段衛(wèi)華，于佳慧，高秀梅（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193）

·中藥研究·

不同配比杜仲丸對SAMP6小鼠抗抑郁作用的研究*

段衛(wèi)華，于佳慧，高秀梅
（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193）

［目的］研究不同配比杜仲丸的抗抑郁作用。［方法］采用3月齡快速老化SAMP6小鼠及其同源正常對照SAMR1為研究對象，應(yīng)用杜仲丸、杜仲和續(xù)斷進(jìn)行治療12周。末次灌胃給藥1 h后，采用小鼠曠場實(shí)驗(yàn)（OFT）、小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）研究不同配比的杜仲丸的抗抑郁作用。［結(jié)果］在FST和TST中，杜仲丸低劑量組能顯著降低小鼠不動(dòng)時(shí)間（P＜0．05或P＜0．01）。［結(jié)論］杜仲丸具有一定的抗抑郁作用。

杜仲丸；抑郁癥；強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)；懸尾實(shí)驗(yàn)；SAMP6小鼠

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2015.01.11

抑郁癥是一種常見的精神疾患，以顯著持久的情感抑郁或心境改變?yōu)橹饕卣鳎郧榫w運(yùn)動(dòng)抑制、思維遲緩，常伴有注意力降低、記憶力減退等為主要臨床表現(xiàn)，甚至?xí)霈F(xiàn)自傷或自殺行為。隨著社會的快速發(fā)展，社會競爭日益加劇，工作生活壓力不斷增大，抑郁癥的發(fā)病率逐年增高，成為嚴(yán)重危害公眾健康的社會問題。中醫(yī)藥治療抑郁癥療效肯定，不良反應(yīng)較小，具有一定的優(yōu)勢。

杜仲丸始載于宋代陳自明撰寫的《校注婦人良方》，由杜仲、續(xù)斷各等分組成，具有補(bǔ)腎作用，是中醫(yī)臨床常用的補(bǔ)腎對藥。本文基于中醫(yī)“腎主生髓”的傳統(tǒng)理論，研究杜仲丸組成藥物杜仲、續(xù)斷不同配伍比例對快速老化小鼠SAMP6出現(xiàn)的抑郁行為的影響。

1　材料

1.1動(dòng)物SPF級3月齡SAMP6小鼠，正常同源對照SAMR1小鼠，雌雄各半，購自天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SAM鼠繁育屏障系統(tǒng)，合格證號：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（飼）字0004590。飼養(yǎng)環(huán)境終年維持室溫（23±2）℃，相對濕度55%～60%，換風(fēng)16次/h，12 h光照/12 h黑暗自動(dòng)控制循環(huán)光照。

1.2藥品杜仲、續(xù)斷購自安國市順全隆中藥材有限公司，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室張麗娟教授鑒定。杜仲、續(xù)斷生藥分別以10倍量70%乙醇回流提取2次，每次2 h，合并2次提取液濃縮，真空干燥得提取物。按照杜仲、續(xù)斷生藥量1∶1比例，按上述工藝制備杜仲丸提取物。

2　方法

2.1動(dòng)物分組與給藥清潔級3月齡快速老化骨質(zhì)疏松模型小鼠SAMP6 50只，正常同源對照小鼠SAMR1 10只，雌雄各半。SAMP6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為SAMP6組、杜仲丸高劑量組（生藥6g/kg，即杜仲、續(xù)斷生藥各用3 g/kg）、杜仲丸低劑量組（生藥3 g/kg，即杜仲、續(xù)斷生藥各用1.5 g/kg）、杜仲組（即只用杜仲生藥3 g/kg）、續(xù)斷組（即只用續(xù)斷生藥3 g/kg），SAMR1組和SAMP6組分別灌服蒸餾水，灌胃給藥12周。每周稱量1次體質(zhì)量，根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整給藥量。于末次給藥1 h后，進(jìn)行行為學(xué)測試。

2.2小鼠曠場實(shí)驗(yàn)（OFT）末次給藥1 h后，將單只小鼠放入箱內(nèi)底面中心，同時(shí)進(jìn)行攝像和計(jì)數(shù)。觀察4 min，兩位觀察者記錄小鼠穿格數(shù)和直立的次數(shù)，取平均值。每只鼠完成實(shí)驗(yàn)后須徹底清洗方箱內(nèi)壁及底面，以免上一只鼠遺留的信息干擾下次測試結(jié)果。

2.3小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）將單只小鼠在距尾尖約2 cm處用膠帶固定尾部，將其倒掛于箱中，注意避免形成機(jī)械性損傷。動(dòng)物行為視頻分析系統(tǒng)記錄6 min小鼠行為，計(jì)后4 min內(nèi)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間（不動(dòng)判斷標(biāo)準(zhǔn)為小鼠停止掙扎，靜止不動(dòng)，身體呈倒垂?fàn)顟B(tài)）。

2.4小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）將單只小鼠放入水深約10 cm，水溫（24±2）℃的燒杯中。動(dòng)物行為視頻分析系統(tǒng)記錄6 min小鼠游泳行為，計(jì)錄后4 min內(nèi)小鼠游泳的不動(dòng)時(shí)間（不動(dòng)判斷標(biāo)準(zhǔn)為小鼠停止掙扎，漂浮在水中，僅有微小的肢體活動(dòng)保持漂浮在水面）。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 18.0軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，符合正態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，符合偏態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，和SAMR1組小鼠相比，SAMP6組小鼠強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間顯著延長（P＜0.05）；與SAMP6組比較，杜仲丸低劑量組SAMP6小鼠的強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間顯著降低（P＜0.05）。見表1。

3.2小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，和SAMR1組小鼠相比，SAMP6組小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間顯著延長（P＜0.01）；和SAMP6組比，杜仲丸低劑量組和杜仲組SAMP6小鼠的懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間顯著降低（P＜0.01，P＜0.05）。見表1。

3.3小鼠曠場實(shí)驗(yàn)見表2。小鼠曠場實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，杜仲丸及其組成藥物對SAMP6小鼠自主活動(dòng)能力未見影響。

表1　杜仲丸對SAMP6小鼠強(qiáng)迫游泳、懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響（x±s）s

表2　杜仲丸對SAMP6小鼠曠場實(shí)驗(yàn)的影響（x±s）

4　討論

抑郁癥的機(jī)制復(fù)雜，涉及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其受體、神經(jīng)內(nèi)分泌、細(xì)胞分子等多種假說［1］。抑郁屬中醫(yī)學(xué)中“郁證”、“臟躁”、“百合病”、“癲狂”、“失眠”、“健忘”等多病證范疇。中醫(yī)辨證常分為肝郁脾虛、肝郁氣滯、腎陽不足、陰陽兩虛等多種證型，其中肝郁氣滯證的患者平均年齡最小而腎陽不足證患者平均年齡最大，且具差異性［2］?？梢娔I陽虛是抑郁癥常見證型之一，特別是老年抑郁癥發(fā)病的重要病機(jī)，甚至有學(xué)者認(rèn)為是核心病機(jī)［3-5］?！肚Ы鹨矸健吩疲骸叭四晡迨陨?，陽氣日衰，損與日至，心力漸退……萬事冷落，心無聊賴，健忘嗔怒，性情變異。”明確指出老年陽虛是產(chǎn)生消極、悲觀情緒的原因之一，陽主升動(dòng)，而抑郁癥的臨床表現(xiàn)多屬陽氣不足導(dǎo)致的升動(dòng)無力的表現(xiàn)。腎中藏一身之元陽，主生髓，虛則致髓海不足，元神失養(yǎng)，不能振奮精神而發(fā)病?！额愖C制裁》指出：“腎之精華上升于腦，精能生氣，氣能生神，神定氣清?！?/p>

補(bǔ)虛藥、安神藥等是中醫(yī)治療抑郁癥的常用藥物，其中補(bǔ)虛藥使用頻率最高［6］，通過增加單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平、對抗谷氨酸作用、保護(hù)神經(jīng)元等多途徑發(fā)揮抗抑郁、鎮(zhèn)靜作用［7-10］。杜仲、續(xù)斷是中醫(yī)臨床常用的補(bǔ)腎陽藥物。杜仲主要含有木脂素類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜類、黃酮類、多糖等，具有降血壓、抗骨質(zhì)疏松、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、鎮(zhèn)靜等藥理作用［11-12］。續(xù)斷中主要含有三萜及其苷類化合物、環(huán)烯醚萜苷類化合物、生物堿類化合物和揮發(fā)油類等化學(xué)成分［13］，具有抗骨質(zhì)疏松、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力等作用［14-16］。

抑郁癥動(dòng)物模型研究也較多，動(dòng)物模型建立主要包括改變生物學(xué)因素、社會心理因素及基因型等多種方法［17］，而SAMP6小鼠為自發(fā)的快速老化骨質(zhì)疏松模型。有學(xué)者對SAMP6小鼠行為學(xué)方面進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，SAMP6小鼠具有自發(fā)活動(dòng)增強(qiáng)、焦慮、抑郁等行為改變［18-19］。本實(shí)驗(yàn)中SAMP6小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間均顯著高于正常老化鼠SAMR1組，杜仲丸可以顯著降低SAMP6小鼠強(qiáng)迫游泳和小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間，具有抗抑郁作用，而單味使用的杜仲、續(xù)斷抗抑郁效果不明顯。本研究為進(jìn)一步研究杜仲丸的配伍及抗抑郁機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

［1］李苒，高杉，李琳，等.抑郁癥發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.天津中醫(yī)藥，2013，30（2）：121-125.

［2］鄭開梅，武成，薛蕾，等.抑郁癥中醫(yī)證候?qū)W臨床流行病學(xué)調(diào)查［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，25（3）：170-171.

［3］魚浚鏞，田金洲.基于中醫(yī)文獻(xiàn)的抑郁癥常見證候及證候要素分布特點(diǎn)的研究［J］.天津中醫(yī)藥，2012，29（3）：299-301.

［4］雷菊英，劉菊妍.淺談抑郁癥從腎論治［J］.四川中醫(yī)，2007，25（8）：26-27．

［5］江泳，江瑞云，陳建杉.論腎陽虛與抑郁癥發(fā)病的關(guān)聯(lián)性［J］.四川中醫(yī)，2009，27（8）：30-31.

［6］熊洪艷，秦竹，徐薇，等.抑郁癥現(xiàn)代治療方劑用藥特點(diǎn)淺析［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，31（6）：6-9.

［7］張敏，于春泉.交泰丸抗抑郁作用的研究進(jìn)展［J］.天津中醫(yī)藥，2012，29（1）：101-104.

［8］孫亞男，鄒憶懷，朱陵群.寧心解郁膠囊對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠Open-Field行為的影響［J］.天津中醫(yī)藥，2014，31（1）：42-46.

［9］趙啟鐸，舒樂新，王穎，等.酸棗仁總黃酮抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.天津中醫(yī)藥，2011，28（4）：335-337.

［10］呂玲玲，沈小珩，陳敬賢.中醫(yī)藥治療抑郁癥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（6）：75-77.

［11］杜紅巖.杜仲活性成分與藥理研究的新進(jìn)展［J］.經(jīng)濟(jì)研究，2003，21（2）：58-61.

［12］呂錦芳，邢麗，寧康健.杜仲對小鼠中樞鎮(zhèn)靜作用的影響［J］.中國中醫(yī)藥科技，2004，11（5）：294-296.

［13］吳帥，劉二偉，張祎，等.川續(xù)斷中化學(xué)成分的研究［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，29（3）：147-150.

［14］Niu Y，Li Y，Huang H，et al.Asperosaponin VI，a saponin component from Dipsacus asper wall，induces osteoblast differentiation through bone morphogenetic protein-2/p38 and extracellular signal-regulated kinase 1/2 pathway［J］. Phytother Res，2011，25（11）：1700-1706.

［15］何雪心，裘軍.續(xù)斷提取物對小鼠D-半乳糖擬癡呆模型的抗氧化作用［J］.中國藥師，2005，8（3）：185-187.

［16］鄢嘉，曾超，吳云霞，等.續(xù)斷總皂苷對阿爾茨海默病小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用［J］.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，31（3）：324-326.

［17］高杉，李苒.抑郁癥動(dòng)物模型及其評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)展［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，31（1）：57-60.

［18］Niimi K，Takahashi E，Itakura C.Emotional behavior and expression patterns of tyrosine hydroxylase and tryptophan hydroxylase in senescence-accelerated mouse（SAM）P6 mice［J］.Behavioural Brain Research，2008，188（2）：329-336.

［19］Niimi K，Takahashi E，Itakura C.Analysis of motor function and dopamine systems of SAMP6 mouse［J］.Physiol Behav，2009，96（3）：464-469.

Study on the antidepressant effect of Duzhongwan with different proportions

DUAN Wei-hua，YU Jia-hui，GAO Xiu-mei
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To study the antidepressant effect of Duzhongwan with different proportions．［Methods］Three months old SAMP6 mice and their normal control mice SAMR1 were enrolled in this study.The SAMP6 mice were treated with high and low dose of Duzhongwan，respectively，contrasting with Duzhong and Xuduan during 12 weeks.At 1h after the administration（ig），the open field test（OFT），the tail suspension test（TST）and the forced swimming test（FST）were used to observe the antidepressant effect of Duzhongwan with different proportions．［Results］The immobility time of SAMP6 mice in Duzhongwan low dose group could significantly reduce in FST and TST，compared with those in the control group（P＜0.05 or P＜0.01）.［Conclusion］The results suggested that Duzhongwan performed antidepressant effect.

Duzhongwan；depression；forced swimming test；tail suspension test；SAMP6 mice

R285.5

A

1673－9043（2015）01－0034-03

國家科技重大專項(xiàng)“孵化基地”項(xiàng)目（2013ZX094 01004）；天津市中醫(yī)藥管理局中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合科研項(xiàng)目（13109）。

段衛(wèi)華（1973-），博士，講師，主要從事中藥藥理研究。

高秀梅，E-mail：yanjiuyuanbangongshi@gmail.com。

（2014-08-24）