劉旭燕，張公信，田孟華，張昌飛，余顯倫，郭友剛，劉大會(huì)，3*

(1.昭通市天麻研究院，云南 昭通 657000；2.昭通市天麻特產(chǎn)局，云南 昭通 657000；3.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 藥用植物研究所，云南 昆明 650205)

不同等級(jí)昭通烏天麻與其他產(chǎn)地天麻的天麻素含量測(cè)定及比較△

劉旭燕1，張公信1，田孟華1，張昌飛1，余顯倫1，郭友剛2，劉大會(huì)2，3*

(1.昭通市天麻研究院，云南 昭通 657000；2.昭通市天麻特產(chǎn)局，云南 昭通 657000；3.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 藥用植物研究所，云南 昆明 650205)

目的：測(cè)定不同等級(jí)、不同產(chǎn)地天麻中天麻素的含量。方法：采用HPLC測(cè)定天麻中天麻素含量。Inert Sustain C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸(3∶97)；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫為室溫。結(jié)果：不同等級(jí)的烏天麻中，天麻等級(jí)越高天麻素含量越高。一等烏天麻中天麻素含量為0.82%，而四等烏天麻含量?jī)H為0.32%。而不同產(chǎn)地同一等級(jí)的紅天麻中天麻素含量差異較大。其中，安徽大別山天麻中天麻素含量最高，為0.94%；湖北宜昌、陜西洋縣兩個(gè)產(chǎn)地天麻中天麻素含量分別為0.66%、0.60%，云南麗江和大姚天麻中天麻素含量較低，僅為0.45%和0.44%。結(jié)論：不同的等級(jí)和不同的產(chǎn)地對(duì)天麻中天麻素的含量均有影響。

天麻；天麻素；HPLC法；含量測(cè)定

天麻(GastrodiaelataBl.)為蘭科植物，又名赤箭、離母、鬼督郵。依據(jù)天麻花及花莖顏色的不同可將栽培種天麻分為烏天麻、紅天麻、綠天麻、黃天麻4個(gè)變型[1]。其中，烏天麻花呈藍(lán)綠色、花莖灰棕色、帶白色縱條紋，主要分布在我國(guó)云南省東北部及西北部，貴州、四川、吉林的部分地區(qū)；紅天麻花呈橙紅色、淡黃、藍(lán)綠或黃白色，花莖赤色，主要在我國(guó)湖北、陜西、安徽等地種植。而烏天麻和紅天麻也是我國(guó)目前天麻的主要栽培種。天麻作為我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材，入藥已經(jīng)有2000多年的歷史。天麻氣微、味甘，其功能是平肝息風(fēng)止痙。在中醫(yī)中天麻主要用于治療頭痛眩暈、肢體麻木、小兒驚風(fēng)、癲癇抽搐等癥狀[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，天麻中的有效成分為天麻素。天麻素除對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有作用外，還可以有效的起到擴(kuò)張血管、降低血壓、改善微循環(huán)及增加機(jī)體缺血缺氧的作用[3]；另外，有研究表明天麻素具有增加機(jī)體免疫、促智抗衰老的作用[4]。因此，天麻中天麻素含量的高低是評(píng)價(jià)天麻質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)主要采用高效液相色譜法對(duì)不同等級(jí)云南昭通烏天麻和不同產(chǎn)地的紅天麻中天麻素進(jìn)行測(cè)定，為探尋不同等級(jí)及不同產(chǎn)地天麻與天麻素含量的相關(guān)性提供科學(xué)依據(jù)，并為昭通天麻的質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

不同等級(jí)云南昭通烏天麻來(lái)源于云南省昭通市彝良縣小草壩天麻種植基地。不同產(chǎn)地的紅天麻來(lái)源于昆明菊花村藥材市場(chǎng)。鮮天麻樣品經(jīng)清洗、高溫蒸至中間無(wú)白心、烘干、粉碎備用，具體操作參考袁崇文方法[5]，烘干后的天麻按照徐錦堂方法[6]，分為4個(gè)等級(jí)，天麻素對(duì)照品購(gòu)于山東省中藥化學(xué)對(duì)照品研究中心。乙腈為色譜純，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

島津LC-20AT型高效液相色譜儀(SPD-20A型紫外檢測(cè)器)，奧豪斯CP124C電子分析天平，上海一恒HWS28型水浴鍋，上海亞榮RE-3000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱為InertSustainC18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸(3∶97)，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣量10 μL。理論塔板數(shù)按照天麻素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取天麻素對(duì)照品適量，精密稱定，置于容量瓶中，用乙腈∶水(3∶97)溶解稀釋至刻度，搖勻，配制不同濃度梯度的對(duì)照品溶液，濃度依次為：12.5 μg·mL-1、25 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、250 μg·mL-1、500 μg·mL-1備用。

2.3 供試樣品溶液的制備

精密稱取樣品天麻粉末2 g，置具塞錐形瓶中，精確加入稀乙醇50 mL，稱重，加熱回流3 h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取濾液10 mL，濃縮至近干，殘?jiān)右译?水(3∶97)混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中。用乙腈-水(3∶97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取濾液，即得樣品溶液備用。實(shí)驗(yàn)用樣品編號(hào)見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)用樣品編號(hào)

2.4線性關(guān)系考察

將2.2中制備的不同濃度的對(duì)照品溶液(12.5、25、50、100、250、500 μg·mL-1)各取10 μL注入色譜儀，進(jìn)行測(cè)定。以天麻素峰面積Y對(duì)天麻素含量X進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程：Y=20 530.1X+9 345.87，r=0.999 9。依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，天麻素進(jìn)樣量在12.5～500 μg·mL-1之間，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。見(jiàn)圖1。

A：天麻素對(duì)照品HPLC圖(保留時(shí)間10.501為天麻素)；B：1號(hào)樣品HPLC圖(保留時(shí)間10.520為天麻素)。圖 1天麻素HPLC圖

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取樣品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，以天麻素的峰面積計(jì)算RSD為0.36%，以天麻素保留時(shí)間計(jì)算RSD為0.50%。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

吸取樣品供試液，分別于0、2、4、7、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖。以天麻素的峰面積計(jì)算RSD為0.43%，以天麻素保留時(shí)間計(jì)算RSD為0.89%。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

精確稱取天麻樣品2 g，共4份，分別精密加入天麻素對(duì)照品溶液(500 μg·mL-1)10 mL，按照供試品溶液方法處理，測(cè)定天麻素含量如表1。

表2 天麻藥材中天麻素回收率(n=4)

2.8 不同等級(jí)及不同產(chǎn)地樣品含量測(cè)定

精密稱取各樣品天麻粉末2 g，按2.3的方法制備成供試液，準(zhǔn)確吸取各樣品供試液10 μL注入色譜儀，進(jìn)行含量測(cè)定。

3 結(jié)果

3.1 不同等級(jí)云南昭通烏天麻中天麻素含量比較分析

實(shí)驗(yàn)測(cè)定了云南昭通4個(gè)不同等級(jí)烏天麻中的天麻素含量。其中，一等烏天麻中天麻素含量達(dá)到0.82%，二等、三等、四等(兩份樣品)烏天麻的天麻素含量分別為0.53%、0.41%、0.35%、0.32%(表3)。且一等烏天麻中天麻素含量是四等含量的2.56倍，其含量分別為另外3份烏天麻樣品中天麻素含量的1.55倍、2倍和2.34倍。同時(shí)，相鄰等級(jí)天麻中天麻素含量差異分別為0.29%、0.12%、0.06%和0.03%。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得，不同等級(jí)烏天麻中天麻素含量均有差異，且等級(jí)越高天麻素含量越高，而對(duì)相鄰等級(jí)烏天麻中天麻素含量的比較中發(fā)現(xiàn)，一等與二等間天麻素差異最為明顯，而等級(jí)內(nèi)不同天麻樣品中天麻素差異最小。

3.2 不同產(chǎn)地紅天麻中天麻素含量比較分析

實(shí)驗(yàn)測(cè)定5個(gè)不同產(chǎn)地一級(jí)紅天麻中天麻素的含量。結(jié)果表明，安徽大別山樣品中天麻素的含量最高，達(dá)0.94%，而云南大姚的樣品中天麻素含量最低，為0.44%，僅為安徽大別山樣品中含量的47%，陜西洋縣和湖北宜昌樣品中天麻素含量分別為0.60%和0.66%，兩者差異僅為0.06%。研究結(jié)果表明，安徽大別山所產(chǎn)紅天麻中天麻素產(chǎn)量明顯高于其他產(chǎn)地，陜西洋縣和湖北宜昌所產(chǎn)紅天麻中天麻素含量居中，云南麗江和大姚所產(chǎn)紅天麻中天麻素含量均較低。

表3 不同等級(jí)及產(chǎn)地天麻樣品中天麻素含量

4 討論

目前，天麻素是天麻的主要活性成分已被學(xué)者普遍認(rèn)可，國(guó)家藥典也把天麻素含量作為衡量天麻質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要參考指標(biāo)[7]。但是，由于天麻中還含有大量的淀粉、蛋白質(zhì)和多糖等成分，所以如何簡(jiǎn)單高效地提取天麻素一直是學(xué)者研究的重點(diǎn)。早在2004年吳春敏等用50%乙醇回流提取3 h，平均加樣回收率為97.1%，說(shuō)明天麻素提取充分。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)藥典(2010版)天麻素乙醇回流提取方法，平均加樣回收率95.1%與前人研究結(jié)果一致[8]。同時(shí)有研究者使用純水回流等方法提取天麻素[9]，加樣回收率都在90%以上。這些結(jié)果說(shuō)明雖然提取方法不同，但是各方法均達(dá)到要求。

云南昭通天麻雖為道地藥材，但由于天麻研究基礎(chǔ)薄弱，天麻質(zhì)量控制體系還尚未完全建立，嚴(yán)重影響了天麻產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。本研究首先對(duì)云南昭通不同等級(jí)烏天麻中天麻素含量進(jìn)行了測(cè)定，確定烏天麻等級(jí)越高天麻素含量越高，說(shuō)明天麻素含量與天麻等級(jí)有一定的相關(guān)性。且在相鄰等級(jí)烏天麻天麻素含量比較中發(fā)現(xiàn)，一等烏天麻中天麻素含量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于二等烏天麻含量，等級(jí)內(nèi)不同烏天麻樣品間天麻素含量相差最小。本研究將天麻的外觀等級(jí)與內(nèi)在天麻素含量建立了一定的相關(guān)性。除此之外，本研究還對(duì)不同產(chǎn)地紅天麻中天麻素含量進(jìn)行了測(cè)定，同為一級(jí)紅天麻樣品，來(lái)自于安徽大別山區(qū)樣品天麻素含量最高，湖北宜昌和陜西洋縣的天麻中天麻素含量差距不大，分別為0.66%和0.60%，而云南麗江和大姚紅天麻中天麻素含量較低，分別為0.45%和0.44%。這說(shuō)明不同產(chǎn)地對(duì)天麻中的天麻素含量有一定的影響。天麻在我國(guó)的藥材市場(chǎng)中占有重要地位，因此天麻的質(zhì)量控制一直是我們中藥研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。本研究不僅從外觀等級(jí)與天麻素含量對(duì)各等級(jí)天麻樣品進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)，同時(shí)也調(diào)查了國(guó)內(nèi)天麻主要道地產(chǎn)區(qū)紅天麻中天麻素的含量，本研究結(jié)果為進(jìn)一步建立完善的天麻質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供了一定的依據(jù)。

[1] 周鉉，陳心啟.國(guó)產(chǎn)天麻屬植物的整理[J].云南植物研究，1983，5(4)：361-368.

[2] 趙嵐，蔡際群.天麻等復(fù)方中藥對(duì)遺傳性震顛大鼠癲癇小發(fā)作的作用[J].遼寧藥物與臨床，2003，6(2)：68-69.

[3] 趙智強(qiáng)，王靖，全亞萍，等.天麻鉤藤飲對(duì)肝陽(yáng)上抗證高血壓患者降壓的臨床藥效動(dòng)力學(xué)研究[J].中藥藥理與臨床，2000，16(3)：38-39.

[4] 楊世林，蘭進(jìn)，徐錦堂.天麻的研究進(jìn)展[J].中草藥，2000，31(1)：66-69.

[5] 袁崇文，劉智，袁玉清，等.中國(guó)天麻[M].貴州科技出版社，2002.

[6] 徐錦堂，中國(guó)天麻栽培學(xué)[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1993.

[7] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：54.

[8] 吳春敏，陳海濱.天麻中天麻素含量測(cè)定方法的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2004，29(12)：1157-1159.

[9] 徐頂巧，周建軍，劉益紅.天麻中天麻素提取檢測(cè)方法研究[J].中藥材，2012，35(11)：1799-1804.

DeterminationofGastrodineinRhizomaGastrodiaeofDifferentGradesandOrgins

LIU Xuyan1，ZHANGGongxin1，TIANMenghua1，ZHANGChangfei1，YUXianlun1，GUOYougang2，LIUDahui2，3

(1.ZhaotongTianmaResearchInstitute，Zhaotong657000，China；2.ZhaotongTianmaSpecialtyBureau，Zhaotong657000，China；3.InstituteofMedicinalPlants，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，Kunming650205，China)

Objective：To determine gastrodine content inRhizomagastrodiaeof different grades origins.Methods：Inert Sustain C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used.The mobile phase consisted of acetonitrile and 0.05% phosphoric acid with isocratic elution .The flow was 1.0 mL·min-1.The detective wavelength was 220 nm.Column temperature was room temperature.Results：The cotnent of gastrodine obtained the good linear correlation with different grades ofGastrodiaelataf.glauca.The results showed the highest content of gastrodin inG.elataf.glaucawas 0.82%，and the lowest was only 0.32%.In addition，our research analyzed the content of gastrodin in the same grade ofG.elataf.elatawhich were from different habitats’ regions.The results indicated significant difference between five habitats’ regions.The highest content of gastrodin in sample from Dabie Mountain Anhui province was 0.94%.The content of gastrodin were 0.66% and 0.60% for the samples from Hubei province and Shanxi province，respectively.The gastrodin content ofG.elataf.elatafrom Lijiang and Dayao，Yunnan province were only 0.45% and 0.44%，respectively.Conclusion：Both different grades and habitats’ regions have effect on the content of gastrodin inRhizomagastrodiae.

Rhizomagastrodiae；gastrodin；HPLC；Determination of content

2014-07-30)

國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2013BAK13B04)；云南省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2012CG022)

*

劉大會(huì)，Tel：(0871)65033441；E-mail：juhuacha2007@sohu.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.009