馮輝等

摘要 建立了雞蛋中蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ殘留測定的高效液相色譜方法。樣品經(jīng)蘇丹紅專用SPE小柱凈化、濃縮，Waters SymmetryShield C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱進(jìn)行分離測定。本方法的檢測限為0.1 mg/kg，4種蘇丹紅染料在濃度1～1 000 mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈線性相關(guān)。在空白雞蛋中添加20～600 mg/kg濃度下，4種蘇丹紅的平均回收率為88.6%～101.0%，結(jié)果表明，該法簡單、靈敏、特異性強，縮短了分析時間，提高靈敏度，節(jié)約試劑，降低成本，適用于雞蛋中蘇丹紅染料殘留的測定。

關(guān)鍵詞 雞蛋；蘇丹紅；固相萃??；高效液相色譜

中圖分類號 O652.63；TS207.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）14-0291-01

蘇丹紅屬偶氮系列染料，是一種有毒色素，并非食品添加劑，目前已確認(rèn)了其有機偶氮染料的毒性?！凹t心鴨蛋”事件之后，我國已經(jīng)重點監(jiān)測包括鮮雞蛋在內(nèi)的各類蛋制品，而蘇丹紅是其中一項重點檢測的內(nèi)容[1-5]。迄今為止，主要通過高效液相色譜法、GC-MS分析法檢測食品中蘇丹紅染料，《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法（GB/T 19681-2005）》主要適用于辣椒及其制品、香腸等肉制品中蘇丹紅染料的檢測。試驗結(jié)果顯示，雞蛋中4種蘇丹紅染料的回收率不理想，達(dá)不到雞蛋中蘇丹紅檢測的要求。因此，本研究旨在通過改善提取凈化條件，建立一種操作步驟簡單，同時提高雞蛋中4 種蘇丹紅染料回收率的液相色譜測定方法[1-3]。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 供試材料。試驗材料為雞蛋。

1.1.2 儀器與試劑。美國Waters 2695型液相色譜儀帶Waters2475型熒光檢測器，SC-8L-150型固相萃取儀，美國OA-SYS氮吹儀，德國IKA GENIUS 3漩渦混合器，上?？茖?dǎo)SK5200H超聲波清洗機，美國梅特勒-托利多ML204電子天平，德國賽多利斯超純水儀，上海安譜公司蘇丹紅專用SPE小柱（500 mg/6 mL）。德國DR.公司蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 標(biāo)準(zhǔn)品（99.6%）。二氯甲烷、正己烷、乙腈為色譜純。

1.2 試驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品配制。具體包括：①標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制。精密稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)品各0.100 g，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，配成1.00 mg/mL溶液[1-5]。4 ℃冰箱保存。②標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：根據(jù)需要準(zhǔn)確移取相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用水稀釋成1.0、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液[1-7]。

1.2.2 提取。稱取均勻試樣2 g（精確至0.001 g），加入3 mL正己烷漩渦混合10 s，待凈化。

1.2.3 凈化洗脫濃縮。蘇丹紅專用SPE小柱使用前依次用5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化。將待凈化液上樣到小柱上，然后再用2 mL正己烷潤洗樣品瓶，也上樣到柱上，保持1.0 mL/min流速過柱。用10 mL正己烷淋洗小柱，流出液棄去。用5 mL二氯甲烷洗脫小柱，收集洗脫液，40 ℃氮氣吹干，1 mL乙腈定容，超聲1 min，漩渦混合10 s，過0.22 μm親水PTTE針式濾器過濾，上機檢測[4-6]。

1.3 色譜條件

Waters SymmetryShield C18 色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫35 ℃，流動相為乙腈，流量1.0 mL/min，檢測波長485 nm，進(jìn)樣量10 μL[7-9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 固相萃取小柱的選擇

試驗比較了安譜蘇丹紅專用SPE小柱和人工填裝的中性氧化鋁柱。采用商業(yè)固相萃取柱，與自己填裝的氧化鋁柱相比，不需要進(jìn)行復(fù)雜的活度調(diào)節(jié)和活性測試，節(jié)省大量時間，穩(wěn)定性好，整個檢測操作時間不超過1 h，溶劑使用量少，回收率較高。標(biāo)準(zhǔn)品、空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)品圖譜如圖1所示。

2.2 流動相的確定

采用甲醇—水、乙腈—水、100%乙腈、100% 甲醇等作為流動相，經(jīng)過試驗比較，最后采用100%乙腈作為流動相。這是因為此條件下流動相配制簡單，分離效果較好，且保留時間適中。

2.3 未知樣品中蘇丹紅的含量測定

利用本方法對市售的10種樣品進(jìn)行檢測，由分析結(jié)果可知，蘇丹紅均未檢出。

2.4 檢出限、線性范圍、回收率和精密度

按3倍信噪比計算，方法的檢出限約為0.1 mg/kg。根據(jù)上述色譜條件對系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣分析，以峰面積定量，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積之間的線性回歸方程，如表1所示。取空白雞蛋樣品8份，按3個加標(biāo)水平加標(biāo)，按上述條件前處理和色譜條件上機測試，測定蘇丹紅的加標(biāo)回收率88.6%～101.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，精密度良好，滿足分析要求。

3 結(jié)論與討論

本方法采用成品商業(yè)固相萃取柱對雞蛋中蘇丹紅染料進(jìn)行凈化、提取，用高效液相色譜儀進(jìn)行測定，快速、準(zhǔn)確率高、簡便、重現(xiàn)性好，線性關(guān)系、精密度和準(zhǔn)確度均理想，能更好地滿足實驗室分析檢測，具有較高的實際應(yīng)用價值。

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