練青平++宓國強(qiáng)++汪亞平++胡廷尖++李倩

摘要 觀察了不同氯化鈉濃度對(duì)美洲鰣魚精子活力的影響，結(jié)果表明：氯化鈉濃度為0～0.8%時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間無顯著差異。氯化鈉濃度為0.9%（生理鹽水）時(shí)，精子運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命最長(zhǎng)。氯化鈉濃度為1.0%時(shí)，精子活力受到抑制，運(yùn)動(dòng)能力和壽命下降。氯化鈉濃度為1.4%～4.2%時(shí)，精子呈不活動(dòng)狀態(tài)，并失去運(yùn)動(dòng)能力。

關(guān)鍵詞 美洲鰣魚；氯化鈉濃度；精子活力

中圖分類號(hào) S917 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2015）12-0256-02

Effects of Different NaCl Concentrations on Sperm Motility of Cultured Alosa sapidissima

LIAN Qing-ping 1 MI Guo-qiang 1 * WANG Ya-ping 2 HU Ting-jian 1 LI Qian 1

（1 Agriculture Ministry Key Laboratory of Healthy Freshwater Aquaculture，Key Laboratory of Freshwater Aquatic Animal Genetic and Breeding of Zhejiang Province，Zhejiang Institute of Freshwater Fisheries，Huzhou Zhejiang 313001； 2 Chunan Thousands of Fish Cage Farming Product Specialized Cooperative Society）

Abstract This study was designed to observe the impacts of some factors on the mobility of Alosa sapidissima in different NaCl concentrations. The results showed that there were no differences of the sperm to move swiftly in the NaCl concentration of 0～0.8% range. It was better for the sperm to move swiftly and had a longer life expectancy when the NaCl concentration was 0.9%. The sperm motility would be inhibited when the NaCl concentration was 1.0%，with a decline in capacity and life expectancy. There was no athletic ability of sperm in the NaCl concentration of 1.4%～4.2% range.

Key words Alosa sapidissima；NaCl concentration；sperm activity

美洲鰣魚（Alosa sapidissima），又名美國鰣魚、美洲西鯡，以肉質(zhì)細(xì)嫩、豐腴肥美著稱[1]。我國從美國引進(jìn)美洲鰣魚受精卵進(jìn)行孵化和種苗培育，并成功開展成魚的池塘、網(wǎng)箱和水泥池集約化養(yǎng)殖等方面的研究[2-13]，但關(guān)于該魚精子活力和持續(xù)時(shí)間上的研究尚未見報(bào)道。本文研究了不同氯化鈉濃度對(duì)美洲鰣魚精子活力的影響，對(duì)其精子運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命進(jìn)行了初步觀察，探討了美洲鰣魚精子的生理特性，旨在為美洲鰣魚人工繁殖生產(chǎn)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚的來源

2014年5月取自淳安千漁網(wǎng)箱養(yǎng)殖專業(yè)合作社的網(wǎng)箱養(yǎng)殖基地，選取3齡的成熟雄性美洲鰣，要求個(gè)體外表無傷且輕壓腹部有精液自動(dòng)流出的成熟雄魚。

1.2 溶液的配制

取氯化鈉（NaCl）分析純，按0%（去離子水）、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、0.9%（生理鹽水）、1.0%、1.4%、1.8%、2.2%、2.6%、3.0%、3.4%、3.8%、4.2%用去離子水配成不同濃度的溶液。

1.3 精液采集

采集精液時(shí)先用干毛巾擦干魚體生殖孔，輕壓腹部，用5 mL注射器吸取精液，精液要求無血、無水、無尿等污染，呈正常乳白色。

1.4 精子觀察

將干凈載玻片置于10×40倍顯微鏡下，用移液器吸取一滴氯化鈉溶液至載玻片上，調(diào)節(jié)顯微鏡，以解剖針尖挑取少許精液與載玻片上的氯化鈉溶液混合，同時(shí)開始計(jì)時(shí)并觀察精子的運(yùn)動(dòng)情況。

1.5 精子運(yùn)動(dòng)階段的劃分

參考蘇德學(xué)等[14]的方法，其運(yùn)動(dòng)狀態(tài)可分為快速運(yùn)動(dòng)、中速運(yùn)動(dòng)、慢速運(yùn)動(dòng)和顫動(dòng)4個(gè)連續(xù)階段，精子的壽命即為4個(gè)階段時(shí)間的總和。各個(gè)階段的劃分標(biāo)準(zhǔn)如下：①快速運(yùn)動(dòng)：運(yùn)動(dòng)速度快，看不清運(yùn)動(dòng)軌跡；②中速運(yùn)動(dòng)：運(yùn)動(dòng)速度較慢，能看清運(yùn)動(dòng)軌跡；③慢速運(yùn)動(dòng)：精子緩慢地從一處游向另一處；④顫動(dòng)：精子只在原地?fù)u動(dòng)，直至停止搖動(dòng)。視野中70%以上的精子從快速運(yùn)動(dòng)轉(zhuǎn)入中速運(yùn)動(dòng)，即認(rèn)為精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間結(jié)束，95%以上的精子停止顫動(dòng)，即認(rèn)為精子壽命終止。由于精子僅在快速運(yùn)動(dòng)時(shí)具有受精能力，因此該試驗(yàn)只計(jì)精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間和精子壽命。每個(gè)氯化鈉溶液濃度重復(fù)3次試驗(yàn)，結(jié)果取平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 氯化鈉溶液濃度對(duì)美洲鰣魚精子活力的影響

由表1可知，美洲鰣魚精子在不同濃度氯化鈉溶液（0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、0.9%、1.0%、1.4%）中快速運(yùn)動(dòng)平均時(shí)間分別為26、21、21、24、25、28、18、0 s；平均壽命為41、42、41、47、67、74、28、0 s?？梢姡诩兊?，美洲鰣精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間為26 s，當(dāng)氯化鈉濃度為0～0.8%時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間無顯著差異。當(dāng)氯化鈉濃度為0.8%時(shí)，精子壽命為67 s。當(dāng)氯化鈉濃度為0.9%（生理鹽水）時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間、壽命分別為28、74 s。當(dāng)氯化鈉濃度為1.0%時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間為18 s，壽命為28 s，精子運(yùn)動(dòng)活力和壽命下降。endprint

由圖1可知，氯化鈉濃度為0.9%時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命最長(zhǎng)，由此推測(cè)，該濃度可能最接近美洲鰣魚精子本身的滲透壓濃度。

2.2 美洲鰣魚精子的抑制

美洲鰣魚精子在1.4%～4.2%氯化鈉溶液中受到抑制，精子呈不活動(dòng)狀態(tài)，但是用吸管繼續(xù)向溶液中加一滴去離子水后精子可被激活。這是因?yàn)槿ルx子水稀釋了原來的氯化鈉溶液，即降低了溶液的滲透壓，使原先處于抑制狀態(tài)的精子被激活。

3 討論

（1）不同魚類精子激活的最適鹽度與其生態(tài)習(xí)性密切相關(guān)。美洲鰣魚精子在0.9%（生理鹽水）氯化鈉溶液中，快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命最長(zhǎng)，這與其自然產(chǎn)卵水域的鹽度相適應(yīng)，因?yàn)槊乐搛堲~為洄游性魚類，成魚在海洋中育肥，在其性腺發(fā)育成熟后，就向通海的淡水或者低鹽度的河流生殖洄游，并在淡水或者低鹽度的河流中產(chǎn)卵授精。不同種群魚類的精子對(duì)于氯化鈉溶液濃度適應(yīng)性也不同，如魏開金等[15]對(duì)中國鰣魚研究報(bào)道在0.5%氯化鈉溶液中鰣魚精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命最長(zhǎng)，在0.9%～3.4%氯化鈉溶液時(shí)鰣魚精子處于抑制狀態(tài)，半刺光唇魚精子在0.7%氯化鈉溶液中的平均壽命最長(zhǎng)[16]，寬口光唇魚精子在氯化鈉溶液為0.51%時(shí)壽命最長(zhǎng)[17]。

（2）魚類精子保存液要給精子提供一個(gè)良好的生存環(huán)境，主要防止精子被激活，而美洲鰣魚精子在1.4%～4.2%的氯化鈉溶液中受到抑制，精子呈不活動(dòng)狀態(tài)，故1.4%～4.2%的氯化鈉溶液可以作為美洲鰣魚精子臨時(shí)保存液。進(jìn)行美洲鰣魚人工授精時(shí)，可考慮0.9%（生理鹽水）氯化鈉溶液作為激活液，以延長(zhǎng)精子激烈運(yùn)動(dòng)狀態(tài)時(shí)間，提高受精率。

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