余中華等

摘要：為了探究駐馬店地區(qū)多殺性巴氏桿菌的耐藥情況和制定切實有效的治療方案，通過藥敏試驗，調(diào)查了規(guī)?；脠霭褪蠗U菌的耐藥情況，為巴氏桿菌的防控提供參考。

關(guān)鍵詞：兔；多殺性巴氏桿菌；分離鑒定；治療

中圖分類號：S858.291 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2015）07-0034-02

多殺性巴氏桿菌病（Pasteurella multocida，Pm）是兔養(yǎng)殖過程中一種常見的、危害性很大的呼吸道傳染病，又稱兔出血性敗血癥。2015年3月，駐馬店市遂平、平輿、上蔡、西平等縣養(yǎng)兔場（戶）出現(xiàn)大量病兔。病兔早期表現(xiàn)為鼻孔流出漿液性鼻液，后期轉(zhuǎn)為黏性至膿性分泌物，在鼻孔外側(cè)結(jié)痂。病情在一定區(qū)域傳播，發(fā)病率為34%，病死率達到81%。應(yīng)平輿縣某獺兔養(yǎng)殖場邀請，筆者對該場部分發(fā)病的獺兔進行了病原學(xué)檢查，從21份病料樣品中分離出多殺性巴氏桿菌，并采用20多種常用藥物進行藥敏試驗，旨在對兔多殺性巴氏桿菌的治療提供參考。

1 試驗材料

1.1 被檢病料

取自病死或瀕死病兔分泌物、血液、臟器組織等共21份病料。

1.2 培養(yǎng)基及主要試劑

普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，鮮血瓊脂培養(yǎng)基，血清營養(yǎng)肉湯，革蘭氏染液，生化試驗試劑。

1.3 儀器設(shè)備

顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、高壓滅菌鍋等儀器設(shè)備均由黃淮學(xué)院生物工程系實驗中心提供。

2 試驗方法

2.1 分離病原

從養(yǎng)殖場帶回患病獺兔，在實驗室無菌操作解剖取病料，置于生理鹽水中放到4 ℃冰箱中保存。

無菌取新鮮病料組織切片觸片，革蘭氏染色，鏡檢，可看到兩頭鈍圓的革蘭氏陰性桿菌。

在加血清的營養(yǎng)瓊脂上進行劃線分離，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，得到不同形狀菌株3株，再經(jīng)鏡檢，判斷該3株細菌為不同細菌，有3株形態(tài)與目標(biāo)菌株類似，定為疑似菌株，命名為BS-1、BS-2、BS-3。

2.2 細菌菌株純培養(yǎng)

挑取單個菌落在加入血清的營養(yǎng)肉湯中，37 ℃培養(yǎng)24 h，得到相應(yīng)的菌液，備用。

2.3 生化試驗

按照各生化試驗操作規(guī)程[1]，對純培養(yǎng)菌株進行觸酶試驗、氧化酶試驗、吲哚試驗、甲基紅試驗、V.P試驗、枸櫞酸鹽利用試驗、硫化氫試驗和糖發(fā)酵試驗等，得到這三株疑似細菌的生化性質(zhì)（表1）。從表1可知，這可疑菌株的生化性質(zhì)，根據(jù)《伯杰細菌鑒定手冊》（第九版）判斷：BS-2為多殺性巴氏桿菌。

2.4 藥敏試驗

利用藥敏紙片（杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品批號20141206）進行了三種菌的敏感藥物篩選。按藥敏試驗操作規(guī)程[2]進行操作后，37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。從表2可知，左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢噻呋鈉對3種細菌均為高度敏感；諾氟沙星、培氟沙星、大觀霉素對3種細菌均為低敏感。

3 討論

由于近年來抗生素藥物的濫用，多殺性巴氏桿菌對藥物的敏感性顯著改變，因此在臨床用藥時，經(jīng)常出現(xiàn)用藥效果不佳的現(xiàn)象，進而耽誤治療，對養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。

在本研究中，篩選出三種藥物，在對兔巴氏桿菌進行治療時，藥物選擇極為關(guān)鍵，通過相互搭配用藥可有效治療該病。獺兔在生長過程中頻繁使用同一種藥物容易導(dǎo)致耐藥性產(chǎn)生。在用藥時，應(yīng)科學(xué)用藥，先進行敏感藥物的篩選。在進行敏感藥物治療時，應(yīng)當(dāng)注意藥物的交替使用，避免同一種藥物頻繁使用，進而降低多殺性巴氏桿菌對某種藥物產(chǎn)生耐藥性的幾率。

參考文獻：

[1] 袁麗紅.微生物學(xué)實驗[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010，02.

[2] 吳艷.藥理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京：北京人民軍醫(yī)出版社，2004.endprint