Chongli Education & Training Center， Zhangjiakou 075000，Hebei， China ）

Abstract：To optimize the ultrasound-assisted extraction process and content determination of polysaccharide from Tricholoma Mongolicum Imai， based on the single factor experiments， an orthogonal array was constructed to achieve the best conditions. The effects of influencing factors were extraction temperature> acid concentration >extraction time >solid-liquid ratio. The optimal conditions were as follows： extraction solvent 0.2 mol/L， solid-liquid ratio 1∶40， extraction time 20 min and extraction temperature 50 ℃. Under these optimal conditions， the polysaccharide yield was （16.65±0.29）%. This extraction method was simple and rapid， which could provide reference for the rational development and quality control of Tricholoma Mongolicum Imai.

Key words：Tricholoma Mongolicum Imai； polysaccharide； ultrasound-assisted extraction

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum imai）又稱白蘑，為白蘑科白蘑屬（口蘑屬）真菌，主要分布于中國河北、內(nèi)蒙古、黑龍江、吉林、遼寧等地區(qū)[1，2]。其菌肉肥厚、質(zhì)地細(xì)嫩、味美獨(dú)特，還可供藥用，性平、味甘、宣腸益氣、散熱解表。植物多糖具有豐富的藥理活性，如抗氧化、抗疲勞、降血糖、降血脂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抑制α-葡萄糖苷酶、穩(wěn)定蛋白質(zhì)等作用[3-10]，因此其研究越來越受到學(xué)者的關(guān)注。本試驗(yàn)以去離子水為介質(zhì)，采用超聲波輔助提取技術(shù)提取蒙古口蘑多糖，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，可為其工業(yè)化利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蒙古口蘑產(chǎn)于河北省張家口市張北草原，干燥粉碎后過60目篩，密封保存?zhèn)溆?。D-葡萄糖購于美國Fisher公司，濃硫酸、苯酚、乙醇均為分析純，水為去離子水。

KQ-250DA型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、Alc-210型電子天平（賽多利斯集團(tuán)）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 口蘑提取液多糖含量測定

1）供試品溶液的制備。稱取口蘑粉末5 g，置于錐形瓶中，加溶劑超聲波提取，提取液3 000 r/min離心5 min，上清液定容至100 mL容量瓶中，得供試品溶液。

2）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。精密稱取干燥至恒重的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖400 mg，置于100 mL容量瓶中，加去離子水定容至刻度，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。分別精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液至25 mL具塞比色管中，加去離子水至終體積為2.0 mL，加5%苯酚溶液1 mL、濃硫酸5.0 mL用去離子水定容，混勻，放置10 min，沸水浴5 min，取出后冰浴冷卻5 min，于490 nm處測定吸光度，同時(shí)以去離子水做空白。以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 單因素試驗(yàn)

1）提取溶劑。精密稱取口蘑粉末5 g，分別用去離子水，20%、40%、60%、80%和95%乙醇提取，其他條件設(shè)定為料液比1∶20（g∶mL，下同）、提取溫度30 ℃、超聲波時(shí)間30 min、提取1次，每份做3組平行試驗(yàn)，考察提取溶劑對口蘑多糖得率的影響。

2）酸濃度。精密稱取口蘑粉末5 g，分別以0.1、0.2、0.3、0.4 mol/L鹽酸溶液提取，其他條件設(shè)定為料液比1∶20、提取溫度30 ℃、超聲波時(shí)間30 min提取1次，每份做3組平行試驗(yàn)，考察提取液酸濃度對口蘑多糖得率的影響。

3）料液比。精密稱取口蘑粉末5 g，以0.3 mol/L鹽酸溶液為提取溶劑，料液比分別設(shè)定為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50，提取溫度30 ℃、超聲波時(shí)間30 min提取1次，每份做3組平行試驗(yàn)，考察料液比對口蘑多糖得率的影響。

4）提取時(shí)間。精密稱取口蘑粉末5 g，加入40倍量0.3 mol/L鹽酸溶液，提取時(shí)間分別設(shè)定為20、30、40、50、60 min，提取溫度30 ℃提取1次，每份做3組平行試驗(yàn)，考察提取時(shí)間對口蘑多糖得率的影響。

5）提取溫度。精密稱取口蘑粉末5 g，加入40倍量0.3 mol/L鹽酸溶液，提取溫度分別設(shè)定為30、40、50、60、70 ℃，提取時(shí)間30 min提取1次，每份做3組平行試驗(yàn)，考察提取時(shí)間對口蘑多糖得率的影響。

1.2.3 正交試驗(yàn) 按照單因素試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)4因素3水平正交試驗(yàn)對口蘑多糖超聲波提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，因素與水平見表1，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照“1.2.1”中制備曲線的方法，所得回歸曲線方程為：A=6.025 8C-0.023 8（r=0.999 5），表明葡萄糖溶液在32.0～160.0 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 提取溶劑對多糖得率的影響 提取溶劑對多糖得率的影響見圖1。由圖1可知，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，多糖得率隨之降低，用去離子水提取時(shí)得率最大，故選擇去離子水作為提取溶劑。

2.2.2 鹽酸濃度對多糖得率的影響 鹽酸濃度對多糖得率的影響見圖2。由圖2可知，鹽酸溶液為0.3 mol/L時(shí)多糖得率相對最高，故選擇酸濃度為0.3 mol/L。

2.2.3 料液比對多糖得率的影響 料液比對多糖得率的影響見圖3。由圖3可知，當(dāng)料液比從1∶10降低到1∶40時(shí)，多糖得率隨之增大，當(dāng)料液比為1∶40時(shí)達(dá)到最大值，隨后雖然料液比進(jìn)一步降低，但多糖得率卻有所下降，故提取時(shí)選擇的料液比為1∶40。

2.2.4 提取時(shí)間對多糖得率的影響 提取時(shí)間對多糖得率的影響見圖4。由圖4可知，起初多糖得率隨超聲波時(shí)間的增加而增加，當(dāng)超聲波時(shí)間為30 min時(shí)達(dá)到最大值，超過30 min后，多糖得率卻減少，故選擇超聲波提取時(shí)間為30 min。

2.2.5 提取溫度對多糖得率的影響 提取溫度對多糖得率的影響見圖5。由圖5可知，當(dāng)提取溫度從30 ℃升高到60 ℃時(shí)，多糖得率隨溫度升高而增加，且在60 ℃達(dá)到最大值。然后繼續(xù)升高提取溫度，多糖得率反而下降，故選擇提取溫度為60 ℃。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，為了進(jìn)一步考察各因素之間的相互作用，選擇提取時(shí)間（A）、鹽酸濃度（B）、料液比（C）和提取溫度（D）為考察因素，設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)，以多糖得率為指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見表2。由表2可知，各因素對口蘑多糖得率的影響順序依次為：提取溫度>鹽酸濃度>提取時(shí)間>料液比，最佳提取條件為A1B1C2D1，即0.2 mol/L鹽酸、料液比1∶40、提取時(shí)間為20 min、提取溫度50 ℃。稱取6份口蘑粉末各10 g，按照前述正交試驗(yàn)確定的最佳提取條件進(jìn)行提取，測定多糖得率為（16.65±0.29）%，其結(jié)果高于正交試驗(yàn)各組，說明正交試驗(yàn)得出的最優(yōu)條件準(zhǔn)確可行。精密度試驗(yàn)的RSD為0.12%，說明儀器精密度良好；重復(fù)性試驗(yàn)的RSD為1.74%，說明該方法重復(fù)性良好；標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液顯色后，30 min內(nèi)測定其吸光度RSD分別0.68%和0.92%，說明標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液至少在30 min內(nèi)穩(wěn)定；加樣回收率為95.63%～103.3%，RSD為2.57%，結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確可靠，可用于口蘑多糖的含量測定。

3 小結(jié)

試驗(yàn)采用超聲波輔助法對蒙古口蘑多糖進(jìn)行提取，通過正交試驗(yàn)，得到了最佳提取工藝為0.2 mol/L鹽酸、料液比1∶40、提取時(shí)間為20 min、提取溫度50 ℃，在此提取條件下，口蘑多糖得率為（16.65±0.29）%。超聲波輔助提取口蘑多糖具有操作簡單、提取率高等特點(diǎn)，可以用于工業(yè)上多糖的生產(chǎn)。

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