何磊磊等

摘要：為探討小動物針?biāo)帍?fù)合麻醉調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)的機(jī)理，設(shè)計(jì)了犬腹部麻醉合適的配穴、針刺參數(shù)和麻醉藥用量，在此基礎(chǔ)上將25只犬隨機(jī)均分為5組，即舒泰組、1/3舒泰復(fù)合針刺麻醉組、1/2舒泰復(fù)合針刺麻醉組、2/3舒泰復(fù)合針刺麻醉組和針刺組，對其進(jìn)行腹部切皮術(shù)，并在試驗(yàn)過程中的7個時間點(diǎn)采血離心取血漿做酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試驗(yàn)，測定各時間點(diǎn)應(yīng)激激素—皮質(zhì)醇和阿片肽（OP）的含量。結(jié)果顯示，各組雖然麻醉方式不同，但均能達(dá)到麻醉的效果。其中針刺組的OP濃度在15～30 min施加針刺時顯著高于其他各組，在此時間點(diǎn)，其皮質(zhì)醇濃度明顯降低；而針?biāo)帍?fù)合麻醉各組OP濃度在15～30 min時均有不同程度的升高，皮質(zhì)醇濃度也在OP濃度達(dá)到高峰時有不同程度的降低；舒泰組的OP濃度在整個試驗(yàn)過程中均無明顯變化，皮質(zhì)醇濃度在整個試驗(yàn)過程中偏高。說明針刺麻醉可以使犬的OP濃度升高，降低皮質(zhì)醇的分泌，有效抑制應(yīng)激反應(yīng)；針?biāo)帍?fù)合麻醉效果良好，使皮質(zhì)醇濃度較為穩(wěn)定，減小了應(yīng)激。表明可通過調(diào)節(jié)OP濃度影響皮質(zhì)醇的產(chǎn)生來實(shí)現(xiàn)機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)。

關(guān)鍵詞：針?biāo)帍?fù)合麻醉；應(yīng)激；應(yīng)激激素；犬

中圖分類號：R246.2；S857.12+4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）12-2964-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.12.040

Regulating Effects of Combined Acupuncture and Drug Anesthesia on Stress Hormones and Opioid Peptide in Dogs

HE Lei-lei，QIAN Peng，ZHANG Shi-qi，JIANG Chun-chi，PENG Yu-lu，LIU Zi-dan，ZHANG Hai-yan，WANG Jin-hua

（Agronomy and Animal Science Department， Hainan University， Haikou 570228， China）

Abstract：For investigating the regulation mechanism of of combined acupuncture and medicine anesthesia on small animal， based on the designs of appropriate abdominal anesthesial acupoints，acupunctural parameter and the dosage of drugs，25 dogs were randomly divided into 5 groups such as simple zoletil group，combined acupuncture and 1/3 zoletil group，combined acupuncture and 1/2 zoletil group， combined acupuncture and 1/2 zoletil group， combined acupuncture and 2/3 zoletil group and acupuncture group. Then they were carried out abdominal incision surgery， and collected plasma samples at 7 time points in experiment for detection of cortisol and opioid peptide （OP） by enzyme linked immune sorbent assay （ELISA）. The results showed that all animals in five groups were anesthetized. The OP concentration in simple acupuncture group between 15 to 30 min when applying acupuncture iwas significantly higher than other groups between 15 to 30 min when applying acupuncture，.At this time point in time， its cortisol decreased significantly；.The OP concentration of the needlecombined acupuncture and medicine compound anesthesia groups all increased with different degree within 15-30 min time all have different degree of increase， and the concentration of cortisol in these groups also decreased with varyingdeferent degrees of lowering when in the peak of OP concentration.The OP concentrations ofin the simple zoletil group had no obvious change induring the process of the whole experiment，and cortisol concentration iwas significantly higher than other groups. ThatIt indicated that acupuncture anesthesia canould makeincrease dog OP higher concentration， reduce the secretion of cortisol， and effectively restrain stress reaction，. The combined acupuncture and drug needle medicine compound anesthesia effect is also had good effect， and could reduce the stress with that relatively stable cortisol concentration. iswere relatively stable，reduced the stress. That can be It suggested that the body′s stress response could be regulated through affect cortisol production by adjusted through the OP concentrations affect cortisol production to implement the regulation of the body′s stress response.

Key words： combined acupuncture and drugs anesthesia； stress； stress hormone； dogs

隨著人們的物質(zhì)生活水平的不斷提高，寵物作為家庭伴侶，其健康也不斷得到人們的重視，然而在很多臨床手術(shù)中，常因?yàn)槁樽硭幬镞^敏等副作用的存在降低了手術(shù)的安全性[1]。而針?biāo)帍?fù)合麻醉既可以減少麻醉藥物的用量，還可以減少應(yīng)激反應(yīng)[2]。有研究表明針刺穴位可以促進(jìn)腦和脊髓釋放出5-羥色胺、內(nèi)源性阿片肽（OP）物質(zhì)，從而揭示了針刺鎮(zhèn)痛的原理[3]，同時針刺也可以通過調(diào)控體內(nèi)應(yīng)激物質(zhì)（促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)酮和兒茶酚胺）恢復(fù)和維持機(jī)體的生理穩(wěn)定等[4]。有學(xué)者嘗試在針?biāo)帍?fù)合麻醉中給予納絡(luò)酮阻斷阿片受體，發(fā)現(xiàn)電針刺激對應(yīng)激反應(yīng)的抑制作用減弱，從而提示電針主要通過內(nèi)源性O(shè)P發(fā)揮對應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用[5]。目前，針?biāo)帍?fù)合麻醉在寵物臨床中基本無使用，因而探究其在犬鎮(zhèn)痛過程中的作用機(jī)理對于寵物行業(yè)的發(fā)展具有重要意義，探究舒泰用量對針刺效果的影響對探究針?biāo)帍?fù)合麻醉在寵物臨床上的應(yīng)用也意義重大。本試驗(yàn)通過測定中國數(shù)量最多的中華田園犬行腹部切皮術(shù)時使用不同的舒泰麻醉用量復(fù)合針刺麻醉時體內(nèi)OP與皮質(zhì)醇濃度來探究針刺的作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動物與分組 25只健康中華田園犬，每天兩餐定時人工飼養(yǎng)。試驗(yàn)犬隨機(jī)均分為5組，即舒泰組（給予正常用量舒泰進(jìn)行麻醉），1/3針?biāo)幗M（1/3正常用量舒泰復(fù)合針刺進(jìn)行麻醉），1/2針?biāo)幗M（1/2正常用量舒泰復(fù)合針刺進(jìn)行麻醉），2/3針?biāo)幗M（2/3正常用量舒泰復(fù)合針刺進(jìn)行麻醉），針刺組（單純使用針刺進(jìn)行麻醉）。

1.1.2 試驗(yàn)儀器 采血針（自帶采血導(dǎo)管）、真空采血管、Centrifuge5418型離心機(jī)、Mode680型酶標(biāo)儀、Smy-10a華佗牌電針儀及其配件。

1.1.3 藥品及試劑 阿托品、舒泰、蒸餾水、犬阿片肽（OP）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，犬皮質(zhì)醇（Cortisol）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，2.5%檸檬酸鈉。

1.2 最佳試驗(yàn)參數(shù)

試驗(yàn)結(jié)果所示，最佳配穴是百會穴配關(guān)元俞穴，頻率是40 Hz，時間是30 min。

1.3 針?biāo)帍?fù)合麻醉試驗(yàn)方法

1.3.1 犬處理方法 試驗(yàn)犬術(shù)前禁食12 h使其空腹，給藥前稱重，犬兩前肢橈內(nèi)側(cè)剃毛。舒泰50靜脈注射正常用量為0.1 mL/kg，阿托品用量為0.2 mL/kg，針刺組犬不給麻醉藥。3～5 min后犬基本保持安靜，此時以百會穴配關(guān)元俞穴加以電針刺激，電針刺激頻率為40 Hz，時長30 min。待穩(wěn)定后（約給藥后10 min），用手術(shù)刀在腹中線劃約1.5 cm左右的表皮，試驗(yàn)犬基本無反應(yīng)。分別在給舒泰時0 min、給舒泰后的15、30、45、75、105、135 min這7個時間點(diǎn)對試驗(yàn)犬于前肢橈內(nèi)側(cè)靜脈采血1.5 mL于真空采血管中并編號，靜置備用。

1.3.2 血樣處理 將真空采血管放置于離心機(jī)中，以1 500 r/min離心15 min，收集上清液（即血漿）0.8 mL于裝有適量抗凝劑的EP管中，充分混勻，靜置于EP管架上。

1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 按ELISA試劑盒（上海邦奕商貿(mào)有限公司）說明書來進(jìn)行ELISA試驗(yàn)，測定各個時間點(diǎn)血漿中的OP與皮質(zhì)醇濃度。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)使用SAS system 8.1 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間、組內(nèi)再分別做單因子變量顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)各組OP濃度變化

由圖1可見，在給藥后15 min（即加電針刺激后）針刺組的OP濃度開始顯著升高，并在給藥后30min（即電針刺激結(jié)束時）其OP濃度升至頂峰，而在給藥后45～105 min，其OP濃度又開始顯著地持續(xù)降低；整個試驗(yàn)過程中針?biāo)幗M與舒泰組在不同時間點(diǎn)的OP濃度變化均無顯著性差異（P>0.05），且變化趨勢基本一致。

2.2 試驗(yàn)各組皮質(zhì)醇濃度變化

由圖2可見，盡管試驗(yàn)各組的皮質(zhì)醇濃度初始值各不相同，但其之間并無顯著性差異；在整個試驗(yàn)過程中，針刺組、舒泰組以及2/3針?biāo)幗M皮質(zhì)醇濃度水平均無明顯差異，其中2/3針?biāo)幗M的皮質(zhì)醇濃度最為穩(wěn)定；而1/2針?biāo)幗M在15～30 min時間段內(nèi)皮質(zhì)醇濃度有顯著上升，在30 min后又下降趨于穩(wěn)定；1/3針?biāo)幗M則在30～75 min時間段內(nèi)皮質(zhì)醇濃度明顯上升，隨后下降并趨于穩(wěn)定。

2.3 試驗(yàn)各組OP濃度與皮質(zhì)醇濃度變化關(guān)系

2.3.1 舒泰組皮質(zhì)醇和OP的濃度變化 由圖3可知，給予舒泰正常麻醉用量的犬體內(nèi)的OP濃度在整個試驗(yàn)過程中無明顯變化，說明舒泰不能刺激機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性O(shè)P。在舒泰麻醉過程中，犬表現(xiàn)相對穩(wěn)定，但整個過程中皮質(zhì)醇濃度水平一直偏高，說明舒泰在整個手術(shù)過程中只是起到了麻醉鎮(zhèn)靜的作用，對于機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)作用較小。

2.3.2 針刺組皮質(zhì)醇和OP的濃度變化 由圖4可知，給予犬百會穴配合關(guān)元俞穴的電針刺激后的皮質(zhì)醇和OP的變化有明顯規(guī)律。在15～30 min 時給予電針刺激，OP濃度上升，至30 min時達(dá)到高峰，之后停止電針刺激，OP濃度開始下降并逐漸恢復(fù)到較低水平；皮質(zhì)醇濃度在OP濃度達(dá)到高峰時開始下降并在一般水平上下波動。整個試驗(yàn)過程中犬的狀態(tài)不是很穩(wěn)定，但是對犬腹部劃皮，犬沒有疼痛反應(yīng)。

2.3.3 2/3針?biāo)幗M皮質(zhì)醇和OP的濃度變化 由圖5可知，給予舒泰正常麻醉用量的2/3劑量復(fù)合針刺麻醉的犬體內(nèi)的OP濃度在整個試驗(yàn)過程中變化較小，無明顯變化規(guī)律。皮質(zhì)醇濃度也無明顯變化規(guī)律。整個麻醉過程中，犬表現(xiàn)相對穩(wěn)定。

2.3.4 1/2針?biāo)幗M皮質(zhì)醇和OP的濃度變化 由圖6可見，在整個試驗(yàn)過程中，1/2針?biāo)幗M的OP濃度在給藥15～30 min電針刺激時明顯升高，30 min時達(dá)到高峰，此后降低。而皮質(zhì)醇的濃度在OP濃度達(dá)到最高峰時開始下降，并在45 min后又開始緩慢上升。

2.3.5 1/3針?biāo)幗M皮質(zhì)醇和OP的濃度變化 由圖7可知，在對犬進(jìn)行舒泰正常麻醉用量的1/3劑量配合針刺麻醉的過程中，其OP濃度在給藥后30～45 min有上升趨勢，隨后又下降至一般水平，在整個過程中無顯著變化。而皮質(zhì)醇濃度在給藥后45～75 min呈明顯上升趨勢（其原因有待進(jìn)一步分析），犬在試驗(yàn)過程中表現(xiàn)平穩(wěn)。

3 討論

盡管針刺麻醉的理論研究已日趨成熟，但其在寵物臨床上的應(yīng)用還比較少，本試驗(yàn)揭示了針刺麻醉對犬體內(nèi)應(yīng)激激素的調(diào)節(jié)作用機(jī)理，為針?biāo)帍?fù)合麻醉在寵物臨床上的應(yīng)用提供參考。本試驗(yàn)所選穴位為百會穴配關(guān)元俞穴。百會穴位于督脈的通路上屬會陽經(jīng)，任督二脈是陰陽大綱，統(tǒng)轄十二經(jīng)為“陽脈之海”。百會穴屬會陽經(jīng)，所以成為通經(jīng)調(diào)理氣血、舒通經(jīng)絡(luò)、安神鎮(zhèn)靜、協(xié)助諸穴的重要穴位。而關(guān)元俞穴位于后肢膀胱經(jīng)，又叫“氣穴”或“孔穴”，是動物經(jīng)絡(luò)臟腑之氣，輸經(jīng)傳于體表所在。兩者配穴針刺有較好的“調(diào)氣”、“治神”作用[6]。

本試驗(yàn)選用了2/3、1/2、1/3劑量的舒泰正常麻醉用量來復(fù)合針刺麻醉，并與單純使用針刺麻醉和單純使用正常劑量的舒泰麻醉作比較。5個組犬只在麻醉后行腹部切皮術(shù)時，犬均無疼痛反應(yīng)，說明這5組麻醉均已達(dá)到了麻醉的效果。

在本試驗(yàn)中，犬的OP含量在舒泰組、1/3針?biāo)幗M，1/2針?biāo)幗M，2/3針?biāo)幗M中均未表現(xiàn)出顯著性差異，而在針刺組中，OP含量在給藥后30 min升至頂峰，隨后降低到正常值，這說明針刺會促使OP含量升高。同時有研究表明手術(shù)過程中給予外源性O(shè)P類物質(zhì)可以減少臨床上的應(yīng)激反應(yīng)[7]。而本試驗(yàn)選用的麻醉劑舒泰為非OP類物質(zhì)[8]，故舒泰的用量不會造成犬體內(nèi)外源性O(shè)P的補(bǔ)充。而在針?biāo)帍?fù)合麻醉過程中，各組OP的含量在15～30 min電針刺激時均有不同程度的提升，說明針?biāo)帍?fù)合麻醉一定程度能降低手術(shù)過程中的應(yīng)激反應(yīng)。

犬在受環(huán)境變化、靜脈注射、采血以及手術(shù)傷害刺激等應(yīng)激因素影響時，交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)過度興奮，體內(nèi)的應(yīng)激激素皮質(zhì)醇水平會顯著升高[9]。在本次試驗(yàn)中，單純的藥物麻醉會使皮質(zhì)醇含量提升，而針刺麻醉和針?biāo)帍?fù)合麻醉則能使皮質(zhì)醇濃度較為穩(wěn)定。1/3針?biāo)幗M在45～75 min時，皮質(zhì)醇濃度突然顯著升高，這可能與試驗(yàn)過程中犬突然受到外源性刺激有關(guān)。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，針刺麻醉過程中，OP濃度顯著升高，皮質(zhì)醇濃度在OP濃度達(dá)到最高峰時顯著降低；而單純的藥物麻醉時，OP濃度無明顯變化，皮質(zhì)醇濃度偏高。針?biāo)帍?fù)合麻醉能使OP濃度有一定程度的升高，在OP濃度達(dá)到高峰時，皮質(zhì)醇濃度有所下降，說明針刺能刺激機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性O(shè)P。

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