白榮

廣東華潤順峰藥業(yè)有限公司，廣東佛山 528300

從嚴(yán)格意義上講，無菌粉針劑應(yīng)完全不含有任何活的微生物，但由于目前檢驗手段的局限性，絕對無菌的概念不能適用于對整批產(chǎn)品的無菌性的評價。因此，目前評價整批產(chǎn)品質(zhì)量時所使用的‘無菌’概念，不是絕對無菌的概念，概率意義上的無菌保證，保證出現(xiàn)微生物污染的產(chǎn)品的概率存在于可以接受的極小概率之內(nèi)。這種概率意義上的無菌保證并非依賴于產(chǎn)品的最終檢驗，而是取決于生產(chǎn)過程中嚴(yán)格的GMP管理和全面質(zhì)量保證體系；消除、殺滅微生物的滅菌過程和在嚴(yán)格控制的潔凈條件下的無菌生產(chǎn)過程。是否可以證明并保證產(chǎn)品的無菌性，則是藥品生產(chǎn)企業(yè)所關(guān)心的重要問題，也是粉針劑生產(chǎn)工藝驗證的主要內(nèi)容。粉針劑生產(chǎn)驗證所涉及的內(nèi)容很多，無菌粉針分裝工藝的驗證是整個驗證工作中難度較大的驗證項目之一[1]。

我公司頭孢菌素粉針車間只有一條生產(chǎn)線，為了使模擬分裝試驗結(jié)果與實際生產(chǎn)狀況更接近，最大限度利用此生產(chǎn)線的產(chǎn)能，我們將模擬分裝試驗時間設(shè)定為16 h，設(shè)計驗證所涉及因素如下。

1 驗證基本信息

該次驗證以無菌乳糖進(jìn)行模擬分裝過程；16 h之內(nèi)完成15000瓶的生產(chǎn)量；規(guī)格：每瓶0.5 g乳糖加4 mL培養(yǎng)基。

2 驗證目的

（1）評估在既定無菌生產(chǎn)環(huán)境和過程控制條件下生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力。

（2）證明指定的無菌工藝設(shè)計和變更是否可行。

（3）證明無菌工藝過程中的相關(guān)操作是否可行。

（4）評估無菌操作人員的操作水平。

（5）證明符合CMP的要求。

（6）發(fā)現(xiàn)無菌工藝過程中潛在的微生物污染因素。

3 驗證前提

驗證前需明確空調(diào)系統(tǒng)、設(shè)備確認(rèn)、干熱、濕熱滅菌驗證等確認(rèn)完成之后再進(jìn)行工藝驗證，以避免其他因素對工藝驗證的干擾。

4 驗證范圍

頭孢粉針無菌分裝生產(chǎn)工藝驗證范圍主要從如下幾個方面進(jìn)行。

（1）生產(chǎn)工藝步驟（見表 1）。

（2）涉及的生產(chǎn)設(shè)備。全自動洗瓶機(jī)、滅菌隧道、氣流無菌灌裝機(jī)、全自動軋蓋機(jī)、全自動膠塞清洗機(jī)、貼標(biāo)機(jī)、燈檢機(jī)、脈動真空滅菌器、干熱滅菌柜。

（3）所涉及的所有介質(zhì)（如壓縮空氣、蒸汽等）。純蒸汽用于生產(chǎn)用具、無菌工作服濕熱滅菌。壓縮空氣用于膠塞清洗、西林瓶清洗、分裝設(shè)備定量器吹粉；因此驗證內(nèi)容應(yīng)包括：①壓力露點（干濕度）；②殘余含塵量（塵埃粒徑和濃度）；③殘余含油量（單位體積壓縮空氣含油量）[2]。

（4）工藝風(fēng)險分析及最差條件確認(rèn)。無菌分裝過程是無菌粉針生產(chǎn)風(fēng)險最大的暴露工序。按《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》2010修訂版附錄一[3]“無菌制劑：第四十七條無菌生產(chǎn)工藝的驗證應(yīng)當(dāng)包括培養(yǎng)基的模擬試驗。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性來選擇培養(yǎng)基。應(yīng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，并包括所有對結(jié)果有影響的關(guān)鍵生產(chǎn)工序。此外，還應(yīng)考慮正常生產(chǎn)中已出現(xiàn)過的各種偏差及最差情況”的要求，在無菌生產(chǎn)過程中，將無菌分裝過程控制（分裝時間、分裝間進(jìn)入人數(shù)控制、分裝速度）、干擾活動等產(chǎn)品直接暴露區(qū)域和有可能直接影響產(chǎn)品最終檢測結(jié)果的幾個點設(shè)定為最高風(fēng)險點。在驗證過程中的工藝條件選擇也應(yīng)選擇合理的“最差條件”，用最差條件來對整個工藝流程、設(shè)備和整個體系進(jìn)行挑戰(zhàn)，證明無菌保證的可靠性。

表1 工藝步驟及崗位描述

最差生產(chǎn)條件確認(rèn)首先應(yīng)考慮：

①無菌分裝時間：模擬正常批量生產(chǎn)所需要最長生產(chǎn)時間；按最大批量生產(chǎn)時間來計，每批生產(chǎn)時間應(yīng)不超過16 h（實際生產(chǎn)的分裝時間包括了模擬無菌分裝過程的故障處理時間，停頓及等待時間）。

②分裝速度及批量的確定：模擬分裝的批產(chǎn)量應(yīng)足夠大，總分裝量基于具體工藝的污染風(fēng)險足以保證評價無菌工藝過程的有效；因此設(shè)計驗證批產(chǎn)量為15 000瓶，設(shè)定總分裝時間為16小時；同時設(shè)定設(shè)備分裝速度為50瓶/min（設(shè)備正常分裝速度220瓶/min）；其目的是增加分裝過程中培養(yǎng)基的暴露時間，通過延長分裝時間和降低分裝速度，模擬生產(chǎn)全過程并根據(jù)結(jié)果進(jìn)行全面評估。

③無菌分裝間進(jìn)入人數(shù)的確定：應(yīng)根據(jù)分裝間面積、空調(diào)換氣次數(shù)確認(rèn)操作間所能允許進(jìn)入的最大限員數(shù)量。

④人為干預(yù)：干預(yù)包括正常的日常干擾和非正常干擾。主要需考慮以下幾個方面的因素：在生產(chǎn)前的準(zhǔn)備階段應(yīng)考慮人員進(jìn)入B級區(qū)、用具滅菌后和膠塞清洗后的轉(zhuǎn)運行為；分裝開始時應(yīng)考慮：生產(chǎn)前環(huán)境監(jiān)測人員的操作行為、分裝配件組裝、補(bǔ)充膠塞、裝量調(diào)試、環(huán)境監(jiān)測、維修動作、處理各種設(shè)備故障、打開隔離門處理倒瓶、爆瓶等行為的干擾。

（5）驗證組織及職責(zé)。應(yīng)明確驗證小組各成員的職責(zé)；一般由生產(chǎn)部門負(fù)責(zé)組織驗證、起草驗證方案、完成驗證方案的培訓(xùn)并負(fù)責(zé)完成驗證報告；質(zhì)量管理部門（QC）主要負(fù)責(zé)方案中檢驗部分的起草及相關(guān)工作。質(zhì)量管理部門（QA）主要負(fù)責(zé)組織QA對現(xiàn)場環(huán)境監(jiān)測及控制。GMP辦公室主要是驗證工作的協(xié)調(diào)和對驗證結(jié)果進(jìn)行審核及資料的歸檔。驗證方案由生產(chǎn)負(fù)責(zé)人進(jìn)行最后審核。質(zhì)量授權(quán)人負(fù)責(zé)報告的批準(zhǔn)。

（6）驗證方法。采用滅菌乳糖作為模擬分裝的無菌粉末，模擬無菌原料藥粉分裝過程進(jìn)行生產(chǎn)。分裝裝量為0.5 g/瓶，然后用蠕動泵每瓶加入約4 mL的無菌培養(yǎng)基。

（7）驗證中偏差處理和變更控制。驗證過程中如出現(xiàn)偏差和變更，應(yīng)對偏差和變更進(jìn)行詳細(xì)記錄，分析偏差產(chǎn)生的根本原因、進(jìn)行分析并提出解決方法。產(chǎn)生的偏差和變更得到有效處理后，將原始的偏差處理單和變更處理單附在驗證報告中。

（8）結(jié)果記錄與評估的方法。驗證記錄包括工藝參數(shù)和相關(guān)的監(jiān)測與檢驗記錄，記錄的填寫應(yīng)符合相關(guān)的文件要求。驗證所有涉及的記錄全部歸入驗證文件一起統(tǒng)一保存。驗證小組組長將結(jié)果進(jìn)行匯總、分析，評估驗證結(jié)果，寫明對此次驗證的明確的結(jié)論，完成驗證報告。

5 工藝操作要求

（1）按照培養(yǎng)基配制要求配制胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基，完成配制后將培養(yǎng)基121℃，連續(xù)30 min進(jìn)行濕熱滅菌。

（2）操作人員按照實際生產(chǎn)操作要求，清洗和滅菌西林瓶、膠塞；模擬最差生產(chǎn)條件，以50瓶/min的生產(chǎn)速度的分裝速度進(jìn)行分裝，分裝裝量為乳糖0.5 g/瓶，后用蠕動泵加入約4 mL的無菌培養(yǎng)基。灌裝后蓋塞軋蓋、目檢。分裝過程中應(yīng)完成培養(yǎng)基模擬分裝試驗陰性對照品的取樣。

（3）灌裝用無菌乳糖無菌確認(rèn)：灌裝結(jié)束前，用已滅菌的容器，從每桶無菌乳糖粉桶內(nèi)取無菌乳糖各取100 g，做清晰標(biāo)識標(biāo)示后送化驗室進(jìn)行無菌檢查。

（4）干擾設(shè)置：在生產(chǎn)過程中需進(jìn)行以下項目干擾動作的設(shè)計，干擾次數(shù)應(yīng)大于正常生產(chǎn)次數(shù)，且每名操作人員至少執(zhí)行1次以上的干擾動作。干擾項目設(shè)置：批量、分裝時間、分裝速度、無菌服有效期、模具、工器具有效期、滅菌膠塞有效期、分裝間最大生產(chǎn)人員數(shù)量控制（同時）、非崗位操作人員進(jìn)入、膠塞及用具滅菌后的無菌轉(zhuǎn)運、人員進(jìn)入B級區(qū)、生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測（浮游菌、沉降菌）、分裝配件組裝、裝量測試、維修人員故障排除、分裝過程的停頓、打開設(shè)備隔離門處理膠塞、瓶的堵塞和卡瓶、爆瓶、補(bǔ)充膠塞和瓶。

6 模擬分裝監(jiān)測及控制

6.1 人員的監(jiān)測及控制

（1）限制進(jìn)入模擬分裝現(xiàn)場的人員，每班只允許不超過分裝間驗證的人數(shù)在模擬分裝現(xiàn)場，每班次安排1人次進(jìn)行非崗位操作人員進(jìn)入干擾。

（2）為了減少由操作者在分裝過程中引起的無菌區(qū)污染，在模擬分裝試驗時對操作者的無菌服、手套、眼罩等部位的微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測。所有進(jìn)入無菌區(qū)域的人員，在最后一次離開無菌區(qū)時，需對操作人員進(jìn)行頭部、眼罩、左手、右手、前胸五個部位的微生物取樣。

6.2 壓縮空氣的監(jiān)測

為避免直接接觸藥粉壓縮空氣潔凈度的干擾，分裝驗證前須對潔凈壓縮空氣進(jìn)行：①壓力露點（干濕度）；②殘余含塵量（塵埃粒徑和濃度）；③殘余含油量（單位體積壓縮空氣含油量）[2]3項內(nèi)容的檢測，檢測結(jié)果必須符合要求。

6.3 潔凈區(qū)域的環(huán)境監(jiān)測

（1）塵埃粒子的監(jiān)控：從分裝配件組裝階段開始至分裝結(jié)束，對關(guān)鍵控制點（分裝、蓋塞）進(jìn)行全過程的塵埃粒子的在線監(jiān)控；監(jiān)測點應(yīng)包括：空瓶轉(zhuǎn)盤區(qū)、分裝區(qū)、蓋膠塞區(qū)、膠塞容器裝置區(qū)。

（2）沉降菌的監(jiān)控：從分裝配件組裝階段開始至分裝結(jié)束，對關(guān)鍵控制點（分裝、蓋塞、層流轉(zhuǎn)運車）進(jìn)行全過程的沉降菌的連續(xù)監(jiān)測。每個監(jiān)測點1 h更換1次培養(yǎng)皿，至分裝完成。

（3）浮游菌的監(jiān)控：分裝完成后對分裝機(jī)內(nèi)進(jìn)行浮游菌的監(jiān)測。

（4）設(shè)備表面微生物的監(jiān)控：模擬分裝結(jié)束后，對分裝機(jī)設(shè)備表面的關(guān)鍵部位進(jìn)行表面微生物取樣。

（5）壓差的監(jiān)控：從分裝配件組裝階段開始至分裝結(jié)束，每1 h記錄一次滅菌隧道、分裝機(jī)上壓差表讀數(shù)以及分裝間相對其他區(qū)域的壓差表讀數(shù)。

（6）溫濕度的監(jiān)控：模擬分裝前及結(jié)束后，分別記錄主要工作區(qū)域內(nèi)溫濕度。

7 微生物培養(yǎng)

評價無菌模擬分裝試驗結(jié)果的主要指標(biāo)之一就是微生物污染水平，發(fā)達(dá)國家GMP一般明確要求控制生產(chǎn)各步的微生物污染水平，尤其對無菌制劑，產(chǎn)品最終滅菌或除菌過濾前的微生物水平必須嚴(yán)格控制。而微生物的特點是在一定的環(huán)境條件下會迅速繁殖，數(shù)量急劇增加，而且空氣中存在的微生物能通過各種途徑污染已清潔的設(shè)備。因此，為防止污染或降低污染發(fā)生的概率，在無菌室設(shè)計時應(yīng)該注意提供方便有效的無菌室消毒條件，而且每個無菌粉針劑生產(chǎn)企業(yè)均應(yīng)指定其無菌模擬分裝驗證制度，以保證無菌粉針劑分裝工藝過程符合無菌粉針劑分裝要求[4]。微生物是無菌粉針分裝過程中影響粉針劑質(zhì)量的因素之一，微生物培養(yǎng)項目應(yīng)包括陰性對照試驗、陽性對照試驗、試驗樣品培養(yǎng)和微生物浸入試驗；在微生物侵入試驗（容器密封性試驗）中又包括：試驗樣品的制備、確認(rèn)培養(yǎng)基促菌生產(chǎn)能力的營養(yǎng)試驗、挑戰(zhàn)菌懸浮液的制備。最后進(jìn)行微生物侵入試驗結(jié)果評價。評價標(biāo)準(zhǔn)：所有的營養(yǎng)試驗都合格，陽性對照試驗合格，說明微生物侵入試驗成功，容器密封性能良好。若試驗組中有長菌，需記錄長菌的試樣數(shù)；檢查確認(rèn)是否為容器封口的缺損造成微生物侵入。采用拍照或及其他適當(dāng)方式詳細(xì)記錄將此原因剔除。如果任何挑戰(zhàn)試驗中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器密封系統(tǒng)挑戰(zhàn)試驗失敗。

8 無菌生產(chǎn)驗證結(jié)果分析及評價

根據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）無菌附錄第四十七條的規(guī)定，培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的目標(biāo)是零污染，應(yīng)遵循以下要求。

（1）灌裝數(shù)量超過10000支時：①有1支污染，需調(diào)查；②有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗證。

（2）發(fā)生任何微生物污染時，均應(yīng)當(dāng)進(jìn)行調(diào)查[5]。

9 再驗證周期

（1）每半年進(jìn)行1次，每次至少1批。無菌區(qū)工作人員至少每年參與1次培養(yǎng)基模擬分裝驗證。

（2）空氣凈化系統(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝出現(xiàn)重大變更后，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行再驗證。

（3）當(dāng)參與生產(chǎn)的主要操作人員出現(xiàn)變更后，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行再驗證。

（4）無菌實驗失敗，調(diào)查結(jié)論需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝試驗。

（5）環(huán)境監(jiān)測結(jié)果明顯異常，調(diào)查結(jié)論需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝試驗。

[1]石景曼，呂環(huán)哲，王民如.無菌粉針工藝驗證—培養(yǎng)基模擬灌裝[J].中國藥師，2011，14（6）：902-903.

[2]李歆.制藥企業(yè)設(shè)施設(shè)備GMP驗證方法與實務(wù)[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2012.

[3]《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》無菌藥品等5個附錄的公告無菌制劑附錄一[Z].

[4]陳娥，吳育利.粉針無菌分裝過程中影響粉針劑質(zhì)量的因素[J].海南醫(yī)學(xué),2012，23（18）：86-89.

[5]《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》無菌藥品等5個附錄的公告無菌制劑附錄一[Z].