曹偉勝　陳少南　韋方銓　陳偉華　張鳳霞（廣東省肇慶市皮膚病醫(yī)院檢驗(yàn)科，肇慶526020）

458例包皮龜頭炎真菌感染檢測(cè)及藥敏試驗(yàn)

曹偉勝陳少南韋方銓陳偉華張鳳霞
（廣東省肇慶市皮膚病醫(yī)院檢驗(yàn)科，肇慶526020）

目的了解本地區(qū)包皮龜頭炎患者中真菌感染情況及對(duì)抗生素的敏感性。方法分別采用顯微鏡、科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基、法國(guó)梅里埃公司的ATB ID32C酵母菌鑒定卡和Rosco紙片擴(kuò)散法對(duì)包皮龜頭分泌物進(jìn)行直接鏡檢、念珠菌培養(yǎng)、菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果458例患者中153例直接鏡檢陽(yáng)性，培養(yǎng)分離出念珠菌共157株，念珠菌培養(yǎng)陽(yáng)性率為33．4%（153／458），其中白念珠菌116株，占73．9%（116／157），非白念珠菌41株，占26．1%（41／157）；120例對(duì)照組中有17例培養(yǎng)出念珠菌，陽(yáng)性率為14．2%（17／120），其中白念珠菌6株，占35．3%（6／17），非白念珠菌11株，占64．7%（11／17）。包皮龜頭炎患者組念珠菌的培養(yǎng)陽(yáng)性率和白念珠菌的比例均高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝16．95，χ2＝10．72，P均＜0．05）。157株致病菌株對(duì)制霉菌素和酮康唑的敏感率均＞90%，分別為97．5%和93．0%，對(duì)氟康唑敏感率為79．6%，而對(duì)特比萘芬敏感性最低，為33．8%。結(jié)論念珠菌感染是本地區(qū)包皮龜頭炎發(fā)病的重要因素，感染的致病菌種以白念珠菌為主，分離的致病性念珠菌對(duì)多烯類(lèi)藥物敏感率較高，對(duì)唑類(lèi)抗真菌藥有不同程度的交叉耐藥，不同菌型其藥敏譜存在差異。

包皮龜頭炎；真菌；念珠菌；藥敏試驗(yàn)

［Chin J Mycol，2015，10（2）：100?103］

包皮龜頭炎是臨床常見(jiàn)的多種因素所引起的男科疾病，隨著廣譜抗生素及皮質(zhì)激素的廣泛應(yīng)用和性傳播疾病的增加，近年來(lái)本病的發(fā)生有增多趨勢(shì)，尤其是感染因素所致的病例增多明顯，為了解肇慶地區(qū)包皮龜頭炎患者中真菌感染情況及抗生素的敏感性，更好地指導(dǎo)臨床合理用藥，我們于2013年4月～2014年8月間，分別采用顯微鏡、科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基、法國(guó)梅里埃公司的ATB ID32C酵母菌鑒定卡和Rosco紙片擴(kuò)散法對(duì)458例包皮龜頭炎患者分泌物進(jìn)行直接鏡檢、念珠菌培養(yǎng)、菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1　資料與方法

1．1資料

臨床資料兩組病例均選自本院2013年4月～2014年8月皮膚和性病科門(mén)診的就診者。458例包皮龜頭炎患者組：年齡18～63歲，平均29．5歲，病程3 d～6個(gè)月，平均1．2個(gè)月?；颊呓M入選標(biāo)準(zhǔn)：①1個(gè)月內(nèi)未系統(tǒng)用抗真菌藥、“糖皮質(zhì)激素”抗生素及免疫抑制劑。②1周內(nèi)未局部外用抗真菌藥。③患者有不同程度的龜頭及包皮紅斑、丘疹、分泌物、糜爛等，伴或不伴瘙癢癥狀。120例對(duì)照組：到皮膚科就診的其他非性傳播疾病患者，其包皮龜頭外觀正常，直接鏡檢未查見(jiàn)菌絲和／或芽生孢子。年齡18～58歲，平均27．3歲。兩組年齡構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

主要試劑和儀器顯微鏡（日本OLYMPUS公司，CX21?BIM）；科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基（上?？片敿挝⑸锛夹g(shù)有限公司）；ATB ID32C鑒定板（法國(guó)梅里埃公司）；改良的真菌藥敏平板培養(yǎng)基（杭州威晟生物科技有限公司）；Rosco紙片（廣州樂(lè)通泰生物科技公司）。恒溫培養(yǎng)箱（上海島韓實(shí)業(yè)有限公司）；ATB ID32C鑒定儀購(gòu)自法國(guó)梅里埃公司。

1．2方法

標(biāo)本采集用蘸取無(wú)菌生理鹽水的鈍刀刮取陰莖龜頭、冠狀溝或包皮處皮損鱗屑做直接鏡檢。將待檢標(biāo)本用10%KOH制片，如鏡檢見(jiàn)菌絲、假菌絲、大量出芽孢子，判為陽(yáng)性（認(rèn)定為致病性念珠菌），陰性結(jié)果連查3次才確定。對(duì)直接鏡檢陽(yáng)性的樣本進(jìn)行真菌培養(yǎng)，樣本接種于科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基于37℃溫箱中培養(yǎng)24～48 h。

分離培養(yǎng)與鑒定通過(guò)念珠菌在科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基呈現(xiàn)的顏色來(lái)進(jìn)行分型鑒定：綠色為白念珠菌；紫色為光滑念珠菌；粉紅色為克柔念珠菌；灰藍(lán)色為熱帶念珠菌；白色的為其他念珠菌。白色的菌落經(jīng)分離純化后接種到ATB ID32C鑒定條，用ATB Expression鑒定儀進(jìn)行鑒定。嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)判讀結(jié)果進(jìn)行鑒定。

藥敏試驗(yàn)將菌株接種液濃度先配制0．5 Mc? Fland菌懸液，再用生理鹽水1∶1稀釋；對(duì)于克柔念珠菌，先配制0．5 McFland菌懸液，再用生理鹽水1∶10稀釋。在接種前，平皿先置于37℃溫箱干燥20min，各吸取配好濃度的菌液0．5mL接種于一個(gè)9 cm的改良真菌藥敏平板培養(yǎng)基，涂布均勻，移液管吸走多余的菌液，然后將平皿放37℃溫箱干燥10min，平皿上貼Rosco藥敏紙片，37℃培養(yǎng)18～24 h后測(cè)量抑菌環(huán)的大小。Rosco紙片法真菌藥敏參考標(biāo)準(zhǔn)：制霉菌素（NYS）、伊曲康唑（IT）敏感≥15 mm，中敏10～14 mm，耐藥無(wú)抑菌環(huán)；氟康唑（FL）、酮康唑（KET）、嗌康唑（ECO）、咪康唑（MIC）、特比萘芬（TEB）敏感≥20 mm，中敏12～19 mm，耐藥≤11 mm。

標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株采用溫州康泰生物科技有限公司提供的白念珠菌ATCC64548。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 13．0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2．1兩組念珠菌培養(yǎng)檢出情況

458例包皮龜頭炎患者中有153例直接鏡檢查見(jiàn)念珠菌菌絲及芽生孢子，并培養(yǎng)分離出念珠菌共157株，其中有4例為混合感染，念珠菌培養(yǎng)陽(yáng)性率為33．4%（153／458）。120例對(duì)照組中有17例培養(yǎng)出念珠菌，陽(yáng)性率為14．2%（17／120）。包皮龜頭炎患者組念珠菌的培養(yǎng)陽(yáng)性率高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝16．95，P＜0．05）。

2．2兩組念珠菌菌種構(gòu)成情況

153例鏡檢陽(yáng)性的包皮龜頭炎患者中培養(yǎng)分離出的157株念珠菌以白念珠菌為主，占73．9%（116／157）；120例健康對(duì)照組分離培養(yǎng)出的17株白念珠菌則以非白念珠菌為主，占64．7%（11／17），其中以克柔念珠菌為主要菌種。包皮龜頭炎患者組白念珠菌的比例高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝10．72，P＜0．05）。詳見(jiàn)表1。

2．2藥敏試驗(yàn)結(jié)果

157株致病菌株對(duì)制霉菌素和酮康唑的敏感率均＞90．0%，分別為97．5%和93．0%，對(duì)氟康唑敏感率為79．6%，而對(duì)特比萘芬敏感性最低，為33．8%。見(jiàn)表2。

3　討　論

包皮龜頭炎是指龜頭和包皮黏膜的炎癥，是男性常見(jiàn)病。真菌性感染引起的包皮龜頭炎是由酵母樣真菌引起的一種常見(jiàn)生殖器感染性疾病。酵母樣真菌為人體正常寄生的菌群之一，屬于條件致病菌，當(dāng)體內(nèi)菌群失調(diào)或機(jī)體抵抗力下降時(shí)，酵母樣真菌大量生長(zhǎng)繁殖而發(fā)病。在臨床工作中判斷酵母樣真菌是否屬于致病真菌，則主要依據(jù)直接鏡檢結(jié)果來(lái)判斷，當(dāng)直接鏡檢見(jiàn)到由念珠菌形菌絲和側(cè)生芽生孢子組成的假菌絲體則歸為致病菌，本組研究結(jié)果顯示，458例包皮龜頭炎患者中有153例直接鏡檢查見(jiàn)念珠菌菌絲及芽生孢子，并培養(yǎng)分離出念珠菌共157株，說(shuō)明本組有153例患者念珠菌呈致病狀態(tài)；包皮龜頭炎患者組念珠菌的培養(yǎng)陽(yáng)性率（33．4%）高于健康對(duì)照組（14．2%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），表明念珠菌感染與包皮龜頭炎的發(fā)生有關(guān)，提示念珠菌感染是引起本地包皮龜頭炎的重要因素。本組458例包皮龜頭炎中念珠菌陽(yáng)性檢出率為33．4%（153／458），與國(guó)外有關(guān)報(bào)道念珠菌感染占所有包皮龜頭炎的1／3［1］的結(jié)果相近，但高于潘偉光等［2］報(bào)道的29．0%，低于李芃等［3］報(bào)道的40．0%和梁順容等［4］報(bào)道的40．32%。檢出結(jié)果不盡相同可能與病例選擇、診斷標(biāo)準(zhǔn)、地區(qū)差異等有關(guān)。

表1　兩組念珠菌菌種構(gòu)成比（%）Tab．1　The constituent rates of strains of candida between the two groups（%）

表2　6種菌種對(duì)抗真菌藥物的敏感率（%）Tab．2　Susceptibility rates of 6 species of candida to antifungal agents（%）

白念珠菌具有黏附素，利于侵入的酶，酵母相和菌絲相相互轉(zhuǎn)換及表型轉(zhuǎn)換等毒力因子，使白念珠菌更具黏附、侵入和致病性，成為生殖器念珠菌病的主要致病菌［5］。本研究結(jié)果顯示，鏡檢陽(yáng)性的包皮龜頭炎患者中培養(yǎng)分離出的157株念珠菌以白念珠菌為主，占73．9%；120例對(duì)照組分離培養(yǎng)出的17株念珠菌則以非白念珠菌為主，占64．7%，且以克柔念珠菌為優(yōu)勢(shì)菌。包皮龜頭炎患者組白念珠菌的比例（73．9%）高于健康對(duì)照組（35．3%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），提示白念珠菌是本地區(qū)真菌感染性包皮龜頭炎的主要病原菌，非白念珠菌則主要以寄生或帶菌狀態(tài)定植于健康男性包皮龜頭處而不表現(xiàn)出炎癥等臨床癥狀。值得注意的是，本研究也顯示，鏡檢陽(yáng)性的包皮龜頭炎患者中非白念珠菌占比達(dá)26．1%，其中以光滑念珠菌和熱帶念珠菌為主要菌種，患者中非白念珠菌占比略低于周祝安等［6］用相同方法檢測(cè)報(bào)道的31．3%，明顯高于李軍等［7］報(bào)道的9．68%，結(jié)果的不同可能與地區(qū)的差異有關(guān)，也可能提示非白念珠菌在包皮龜頭炎患者臨床檢出率有增多的趨勢(shì)，應(yīng)引起醫(yī)療工作者的重視。

隨著抗真菌藥物的臨床使用，一些真菌產(chǎn)生了不同程度的耐藥性，因此，真菌的體外藥敏試驗(yàn)對(duì)指導(dǎo)臨床治療尤為重要。本組藥敏結(jié)果顯示，分離菌株對(duì)制霉菌素和酮康唑的敏感率均＞90%，分別為97．5%和93．0%，對(duì)氟康唑敏感率為79．6%，對(duì)伊曲康唑、嗌康唑和咪康唑的敏感性較低，而對(duì)特比萘芬敏感性最低，為33．8%。研究結(jié)果表明，念珠菌屬對(duì)多烯類(lèi)藥物制霉菌素敏感率高，但副作用大，口服難吸收，價(jià)格貴，限制了臨床的使用，可作為部分頑固病例的首選用藥，此外，酮康唑?qū)Χ鄶?shù)菌珠有較高的敏感率，不失為較好的臨床治療真菌感染性包皮龜頭炎的藥物。本研究中分離菌株對(duì)部分唑類(lèi)抗菌藥物敏感性較低，可能與菌株產(chǎn)生誘導(dǎo)性耐藥有關(guān)［8］。由于唑類(lèi)抗真菌藥物具有抗菌譜廣、副作用小、口服生物利用度高等特點(diǎn)，目前臨床廣泛使用，但由于大量使用，耐藥株也隨之大量出現(xiàn)，從而出現(xiàn)誘導(dǎo)性耐藥。而且部分念珠菌同時(shí)對(duì)數(shù)種唑類(lèi)抗真菌藥物敏感中介，提示唑類(lèi)藥物間存在交叉耐藥現(xiàn)象。值得注意的是，在本研究中光滑念珠菌和克柔念珠菌對(duì)氟康唑敏感率均為0%，這可能與天然耐藥有關(guān)［9］。綜上所述，在臨床上應(yīng)重視對(duì)包皮龜頭炎患者進(jìn)行真菌檢測(cè)和藥敏試驗(yàn)，以便為治療提供可靠依據(jù)，提高治療效果，并有效控制和減少真菌耐藥性的產(chǎn)生。

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［9］徐英春，李若瑜，倪語(yǔ)星，等．如何正確理解抗真菌藥物體外敏感試驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床用藥的指導(dǎo)價(jià)值［J］．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，31（2）：128?132．

［本文編輯］施慧

Detection of fungal infection from 458 balanoposthitis patients and antibiotic susceptibility test

CAO Wei?sheng，CHEN Shao?nan，WEI Fang?quan，CHEN Wei?hua，ZHANG Feng?xia（Zhaoqing Hospital For Skin Disease and STDs，Zhaoqing 526020，China）

ObjectiveTo investigate the infection and antibiotic susceptibility of fungi in the patients with balanoposthitis in Zhaoqing area．MethodsMicroscopy，CHROM agar candida，ATB ID32C of France Bio?Merieux Company and Rosco Disk diffusion method were applied to examine and culture and identify candida strains and for yeast susceptibility testing．Results153 cases were positive fungal microscopy examination in 458 patients．There were 157 strains candida by culture and identify and the positive detec?tion rate was 33．4%．116 of 157 isolates（73．9%）were albicans，41 of 157 isolates（26．1%）were non?C．a(chǎn)lbicans．17 cases were cul?tured positive for candida in healthy control group and the positive detection rate was 14．2%．6 of 17 isolates（35．3%）were albicans，11 of 17 isolates（64．7%）were non?C．a(chǎn)lbicans．The detection rate of candida culture and the constituent rate of albicans in patient group were higher than those in healthy control group，the difference has statistical significance（χ2＝16．95，χ2＝10．72，P＜0．05）．The susceptibility rate of isolated pathogenic strain in nystatin and ketoconazole were all more than 90%，were 97．5%and 93．0%．The rate in fluconazole was 79．6%，while the lowest susceptibility rate was terbinafine（33．8%）．ConclusionCandida infection is the most important pathogenetic factor for balanoposthitis and the main species of pathogenetic yeasts is albicans in Zhaoqing area．Patho?genic candida have a higher drug susceptibility rate to polyene drugs and have different degree of cross resistance to azole drugs．There are differences among the antibiotic sensitivity spectrums of various candida．

balanoposthitis；fungi；Candida；susceptibility test

R 519．3

A

1673?3827（2015）10?0100?04

曹偉勝，男（漢族），本科，主管檢驗(yàn)師．E?mail：xiaojiu9＠163．com

2014?09?23