覃華亮，韋怡

(1.廣西壯族自治區(qū)柳州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 柳州 545006；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011)

HPLC測定蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈的含量

覃華亮1，韋怡2*

(1.廣西壯族自治區(qū)柳州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 柳州 545006；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011)

目的：建立蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈含量的測定方法。方法：采用Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.015 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH 6.7)(70∶30)，流速為0.8 mL·min-1，檢測波長為289 nm，柱溫為35 ℃。結(jié)果：紫堇靈進(jìn)樣量在0.141 5～0.377 3 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 6)；平均回收率為98.49%(n=6)，RSD=0.45%。結(jié)論：該方法簡便準(zhǔn)確，分離度高，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈的含量測定。

蒲地藍(lán)消炎片；紫堇靈；高效液相色譜法；含量測定

蒲地藍(lán)消炎片由黃芩、蒲公英、苦地丁、板藍(lán)根組成，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》(第三冊)，具有清熱解毒，抗炎消腫的功效，用于癤腫、腮腺炎、咽炎、淋巴腺炎、扁桃腺炎等[1]。紫堇靈是苦地丁中的有效成分之一，具有鎮(zhèn)靜、抗鉤端螺旋體及肝損傷保護(hù)作用[2-3]。查閱相關(guān)文獻(xiàn)[4-10]，并沒有關(guān)于蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈含量測定方法的報(bào)道，為了更好地控制藥品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法對蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈含量進(jìn)行測定，并考察了該方法的準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

1.1儀器

LC-2010A高效液相色譜儀、紫外可見波長檢測器(日本島津)，LC Solution色譜工作站，UV-2450紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；Mettler Xp26微量電子分析天平(瑞士梅特勒公司，精密度：百萬分之一)；Mettler AE-200電子分析天平(瑞士梅特勒公司，精密度：萬分之一)；AS7240BT超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

1.2試藥

紫堇靈對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111734-200601)；蒲地藍(lán)消炎片(廣東心寶制藥有限公司，批號：20140105，20131201，20130905)；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取紫堇靈對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.235 8 mg·mL-1的對照品儲備液，備用。精密吸取上述儲備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為23.58 μg·mL-1的對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取重量差異下的樣品，研細(xì)，精密稱定1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 色譜條件

Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.015 mol·mL-1磷酸鹽緩沖液(pH6.7)(70∶30)；流速為0.80 mL·min-1；檢測波長為289 nm；柱溫為35 ℃；進(jìn)樣量為20 μL。理論板數(shù)按紫堇靈峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對照品溶液6、8、10、12、14、16 μL，注入色譜儀中，測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=1.451×106X+6.042×103，r=0.999 8。結(jié)果表明，紫堇靈在0.141 5～0.377 3 μg具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.1項(xiàng)下對照品溶液10 μL，按2.3色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，在相同條件下測定，得紫堇靈峰面積的RSD=0.81%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液(批號：20140105)，分別在室溫放置0，6，12，18，24 h后進(jìn)樣10 μL分析，測定紫堇靈的峰面積，所得峰面積的RSD=0.62%(n=6)。結(jié)果表明，供試品溶液室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品(批號：20140105)，按2.2方法制備6份供試品溶液，按2.3色譜條件下進(jìn)樣20 μL，測定峰面積，計(jì)算紫堇靈平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.21 mg·g-1，RSD=0.93%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8 專屬性試驗(yàn)

取按蒲地藍(lán)消炎片處方比例和工藝制成的缺苦地丁的陰性對照品適量，精密稱取1.0 g，按2.2方法制備成缺苦地丁的陰性對照溶液，按2.3色譜條件測定，結(jié)果表明處方中其他成分對紫堇靈的測定無干擾，見圖1。

A.紫堇靈對照品；B.供試品；C.缺苦地丁的陰性樣品；1.紫堇靈。圖1 蒲地藍(lán)消炎片及對照品HPLC圖

2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取6份已知含量的供試品(批號：20140105，含紫堇靈0.21 mg·g-1)，各0.50 g，分別精密加入2.1紫堇靈對照品儲備液0.5 mL，按上述制備方法及色譜條件操作，結(jié)果見表1。

表1 蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈加樣回收率試驗(yàn)

注：紫堇靈對照品加入量均為0.117 9 mg。

2.10 蒲地藍(lán)消炎片樣品的測定

取3批蒲地藍(lán)消炎片樣品(批號：20140105，20131201，20130905)，測定紫堇靈的含量，每一批樣品按2.2方法制備3份供試品溶液，按上述方法進(jìn)樣分析，結(jié)果見表2。

表2 蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈的測定(n=3) mg/片

3 討論

在初試驗(yàn)時，采用《中國藥典》2010版一部中苦地丁含量測定項(xiàng)下的流動相和檢測波長檢測樣品中紫堇靈的含量[11]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紫堇靈出峰的峰形好，基線平穩(wěn)，柱效高，保留時間適中，達(dá)到良好的分離效果，由此確定色譜條件。

紫堇靈為異喹啉類生物堿，易溶于三氯甲烷、丙酮等有機(jī)溶劑。筆者分別考察了以甲醇、丙酮、三氯甲烷為溶劑的提取效率，其中甲醇提取最為完全。提取方法考察了加熱回流和超聲提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加熱回流提取所得成分較多，導(dǎo)致干擾峰數(shù)量多、面積大，而紫堇靈含量相對較低，無法對紫堇靈峰進(jìn)行準(zhǔn)確積分，最終選用超聲法進(jìn)行提取。提取方法確定后，分別考察了10，20，30，40，60 min的超聲提取，結(jié)果表明30 min以后，樣品中紫堇靈的含量不再提高，因此確定提取時間為30 min。

有研究表明[12]，目前市場上不同產(chǎn)地的苦地丁所含紫堇靈的差異很大，選用不同產(chǎn)地的苦地丁投料，必然會影響到蒲地藍(lán)消炎片的質(zhì)量。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中，除檢查項(xiàng)外，無鑒別及含量測定項(xiàng)目，無法較好地控制藥品質(zhì)量。本文采用高效液相色譜法測定蒲地藍(lán)消炎片中的紫堇靈含量，樣品處理簡單，方法快速準(zhǔn)確，對其質(zhì)量控制具有一定的參考價(jià)值。

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑 [S].第三冊.1991：187.

[2] 魏懷玲，劉耕陶.紫堇靈、乙酰紫堇靈及原阿片堿對小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1997，32(5)：331.

[3] 鄭建芳，秦民堅(jiān)，鄭昱，等.苦地丁生物堿的化學(xué)成分[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38(2)：112.

[4] 黃閣，趙懷清，李發(fā)美.RP-HPLC法測定苦地丁及其復(fù)方制劑中紫堇靈的含量[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，18(6)：419.

[5] 徐曉瑩，李寶明，何麗一.苦地丁中異喹琳生物堿的反相離子對高效液相色譜分析法[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1994，29(10)：785.

[6] 李凱，逯海龍.蒲地藍(lán)消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34(8)：859.

[7] 劉德勝，呂青志，張曉帆，等.HPLC法對不同蒲地藍(lán)消炎制劑中綠原酸和咖啡酸含量的測定[J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，35(1)：51.

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[9] 曹兵，胡春雪，熊葉紅，等.蒲地藍(lán)消炎片質(zhì)量控制方法研究[J].大理學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，7(8)：4.

[10] 邵禮梅，王云龍，李延雪.高效液相色譜法測定蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷與黃芩素含量[J].中國藥業(yè)，2012，21(4)：37.

[11] 國家藥典委員會.中國藥典 [S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：187.

[12] 黃閣，楊紅娟，李發(fā)美.苦地丁中紫堇靈和乙酰紫堇靈的制備和HPLC測定[J].中國中藥雜志，2003，28(4)：346.

DeterminationofCorynolineinPudilanAnti-InflammatoryTabletbyHPLC

TAN Hualiang1，WEIYi2*

(1.LiuzhouInstituteforFoodandDrugControl，Liuzhou545006，China；2.RuikangHospitalAffiliatedtoGuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530011，China)

Objective：To establish an HPLC method to determine the content of corynoline in Pudilan Anti-Inflammatory tablet.Methods：The Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column was used.The mobile phase consisted of methanol -0.015 mol·L-1phosphate buffered solution(pH 6.7)(70∶30 for volume)at flow rate of 0.8 mL·min-1.The detection wavelength was 289 nm and the column temperature was 35 ℃.Results：The calibration curve was in good linearity within the range of 0.141 5-0.377 3 μg(r=0.999 8，n=6).The average recovery was 98.49%，and the RSD was 0.45%(n=6).Conclusion：This method is simple，accurate，high separation degree，strong specificity and good repeatability，which can be used for determining the content of corynoline in Pudilan Anti-Inflammatory tablet.

Pudilan Anti-Inflammatory tablet；Corynoline；HPLC；Content determination

2014-04-29)

*

韋怡，講師，研究方向：中醫(yī)臨床及教學(xué)；E-mail：65653067@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.015