曹紅云 牛延菲 羅宗斌 游藏
摘要:目的探究干熱烘制和濕熱蒸煮制對(duì)珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量的影響。方法 采用直接烘干、蒸制和煮制后烘干對(duì)珠子參進(jìn)行炮制加工,以HPLC測(cè)定不同炮制品中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量。結(jié)果相比直接烘干,蒸制和煮制烘干的珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量有降低。結(jié)論直接干燥對(duì)珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量影響不大,該方法適合珠子參藥材的加工炮制。
關(guān)鍵詞:珠子參;炮制方法;竹節(jié)參皂苷Ⅳa
中圖分類號(hào):R283.1
文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A
文章編號(hào):1007-2349(2015)04-0066-03
珠子參又名珠兒參,扣子七,鈕子七。為五加科植物珠子參[ Pan,ax japonicus C.A.Mey.var. major( Burk.)C.Y.Wu etK.M.Feng]或羽葉三七[Pan,ax japonicus C.A.Mey.var.bipin-natifidus( Seem.)C.Y.Wu et K.M.Feng]的干燥根莖。主產(chǎn)于云南、四川、貴州、陜西、西藏等西部山區(qū)。具有補(bǔ)肺、養(yǎng)陰、活絡(luò)、止血等功效。用于陰氣兩虛、煩熱口渴、虛勞咳嗽、跌撲損傷、關(guān)節(jié)痹痛、咳血、吐血、崩漏、外傷出血等癥狀[1-2]?,F(xiàn)代研究表明,珠子參主要化學(xué)成分為皂苷、多糖、氨基酸和多種微量元素[3-5],其主要成分皂苷以齊墩果烷型三萜皂苷為主,具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜[6]、抗炎[7]、提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能[8]抗腫瘤[9]等活性。2010年版中國(guó)藥典中記載珠子參秋季采挖,直接干燥或蒸(煮)透后干燥可用,但民間藥農(nóng)多采用直接曬干后銷售使用。為了客觀的評(píng)價(jià)珠子參藥材的質(zhì)量,本實(shí)驗(yàn)采用低溫烘干和煮制、蒸制后烘干等加工方法炮制珠子參,研究不同加工炮制對(duì)珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量的影響,為珠子參質(zhì)量控制提供依據(jù)。1 儀器與試藥1.1 儀器及試液 Agilent 1100高效液相色譜儀;SK-3200LH型超聲清洗儀(180W,59kHz);AG285分析天平(梅特勒,瑞士);乙腈(色譜純,默克公司);其余為分析純;水為云南省藥物研究所自制超純水。1.2試藥 竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品(購(gòu)于中檢所,批號(hào):111861 - 201001)。藥材來自麗江珠子參基地。經(jīng)云南省藥物所究所天然藥物資源研究中心高麗正高級(jí)工程師鑒定為五加科植物人參屬珠子參Panax japonicus C,A.Mey.var.major( Burk)C.Y.Wu et K.M.Feng。2方法與結(jié)果2.1 色譜條件 色譜柱Waters XTerral C18,0.46×250 mm,5μm;流動(dòng)相乙腈-0. 2%磷酸(37:63);檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm;流速1.0 mL.min-1;進(jìn)樣量20μL;理論塔板數(shù)以竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰計(jì)算不低于3000。竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品HPLC圖見圖l。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品適量,加60%乙醇溶液配制成1.198 mg.mL-l的貯備液,待用。精密吸取2 mL于10 mL量瓶中,加60%乙醇至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。2.3供試品溶液的制備取藥材粉末(過2號(hào)篩)約0.1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入60%乙醇25 mL,稱定重量。超聲處理40 min,取出放冷,再稱定重量,加60%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液即得。2.4線性關(guān)系的考察分別精密吸取上述貯備液0.5,1,2,3,4,5mL,于10 mL量瓶中,加60%乙醇至刻度,搖勻,配制成0. 0599 ,0. 1198 ,0. 2396,0.3594,0.4792,0.5990 mg·mL-l的系列溶液,分別進(jìn)樣20μ L,測(cè)定峰面積,以竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),計(jì)算的回歸方程:Y=362. 28385X+9.03649(R=0.99998),線性范圍:1.198~11. 980μg,見圖2。2.5精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液,照2.1項(xiàng)下色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD0. 71%,結(jié)果表明本法精密度良好。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別于0、2、4、8、18、24 h內(nèi)進(jìn)樣,照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD l.43%,結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)峰面積穩(wěn)定。 2.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批號(hào)的樣品6份,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD l.47%,結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性。2.8加樣回收率分別精密稱取已測(cè)定含量的樣品6份(每份約0.5 g),精密加入竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品適量,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量,測(cè)得平均加樣回收率為102. 50%,RSD l.17%。3炮制品的制備
直接烘干珠子參三個(gè)不同地下部位,分別為大珠(直徑約為5~6 cm)、中珠(直徑約為2.5~3.5 cm)、小珠(直徑約1.5 cm),各自取新鮮藥材300 g置于40qC的烘箱中烘干,即得。
煮制烘干珠子參三個(gè)不同地下部位,分別為大珠、中珠和小珠,各自取新鮮藥材300 g三份,分別在沸水中煮沸5 min、10 min和15 min,濾去水分,置于40C的烘箱中烘干,即得。蒸制烘干珠子參三個(gè)不同地下部位,分別為大珠.中珠和小珠,各自取新鮮藥材300 g三份,分別在蒸籠中蒸制5 min、10 min和15 min,濾去水分,置于40C的烘箱中烘干,即得。4樣品含量測(cè)定
分別稱取不同加丁炮制的珠子參藥材粉末0.1 g,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μL,按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表1。5討論不同加工炮制方法對(duì)珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量有較明顯影響,從表1中結(jié)果可見,珠子參珠子越大,竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量越高;相比較直接烘干,煮制和蒸制后藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量都有不同程度下降,而且隨著煮制和蒸制時(shí)間的延長(zhǎng),珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量也有逐漸下降的趨勢(shì)。分析其主要原因可能是由于竹節(jié)參皂苷Ⅳa為熱敏感性成分,不耐高溫,在高溫下其成分結(jié)構(gòu)有一定的破壞,因而含量降低??傊?,不同炮制方法對(duì)珠子參化學(xué)成份的影響很大,為了提高有效藥物含量,選擇正確的炮制方法,研究其炮制前后化學(xué)成份變化、作用機(jī)制和原理是十分必要的。參考文獻(xiàn):[1]國(guó)家藥典委員會(huì)中華人民共和國(guó)藥典[S]一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:254.[2]趙仁,趙毅,等,珠子參研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2008,10(7):3-6.[3]王答祺,樊娟,李淑蓉,等羽葉三七根莖的三萜皂苷成分及其化學(xué)分類意義[J].云南植物研究,1988,10(1):101[4]池群,郭建文.珠子參的微量元素分析比較[J].西北藥學(xué)雜志,1993,8(2):61.[5]宋小妹,李林,楊光明,等不同產(chǎn)地珠子參竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量測(cè)定[J].中國(guó)中藥雜志,2010,35(7)885-887.[6]李巧云,趙恒,岳松健,等.大葉珠子參總皂苷的鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛作用研究[J].華西藥學(xué)雜志,1993,8(2):90.[7]賀海波,石孟瓊,陳濤,等,珠子參水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)報(bào),2010,32( 20):2224-2227.[8]陳濤,陳茂華,胡月琴,等.珠子參多糖抗肝癌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(6):1329-1331[9]陳濤,陳茂華,胡月琴,珠子參多糖提取及抗癌活性研究[J].中國(guó)中藥雜志,2010,35(7):912-914.(收稿日期:2014-10-10)