李光等

摘要：對(duì)國(guó)內(nèi)外3種常用的比色法測(cè)定蕎麥茶中總黃酮含量進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法是蕎麥茶總黃酮含量測(cè)定的最適方法，該方法穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便。

關(guān)鍵詞：蕎麥茶；黃酮；比色法測(cè)定方法

中圖分類(lèi)號(hào)：Q946.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）15-3744-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.15.042

Abstract：In order to study measuring method of flavonoids in buckwheat tea， three of the most popular colorimetric methods are compared in this study. The results showed that the NaNO2-AlCl3-NaOH colorimetric method is the optimum method to measure flavonoids content of buckwheat tea. And this method was convenient， accurate， and reproducible.

Key words： buckwheat tea； flavonoids content； measuring method

黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)重要的天然有機(jī)化合物，是植物在長(zhǎng)期自然選擇過(guò)程中產(chǎn)生的一類(lèi)次生代謝產(chǎn)物。它能清除生物體內(nèi)的自由基，具有抗氧化作用[1]。近年來(lái)，隨著人類(lèi)對(duì)健康的關(guān)注度越來(lái)越高，以蕎麥為主要原料的保健品的開(kāi)發(fā)速度也越來(lái)越快，蕎麥茶、蕎麥饅頭、蕎麥餅干等[2]逐步出現(xiàn)在市場(chǎng)，其中由于蕎麥茶具有味道鮮美、儲(chǔ)存方便等優(yōu)點(diǎn)，深受人們的喜愛(ài)。

黃酮類(lèi)化合物在植物界中分布廣泛，它們常以游離態(tài)或與糖結(jié)合成苷的形式存在。目前已發(fā)現(xiàn)有6 000多種不同的黃酮類(lèi)化合物[3]，因此對(duì)植物中的黃酮含量進(jìn)行精確測(cè)量難度很大。但是黃酮類(lèi)化合物具有鄰二酚羥基或3，5位羥基結(jié)構(gòu)，可與鋁鹽、鉛鹽、鎂鹽等金屬鹽類(lèi)試劑反應(yīng)，生成有色絡(luò)合物，可用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定其含量。目前黃酮測(cè)定的分光光度法主要有NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法、AlCl3-KAc顯色法和NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法3種，本研究用這3種常用的比色法測(cè)定蕎麥茶總黃酮含量，以期確定最適于蕎麥茶中總黃酮含量測(cè)定的方法，為蕎麥的合理開(kāi)發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蕎麥茶購(gòu)自西昌市正中食品有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自貴州迪大生物有限公司（純度≥98.5%）；其他試劑為分析純。

DHG-90A（101AB）型干燥箱（上海索譜儀器有限公司）；UV-5300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析公司）；AR1140型電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）；WB-400型小型高速粉碎機(jī)（北京維博創(chuàng)機(jī)械設(shè)備有限公司）；TDL-5C型低速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；AKJY-20超純凈水機(jī)（艾柯儀器公司）；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗機(jī)（昆山超聲儀器有限公司）；PHS-3C型酸度計(jì)（上海虹儀儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 3種測(cè)定方法的波長(zhǎng)掃描 ①AlCl3-KAc顯色法。AlCl3-KAc顯色法參考文獻(xiàn)[4]，并稍作改動(dòng)。準(zhǔn)確吸取提取液1 mL，依次加入0.1 mol/L AlCl3 2 mL、1 mol/L KAc 3 mL，最終用甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，室溫下放置30 min。在4 000 r/min下離心10 min，在200～1 000 nm內(nèi)進(jìn)行掃描，根據(jù)最大吸收峰確定測(cè)定波長(zhǎng)。②NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法。NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法參照文獻(xiàn)[5]，并稍作改動(dòng)。準(zhǔn)確吸取提取液1 mL，依次加入2 mL去離子水、0.5 mL 5%NaNO2溶液混合，振蕩后放置6 min，加入0.5 mL 10% Al（NO3）3溶液，振蕩后放置6 min，然后加入2.5 mL 5% NaOH溶液，振蕩后放置15 min，最后用去離子水定容至9 mL，在200～1 000 nm內(nèi)進(jìn)行掃描，根據(jù)最大吸收峰確定測(cè)定波長(zhǎng)。③NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法。NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法參照文獻(xiàn)[6]，并稍作改動(dòng)。準(zhǔn)確吸取提取液1 mL，依次加入3 mL去離子水、0.3 mL 5% NaNO2溶液混合，振蕩后放置5 min，加入0.3 mL 10% AlCl3溶液，振蕩后放置6 min，然后加入2.5 mL 1 mol/L NaOH溶液，振蕩后用去離子水定容至10 mL，在200～1 000 nm內(nèi)進(jìn)行掃描，根據(jù)最大吸收峰確定測(cè)定波長(zhǎng)。

1.2.2 3種測(cè)定方法的穩(wěn)定性比較 樣品和對(duì)照品依次使用AlCl3-KAc顯色法、NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法、NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法加入試劑，進(jìn)行600 s的連續(xù)吸光度測(cè)定，試劑添加完畢后，進(jìn)行600 s的連續(xù)吸光度測(cè)定，測(cè)定間隔設(shè)定為0.5 s。對(duì)照品不添加顯色劑，其他試劑與樣品測(cè)定時(shí)添加的相同，將樣品在600 s的吸光度減去對(duì)照相應(yīng)的值，繪制3種測(cè)定方法在600 s內(nèi)吸光度變化曲線，并運(yùn)用SPSS 17.0對(duì)3種方法獲得的吸光度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)比3種方法的優(yōu)劣。

2 結(jié)果與分析

2.1 3種測(cè)定方法的波長(zhǎng)掃描結(jié)果

通過(guò)對(duì)3種測(cè)定方法進(jìn)行的波長(zhǎng)掃描（圖1-圖3），AlCl3-KAc顯色法、NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法、NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法最大吸收峰對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)分別為419、509、507 nm。endprint

2.2 3種測(cè)定方法的穩(wěn)定性比較

由圖4-圖6知，3種方法使用的對(duì)照品在600 s內(nèi)均較穩(wěn)定，獲得的吸光度變化較小，表明不添加顯色劑，其他試劑照常加入的對(duì)照方法是可靠的。將3種方法樣品吸光度減去相應(yīng)對(duì)照的吸光度獲得最終的測(cè)量值，由圖7可知，NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法在600 s內(nèi)吸光度的標(biāo)準(zhǔn)誤差、標(biāo)準(zhǔn)差、方差等指標(biāo)上均優(yōu)于其他兩種方法（表1），可見(jiàn)、蕎麥茶總黃酮含量測(cè)定最適方法為NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法。

3 小結(jié)與討論

用3種常用的黃酮測(cè)量分光光度法測(cè)定蕎麥茶中總黃酮，并進(jìn)行了3種方法的比較，結(jié)果表明，NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法是蕎麥茶總黃酮含量測(cè)量的最適方法，與此前報(bào)道[7]的AlCl3-KAC顯色法是金蕎麥葉總黃酮含量測(cè)定的最適方法差異較大，這可能的原因是兩個(gè)研究用到的材料分別為苦蕎麥和金蕎麥，這兩個(gè)材料所含的黃酮類(lèi)化合物種類(lèi)不同，同時(shí)蕎麥茶在加工過(guò)程中有部分黃酮類(lèi)化合物分解或者轉(zhuǎn)化，而剩下的蕎麥茶黃酮類(lèi)化合物比較適應(yīng)NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法的測(cè)量環(huán)境所致，至于蕎麥在加工成蕎麥茶后，蕎麥茶的黃酮類(lèi)化合物類(lèi)型的確定，需要進(jìn)一步的分離提純鑒定。

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