金鵬飛　譚　操　毛平花　王　芳

PTEN蛋白在膀胱移行細(xì)胞腫瘤中的表達及臨床意義

金鵬飛譚操毛平花王芳

目的 分析PTEN蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌（BTCC）、腺性膀胱炎（CG）及正常膀胱黏膜組織中的表達特點及臨床意義。方法 收集膀胱黏膜組織病理標(biāo)本，其中膀胱癌51例，CG 42例，正常膀胱黏膜組織10例。采用S-P免疫組化法，檢測PTEN蛋白在相應(yīng)的膀胱黏膜組織石蠟切片中的表達特點。結(jié)果 PTEN蛋白在BTCC及CG組織表達的陽性率分別是58.82%、80.95%，而10例正常膀胱黏膜組織PTEN全呈陽性表達，三組比較總體有顯著性差異（P＜0.01）；BTCC組與CG組及正常膀胱黏膜組比較均有顯著性差異（P均＜0.05），而CG組與正常膀胱黏膜組間無差異（P＜0.05）。在51例BTCC病理分組中，PTEN蛋白的陽性表達GⅠ組與GⅡ、GⅢ比較總體有顯著差異（P＜0.01），GⅠ組與GⅡ組及GⅢ組比較有顯著差異（P＜0.01），而GⅡ組與GⅢ組比較無差異（P＜0.05）；臨床分期中，Tis-T1組與T2-T4組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 PTEN蛋白在BTCC中的陽性表達率較CG及正常膀胱黏膜組織中低，其陽性表達率隨著腫瘤惡性程度、病理分級的增加而降低，在一定程度上有助于膀胱癌與正常膀胱黏膜組織及惡性程度、病理分級的區(qū)別。

PTEN 膀胱癌 腺性膀胱炎 免疫組化

膀胱移行細(xì)胞癌（BTCC）是泌尿系統(tǒng)最常見的腫瘤，占男性腫瘤的6%，病死率約5.5%，其中移行上皮細(xì)胞癌占94%，其特點為多中心性、易復(fù)發(fā)性，且在復(fù)發(fā)中又有部分淺表性的腫瘤進展為浸潤性腫瘤。近年來被克隆的一個新的抑癌基因PTEN在細(xì)胞的生長發(fā)育、凋亡、遷移、信號傳遞等方面具有重要作用，參與細(xì)胞增殖和凋亡時所發(fā)生的去磷酸化作用［1］，提示PTEN基因的缺失或突變可能與腫瘤的發(fā)生相關(guān)并與臨床分期及腫瘤級別相關(guān)。本資料通過S-P免疫組化方法，檢測BTCC、腺性膀胱炎（CG）及正常膀胱黏膜組織標(biāo)本中PTEN蛋白的表達特點，分析PTEN蛋白陽性表達率與BTCC的診斷與惡性程度、病理分級的判斷的相關(guān)性，以便更好的為臨床治療提供理論依據(jù)。

1　臨床資料

1.1一般資料 收集溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科于2012年8月至2014年1月間經(jīng)病理活檢確診的組織病理石蠟標(biāo)本。其中膀胱癌51例，包括GⅠ期15例、GⅡ期16例、GⅢ期20例。Tis～T1期27例、T2～T4期24例。CG 42例，正常膀胱黏膜組織10例，均為2007～2009年間的尸解膀胱黏膜組織和膀胱黏膜活檢標(biāo)本，標(biāo)本均用10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2儀器設(shè)備 HD-300系列生物組織智能脫水機（湖北慧達儀器有限公司）；ZMN-7803生物組織包埋機（湖北泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司）；202-0A 恒溫干燥箱（上虞市道墟鎮(zhèn)景諾儀器設(shè)備廠）；PM30-35DX2全自動照相系統(tǒng)（Olympus，日本）。

1.3主要試劑 0.1MPBS緩沖液（pH7.4）、0.1M檸檬酸緩沖液（pH6.0）及L-多聚賴氨酸等（北京派特博恩生物技術(shù)開發(fā)有限公司）；UltraSensitiveS-P超敏試劑盒（包括試劑A、B、C及D），鼠抗人PTEN/ MMAC1免疫組化單克隆抗體，DAB顯色試劑盒。

1.4實驗方法 （1）載玻片制作：首先采用洗滌劑的水清洗載玻片數(shù)分鐘后，再于水中浸泡30 min.配制足量的500μg/ml多聚-L-賴氨酸水溶液，逐一浸載玻片。經(jīng)空氣干燥后，貯于4℃?zhèn)溆谩＃?）染色步驟：對石蠟塊進行切片，厚度約4～6μm，分別做HE染色及免疫組化染色，PBS液代替一抗作為空白對照。HE染色：經(jīng)常規(guī)脫蠟處理后，蘇木素染色，流水沖洗，鹽酸酒精分化，再次流水沖洗返藍(lán)，放入95%乙醇數(shù)秒，伊紅染色。脫水、透明、中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。PTEN免疫組化染色：嚴(yán)格按試劑盒要求進行操作，主要行抗原修復(fù)，除去PBS液，除去血清，再次除去PBS液3次，沖洗，蘇木紫溶液復(fù)染，鹽酸酒精分化，返藍(lán)。脫水，中性樹脂封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果。PTEN免疫組化陰性對照染色：染色步驟中以PBS液代替一抗，余同PTEN免疫組化染色步驟。

1.5結(jié)果判定 由兩位專業(yè)的病理科醫(yī)師采用雙盲法進行判斷，并采用全自動照相系統(tǒng)進行圖像的采集。判定標(biāo)準(zhǔn)［2］：PTEN陽性染色為腫瘤細(xì)胞核呈棕褐色顆粒，其中強陽性（+++）：陽性細(xì)胞＞50%；中度陽性（++）：陽性細(xì)胞25%～50%；輕度陽性（+）：陽性細(xì)胞＜25%。陰性（-）：整個切片未見陽性染色。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 17.0版統(tǒng)計學(xué)軟件包。采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1PTEN蛋白在BTCC、CG及正常膀胱黏膜組織的表達情況 見表1。

表1　PTEN蛋白在BTCC、CG及正常膀胱黏膜組織的表達比較［n（%）］

2.2PTEN蛋白在BTCC中的表達情況 見表2。

表2　PTEN蛋白的表達與BTCC的病理分級及臨床分期中的關(guān)系（%）

3　討論

BTCC的發(fā)生發(fā)展可能與癌基因和抑癌基因功能的缺失有關(guān)。PTEN是1997年由Steck等［3］發(fā)現(xiàn)的一個具有雙重特異磷酸酶活性的腫瘤抑制基因，又稱MMAC1/TEP1，位于染色體10q23.3，可通過對細(xì)胞內(nèi)外信號傳導(dǎo)的負(fù)調(diào)控發(fā)揮其抑癌作用。

有研究人員［4］采用S-P免疫組織化學(xué)法對膀胱癌組織中PTEN進行分析發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白的表達率在淺表性較浸潤性明顯增高；且隨分級程度及臨床分期的升高，PTEN蛋白表達呈明顯降低趨勢。此外，在低分級（GⅠ）中PTEN蛋白表達率較高分級（GⅡ～Ⅲ）呈明顯升高趨勢。郭永聯(lián)等［5］采用Western印跡雜交法檢測正常膀胱組織及膀胱癌組織中PTEN蛋白的表達，結(jié)果表明正常膀胱組織中PTEN蛋白的表達較膀胱癌組織中的表達明顯增高（P＜0.01）；且臨床分期越低，分化越好，PTEN蛋白的表達越高（P＜0.05）。由此可見，PTEN基因的突變或缺失在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展中起著非常重要的作用。

按ICUU-TNM標(biāo)準(zhǔn)臨床病理分期標(biāo)準(zhǔn)和WHO標(biāo)準(zhǔn)分級將BTCC分為Tis-T1與T2-T4組，GⅠ組、GⅡ組及GⅢ組。本實驗結(jié)果說明隨著移行膀胱癌臨床分期的降低，PTEN基因的缺失率也相應(yīng)降低。結(jié)果與既往文獻報道基本一致［6，7］。

CG是一種膀胱黏膜上皮反應(yīng)性化生、增生性改變。在臨床實踐中，其診治與淺表性膀胱癌大致相同。近年來，隨著相關(guān)研究的深入，CG檢出率呈現(xiàn)明顯上升趨勢，其中以中青年女性居多［8］，其現(xiàn)已成為泌尿外科的常見疾病之一，但是其具體發(fā)病機制至今未完全闡明。

CG與膀胱腫瘤的關(guān)系密切，但目前較少有關(guān)于PTEN在CG中的研究報道。在本實驗CG石蠟切片中，PTEN蛋白陽性表達率為80.95%。與膀胱癌組的表達情況比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而與正常黏膜組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示CG的發(fā)生與膀胱癌的發(fā)生過程存在差異，說明CG可能不是癌前病變，只是正常膀胱黏膜在刺激因素的作用下向癌發(fā)展的某個病變階段，故采取治療方法可依具體情況而定。

綜上所述，PTEN蛋白的表達與膀胱癌的生物學(xué)行為關(guān)系密切，其陽性表達率隨著腫瘤惡性程度、病理分級的降低而增加。積極明確BTCC發(fā)生和發(fā)展過程中各種基因的改變及相互關(guān)系，檢測 PTEN蛋白的表達可能對于其早期診斷和預(yù)后有一定參考價值。

1 趙欣楠，于兆進，魏敏杰，等.PTEN與腫瘤研究進展.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，20（7）： 1507～1510.

2 林延峰，于昕，吳斌.PTEN蛋白在膀胱癌中的表達及意義.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2004，33（3）：255～156.

3 PA Steck ，M A Pershouse ，S A Jasser ，et al.Identification of a candidate tumour suppressor gene，MMAC1，at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers.Nature genetics，1997，15 （4）：356～362.

4 黃軍科，張向陽，羅亞桐，等.PTEN基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達及意義.醫(yī)學(xué)臨床研究，2007，24（9）：1488～1490.

5 郭永聯(lián)，周四維，張小平，等.抑癌基因PTEN在膀胱癌組織中的表達及其與Akt磷酸化的相關(guān)性.臨床泌尿外科雜志，2007，22（7）： 544～549.

6 劉雙林，吳準(zhǔn)，李俊，等.PTEN在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達及其臨床意義.現(xiàn)代泌尿外科雜志，2008，13（4）： 371～372.

7 薄五海.膀胱移行細(xì)胞癌中PTEN的表達分析.中國醫(yī)師雜志，2007，15（6）： 33～34.

8 曲仕浩，曾志宇，江偉東.經(jīng)尿道電切術(shù)與電灼術(shù)治療腺性膀胱炎的療效比較.浙江實用醫(yī)學(xué)，2011，22（20）： 42～43.

Objective Ⅰnvestigates expression of PTEN（Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN） in bladder transitional cell carcinoma（BTCC） and its clinical signifi cance. Methods Fifty-one cases of bladder transitional carcinoma，forty-two cases of Cystitis Glandularis（CG） and ten cases of normal bladder tissue 10 cases of normal bladder tissue were collected. All samples were derived from cystoscopic biopsy and were subjected to histopathological examination to confi rm the diagnosis.Ⅰmmunohistochemistry S-P. Methods was used to demonstrate the expression of PTEN. Results The positive rate of PTEN expression in BTCC，CG and normal bladder tissue were 58.8%，81% 100%，and there was statistic signifi cance（P＜0.01） among three groups. 51 cases of BTCC were divided into group GⅠ，GⅡ，GⅢ and Tis -T1，T2-T4，and there was statistic significancy among group GⅠ and GⅡ、GⅢ（P＜0.01），between group Tis -T1 and T2-T4（P＜0.05）. Conclusion The reduced expression or loss of PETN might play an important role in carcinogenesis and progression of bladder cancer.The positive rate of PTEN expression was negatively correlated to the clinical and grade staging of tumor.

PTEN Cystitis glandularis BTCC Ⅰmmunohistochemistry

317500 浙江省溫嶺市第一人民醫(yī)院外科中心（金鵬飛）

325000 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（譚操 毛平花王芳）