曹紅云 牛延菲 羅宗斌 游藏

摘要：目的探究干熱烘制和濕熱蒸煮制對(duì)珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量的影響。方法 采用直接烘干、蒸制和煮制后烘干對(duì)珠子參進(jìn)行炮制加工，以HPLC測(cè)定不同炮制品中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量。結(jié)果相比直接烘干，蒸制和煮制烘干的珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量有降低。結(jié)論直接干燥對(duì)珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量影響不大，該方法適合珠子參藥材的加工炮制。

關(guān)鍵詞：珠子參；炮制方法；竹節(jié)參皂苷Ⅳa

中圖分類號(hào)：R283.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2015）04-0066-03

珠子參又名珠兒參，扣子七，鈕子七。為五加科植物珠子參[ Pan，ax japonicus C.A.Mey.var. major（ Burk.）C.Y.Wu etK.M.Feng]或羽葉三七[Pan，ax japonicus C.A.Mey.var.bipin-natifidus（ Seem.）C.Y.Wu et K.M.Feng]的干燥根莖。主產(chǎn)于云南、四川、貴州、陜西、西藏等西部山區(qū)。具有補(bǔ)肺、養(yǎng)陰、活絡(luò)、止血等功效。用于陰氣兩虛、煩熱口渴、虛勞咳嗽、跌撲損傷、關(guān)節(jié)痹痛、咳血、吐血、崩漏、外傷出血等癥狀[1-2]?，F(xiàn)代研究表明，珠子參主要化學(xué)成分為皂苷、多糖、氨基酸和多種微量元素[3-5]，其主要成分皂苷以齊墩果烷型三萜皂苷為主，具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜[6]、抗炎[7]、提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能[8]抗腫瘤[9]等活性。2010年版中國(guó)藥典中記載珠子參秋季采挖，直接干燥或蒸（煮）透后干燥可用，但民間藥農(nóng)多采用直接曬干后銷售使用。為了客觀的評(píng)價(jià)珠子參藥材的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用低溫烘干和煮制、蒸制后烘干等加工方法炮制珠子參，研究不同加工炮制對(duì)珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量的影響，為珠子參質(zhì)量控制提供依據(jù)。1 儀器與試藥1.1 儀器及試液 Agilent 1100高效液相色譜儀；SK-3200LH型超聲清洗儀（180W，59kHz）；AG285分析天平（梅特勒，瑞士）；乙腈（色譜純，默克公司）；其余為分析純；水為云南省藥物研究所自制超純水。1.2試藥 竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品（購(gòu)于中檢所，批號(hào)：111861 - 201001）。藥材來自麗江珠子參基地。經(jīng)云南省藥物所究所天然藥物資源研究中心高麗正高級(jí)工程師鑒定為五加科植物人參屬珠子參Panax japonicus C，A.Mey.var.major（ Burk）C.Y.Wu et K.M.Feng。2方法與結(jié)果2.1 色譜條件 色譜柱Waters XTerral C18，0.46×250 mm，5μm；流動(dòng)相乙腈-0. 2%磷酸（37：63）；檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm；流速1.0 mL.min-1；進(jìn)樣量20μL；理論塔板數(shù)以竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰計(jì)算不低于3000。竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品HPLC圖見圖l。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品適量，加60%乙醇溶液配制成1.198 mg.mL-l的貯備液，待用。精密吸取2 mL于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。2.3供試品溶液的制備取藥材粉末（過2號(hào)篩）約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，稱定重量。超聲處理40 min，取出放冷，再稱定重量，加60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。2.4線性關(guān)系的考察分別精密吸取上述貯備液0.5，1，2，3，4，5mL，于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，配制成0. 0599 ，0. 1198 ，0. 2396，0.3594，0.4792，0.5990 mg·mL-l的系列溶液，分別進(jìn)樣20μ L，測(cè)定峰面積，以竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，計(jì)算的回歸方程：Y=362. 28385X+9.03649（R=0.99998），線性范圍：1.198～11. 980μg，見圖2。2.5精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD0. 71%，結(jié)果表明本法精密度良好。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別于0、2、4、8、18、24 h內(nèi)進(jìn)樣，照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD l.43%，結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)峰面積穩(wěn)定。 2.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批號(hào)的樣品6份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD l.47%，結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性。2.8加樣回收率分別精密稱取已測(cè)定含量的樣品6份（每份約0.5 g），精密加入竹節(jié)參皂苷Ⅳa對(duì)照品適量，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量，測(cè)得平均加樣回收率為102. 50%，RSD l.17%。3炮制品的制備

直接烘干珠子參三個(gè)不同地下部位，分別為大珠（直徑約為5～6 cm）、中珠（直徑約為2.5～3.5 cm）、小珠（直徑約1.5 cm），各自取新鮮藥材300 g置于40qC的烘箱中烘干，即得。

煮制烘干珠子參三個(gè)不同地下部位，分別為大珠、中珠和小珠，各自取新鮮藥材300 g三份，分別在沸水中煮沸5 min、10 min和15 min，濾去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。蒸制烘干珠子參三個(gè)不同地下部位，分別為大珠.中珠和小珠，各自取新鮮藥材300 g三份，分別在蒸籠中蒸制5 min、10 min和15 min，濾去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。4樣品含量測(cè)定

分別稱取不同加丁炮制的珠子參藥材粉末0.1 g，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。5討論不同加工炮制方法對(duì)珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量有較明顯影響，從表1中結(jié)果可見，珠子參珠子越大，竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量越高；相比較直接烘干，煮制和蒸制后藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量都有不同程度下降，而且隨著煮制和蒸制時(shí)間的延長(zhǎng)，珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量也有逐漸下降的趨勢(shì)。分析其主要原因可能是由于竹節(jié)參皂苷Ⅳa為熱敏感性成分，不耐高溫，在高溫下其成分結(jié)構(gòu)有一定的破壞，因而含量降低?？傊?，不同炮制方法對(duì)珠子參化學(xué)成份的影響很大，為了提高有效藥物含量，選擇正確的炮制方法，研究其炮制前后化學(xué)成份變化、作用機(jī)制和原理是十分必要的。參考文獻(xiàn)：[1]國(guó)家藥典委員會(huì)中華人民共和國(guó)藥典[S]一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：254.[2]趙仁，趙毅，等，珠子參研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2008，10（7）：3-6.[3]王答祺，樊娟，李淑蓉，等羽葉三七根莖的三萜皂苷成分及其化學(xué)分類意義[J].云南植物研究，1988，10（1）：101[4]池群，郭建文.珠子參的微量元素分析比較[J].西北藥學(xué)雜志，1993，8（2）：61.[5]宋小妹，李林，楊光明，等不同產(chǎn)地珠子參竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量測(cè)定[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（7）885-887.[6]李巧云，趙恒，岳松健，等.大葉珠子參總皂苷的鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛作用研究[J].華西藥學(xué)雜志，1993，8（2）：90.[7]賀海波，石孟瓊，陳濤，等，珠子參水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)報(bào)，2010，32（ 20）：2224-2227.[8]陳濤，陳茂華，胡月琴，等.珠子參多糖抗肝癌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（6）：1329-1331[9]陳濤，陳茂華，胡月琴，珠子參多糖提取及抗癌活性研究[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（7）：912-914.（收稿日期：2014-10-10）