陳寶芳，劉政波，畢研文，仉勁

(泰安市農(nóng)業(yè)科學研究院，山東 泰安 271000)

品種及生長年限對泰山四葉參多糖含量的影響△

陳寶芳*，劉政波，畢研文，仉勁

(泰安市農(nóng)業(yè)科學研究院，山東 泰安 271000)

目的：研究品種及生長年限對泰山四葉參多糖含量的影響。方法：采用苯酚-硫酸法測定多糖含量，以葡萄糖為對照品，測定波長490 nm。結果：泰參2號1～4年生多糖含量分別為10.28%、14.24%、12.77%、11.27%；泰參3號1～4年生多糖含量分別為10.95%、12.85%、14.13%、13.06%。結論：泰山四葉參不同品種多糖含量有差異，泰山2號及3號兩品種多糖含量皆高于對照泰參1號。生長年限對泰山四葉參品種多糖含量的影響表現(xiàn)為：生長期1～2年或1～3年隨生長年限延長多糖含量逐年增加，2～3年生多糖含量達到高峰，3年以后則表現(xiàn)下降趨勢。

泰山四葉參；品種；生長年限；多糖含量

四葉參codonopsislanceolatabenth.et hook.F.系桔?？艭ampanulaceae黨參屬Codonopsis多年生藤蔓草本植物，又名輪葉黨參、羊乳，泰安當?shù)厮追Q泰山四葉參[1]。以根入藥，有清熱解毒、祛痰鎮(zhèn)咳、強壯滋補的作用，浸泡白酒，常飲能舒筋活血 健身補氣，被譽為“泰山之寶”[2]?，F(xiàn)代藥理研究泰山四葉參具有較好的抗氧化能力和降血糖作用[3-6]。多糖類是構成生命的基本物質，中草藥植物中的多糖更是當前藥物研究熱點之一[7]。四葉參根中含豐富的多糖類成分[8]，王德才等[9-12]對四葉參多糖提取及含量測定進行了研究，目前涉及四葉參不同品種的多糖含量測定與比較未見報道。本試驗參考文獻[9-12]方法，采用苯酚-硫酸法測定泰山四葉參3個品種1～4年生根的多糖含量，為今后確定泰山四葉參的合理采收時間及質量評價標準的建立提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材來源

1.1.1 藥材來源 四葉參采自泰安市農(nóng)業(yè)科學研究院育種基地育成品種泰參2號、泰參3號(雜交種)，泰參1號為對照品種，參試品種均采用生長1～4年的四葉參鮮根，收獲時間2013年10月30日。采集樣本首先洗凈，晾干表面水分。臺式調節(jié)式切片機(型號DXQ-130B)切片、電熱恒溫鼓風干燥箱(型號DHG-9143B5-111)在80 ℃下烘干降至水分含量10%稱重，粉碎后過4號篩冷藏備用。

1.1.2 試劑與儀器 葡萄糖標準品(山東齊都藥業(yè)有限公司，純度≥98%)；精制泰山四葉參多糖(本實驗室自制)；其余試劑均為國產(chǎn)分析純；島津UV-2450型紫外可見分光光度計；RE-5205型旋轉蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；JAl2003B型電子分析天平(上海精天儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 泰山四葉參多糖的提取與精制 稱取泰山四葉參粗粉80 g，加4倍量石油醚回流脫脂2次，每次2 h；濾渣加4倍量80%乙醇回流提取2次，每次2 h。經(jīng)脫脂、醇提后的濾渣在60 ℃烘干，分別加6、5、4倍量蒸餾水在沸水浴中浸提3次，每次3 h，合并濾液，減壓濃縮至400 mL左右。以每100 mL濃縮液加50 mL氯仿正丁醇(4∶1)液，劇烈振蕩30 min，靜止過夜，以4000 rpm·min-1離心12 min，去除下層氯仿及中層變性蛋白，取上部水層再重復去蛋白操作，至無明顯中層為止。收集去蛋白后的上部水層，旋轉蒸發(fā)減壓濃縮至150 ml左右，加無水乙醇至溶液含醇量達80%，靜置過夜，以4000 rpm·min-1離心12 min，收集沉淀物，再依次用無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌各2次。沉淀物置60 ℃真空干燥箱中干燥，即得精制多糖17 g。

1.2.2 葡萄糖標準溶液的配制 精密稱取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖對照品100 mg，加適量水溶解，轉移至100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，配成1 mg·mL-1葡萄糖標準液備用。

1.2.3 5%苯酚溶液的配制 取密封完好的無色的苯酚10 g，加蒸餾水200 mL溶解，置棕色瓶內放冰箱備用。

1.2.4 標準曲線的制作 分別吸取葡萄糖標準液10、20、40、60、80、100 μL置于大試管中，各補加蒸餾水至2.0 mL，葡萄糖濃度分別為5、10、20、30、40、50 μg·mL-1，然后各加入5%苯酚溶液1 mL，緩慢沿壁加濃硫酸5 mL，混勻，放置5 min后，再沸水浴加熱15 min，流水冷卻至室溫，在波長490 nm處測定吸光度。以蒸餾水代替葡萄糖溶液作空白對照。結果表明，葡萄糖濃度在5～50 μg·mL-1范圍內，吸光度與濃度具有良好的線性關系。以濃度(C，μg·mL-1)為縱坐標，吸光度(A)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=0.014 9X-0.008 5，r=0.998 6。

1.2.5 換算因子的測定 精密稱取干燥至恒重的精制泰山四葉參多糖35 mg，置100 mL容量瓶中加蒸餾水，定容至刻度，作為多糖儲備液。精密吸取多糖儲備液0.2 mL 3份，按標準曲線制作方法測定其吸光度。經(jīng)測定，3份多糖儲備液的吸光度分別為0.628、0.627、0.641，平均0.632，從回歸方程中求出多糖液中折合葡萄糖的濃度為85.97 μg·mL-1。按下式計算換算因子，測得F=0.407 1。

F=W/C·D(W為多糖的重量/μg，C為多糖液中折合葡萄糖的濃度/μg·mL-1，D為稀釋因素)

1.2.6泰山四葉參多糖含量的測定 精密稱取3份泰山四葉參粉末各0.5 g，分別置圓底燒瓶中加80%乙醇150 mL回流提取3 h，趁熱抽濾，濾渣用80%乙醇洗滌3次。然后濾渣連同濾紙置燒瓶中，加蒸餾水150 mL沸水浴加熱提取3 h，趁熱抽濾，用熱水洗滌燒瓶和濾渣，洗液并入提取液中，待冷后轉移于250 mL容量瓶中，補加蒸餾水定容至刻度，如此制作樣品溶液3份，置冰箱中備用。

精密吸取樣品溶液0.15 mL，按標準曲線制作方法測定其吸光度。每份樣品溶液重復操作3次，取平均吸光度。3份樣品溶液的平均吸光度分別為0.335，0.334，0.333，平均0.334。從回歸方程中求出樣品溶液中折合試管中葡萄糖濃度為45.97 μg·mL-1。按下式計算泰山四葉參中多糖的百分含量。

多糖含量(%)=C·D·F/W×100%(W為四葉參樣品的重量/μg，C為樣品液中折合葡萄糖的濃度/μg·mL-1，D為稀釋因素)

2 實驗結果與分析

2.1 葡萄糖含量標準曲線

不同生長年限四葉參多糖含量由圖1可知，得到的葡萄糖含量標準曲線回歸方程為：Y=0.014 9X-0.008 5，r=0.998 6，在波長490 nm處測定吸光度。以濃度(C)為縱坐標，吸光度(A)為橫坐標，制備標準曲線，結果表明，葡萄糖濃度在5～50 μg·mL-1范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

表1 四葉參不同濃度下的吸光度

圖1 葡萄糖含量標準曲線

2.2 不同品種相同生長年限泰山四葉參多糖含量及差異性分析

從表2結果與分析看出，1年生泰山四葉參多糖含量比較，泰參3號>泰參2號>泰參1號，泰參3號與對照差異顯著；2年生泰山四葉參多糖含量比較，泰參2號>泰參3號>泰參1號，泰參2號多糖含量達到高峰，與對照差異極顯著；3年生泰山四葉參多糖含量排序為，泰參3號>泰參2號>泰參1號，三品種之間比較差異達極顯著水平。4年生泰山四葉參品種間多糖含量比較，位序與3年生相似，不同點是泰參3號多糖含量下降幅度小于泰參2號。相同生長年限的泰山四葉參品種間多糖含量比較結果表明，泰參2號以2年生質量為佳，泰參3號以3年生品質為佳。

2.3 生長年限對泰山四葉參品種多糖含量的影響及多重比較

表3、圖2為不同生長年限泰山四葉參品種的多糖含量比較，分析表明，泰參2號、泰參1號1～2年生根多糖含量隨生長年限而增加，2年生多糖積累達到高峰，與其它年限之間比較達極顯著水平，3～4年生隨生長期延長多糖積累表現(xiàn)下降，兩品種的多糖積累趨勢相同。泰參3號1～3年生根多糖含量隨生長年限而增加，3年生根多糖含量最高，與

表2 泰山四葉參不同品種相同生長年限多糖含量及分析

1～2年生根多糖含量比較達極顯著水平，4年生多糖含量表現(xiàn)下降趨勢。其多糖積累趨勢與其它兩品種不盡一致，可能與泰參3號為雜交種有關。綜合分析表明，三品種的多糖含量以2～3年生的較高，3年以上多糖含量降低。提示泰山四葉參藥材若以多糖為利用目的，種植2～3年即可。

表3 同一品種不同生長年限泰山四葉參多糖含量及分析

圖2 1～4年生泰山四葉參不同品種多糖含量差異

3 結論與討論

采用苯酚-硫酸法測定泰山四葉參多糖含量，葡萄糖濃度在5～50 μg·mL-1范圍內與吸光度呈良好線性關系。結果表明，泰山四葉參品種之間多糖含量有一定差別。本研究結論與孫磊等[13]不同丹參品種酚酸B含量存在差異結論一致。

本實驗首次測定分析了泰山四葉參不同品種的多糖含量，結果表明，泰山四葉參三品種的多糖含量以泰參2號，泰參3號品種較高。泰山四葉參連續(xù)生長3年或3年以上多糖含量開始下降，與周茂金[14-15]2～4年生四葉參多糖含量逐年增加的結論有所不同，可能與品種特性、產(chǎn)地、生態(tài)環(huán)境、生長年限、采收季節(jié)、藥材質量有較大變化有關，具體原因尚待研究。

多糖是泰山四葉參主要成分之一，具有免疫藥理活性，在實際應用中建議以多糖含量作為評價四葉參藥材的質量標準，與傳統(tǒng)黨參質量評價標準相符[16]。

本研究中，4年生及以上四葉參田間生長勢變弱，根肥大但表皮粗糙，質地疏松，甚至有空心和爛心。因此選擇合適的品種及適時采收是泰山四葉參藥材質量控制的重要環(huán)節(jié)。

栽培上應根據(jù)四葉參藥材品質與產(chǎn)量并重的雙重指標，合理確定采收期，建議泰山四葉參栽培年限以2～3年生為佳。

[1] 陳寶芳，畢研文，楊永恒，等.泰山四葉參新品種泰參2號的選育[J].中國現(xiàn)代中藥，2013，15(12)：1075-1077 .

[2] 孫世杰，徐莉.多糖類對免疫系統(tǒng)的作用研究[J].長春中醫(yī)學學報，2000，16(1)：62-62.

[3] 陳小燕，高澤立.多糖的研究的影響[J].胃腸病學和肝病學雜志，2006，15(5)：540-543.

[4] 張峰，張繼國，高永峰 .四葉參多糖對糖尿病小鼠血糖及抗脂質過氧化作用的影響[J].泰山醫(yī)學院學報，2010，31(12)：911-913.

[5] 張翠，賈法玲 .泰山四葉參對小鼠肺癌的作用及機制初探[J].泰山學院學報，2011，3：98-10.

[6] 王德才，高麗君，高艷 .泰山四葉參多糖體外抗氧化活性的研究[J].中國生化藥物雜志，2008，2：104-106.

[7] 王德才，邱玉玉，張顯忠，等 .泰山四葉參多糖對幼年小鼠和免疫抑制小鼠的免疫調節(jié)作用.[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，11：110-112.

[8] 劉利娥，徐衛(wèi)河，于斐，等.大別山野生四葉參營養(yǎng)成分分析[J].河南工業(yè)大學學報(自然科學版)，2007，28(4)：121-124.

[9] 張翠，衛(wèi)成峰.泰山四葉參多糖的提取、含量測定及抗氧化活性研究[J] .泰山學院學報，2010，32(3)：114-118.

[10] 王德才，李同德，高麗君.泰山四葉參多糖的提取及含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19(10)：2434-2435.

[11] 徐凌川人工栽培泰山白首烏藥材總多糖含量測定[J].山東中醫(yī)雜志，2008，27(3)：193-195.

[12] 周茂金；王莉；蘇美英，等不同生長年限泰山四葉參中多糖的含量測定[J].中國藥房，2010.21(35)：3327-3328.

[13] 孫磊，陳靖，王晶，等.不同品種丹參中酚酸B含量比較[J].寧夏醫(yī)科大學學報，2010，32(6)：733-755.

[14] 劉偉，劉建華，周潔，等.不同生長年限對丹參品種活性成分含量的影響[J].中國現(xiàn)代中藥，2012，14(11)：37-41.

[15] 李正國，于立佐.不同采收期山東產(chǎn)丹參脂溶性成分含量變化的研究[J].齊魯藥事，2007，26(7)：401-402.

[16] 畢紅艷，蘇曉敬，張麗萍.黨參不同種質資源間多糖含量的差異[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40(2)：714-715，718.

EffectsofVarietiesandGrowthYearsonPolysaccharideContentofCodonopsislanceolata

CHEN Baofang*，LIUZhengbo，BIYanwen，ZHANGJin

(TaianAcademyofAgriculturalSciences，Taian271000，China)

Objective：To study the effects of varieties and growth years on polysaccharide content ofCodonopsislanceolata.Methods：The content of polysaccharide was determined by the phenol-sulfuric method and the detection wavelength was 490nm.The glucose was taking as standard for the determination.Results：The content of polysaccharide was 10.28%，14.24%，12.77% and 11.27% for Tai Shen 2 and 10.95%，12.85%，14.13%，13.06% for Tai Shen 3 of different growth years from 1 to 4 years old.Conclusion：There were significant differences in the polysaccharide content ofC.lanceolataof different varieties and growth years.The contents of polysaccharide for Tai Shan 2 and Tai Shan 3 were higher than that of Tai Shan 1.UP to 3 years of growth stage，polysaccharide content in plant were increased with the increasing years of planting，and then the content will be decreased as the increasing years.

CodonopsislanceolataBenth.et Hook.F；Variety；Growth years；Polysaccharide content

2014-09-01)

泰山四葉參新品種選育及加工利用(201340629)

*

陳寶芳，高級農(nóng)藝師，研究方向：中草藥育種與質量評價；Tel：(0538)8515961，E-mail：chenbaofangts@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.011