張桂東

·基礎(chǔ)研究·

CyclinD1和CDC25A 在膽囊癌中的表達(dá)及意義

張桂東

目的 通過(guò)檢測(cè)CyclinD1和CDC25A在膽囊癌中的表達(dá)，探討其在膽囊癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制，為膽囊癌診斷和治療尋找新的靶點(diǎn)。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)44例膽囊癌和35例慢性膽囊炎黏膜組織的CyclinD1、CDC25A蛋白的表達(dá)，其中蛋白的表達(dá)量用平均熒光強(qiáng)度（均道值）表示。結(jié)果 膽囊癌組織、慢性膽囊炎黏膜組織中CyclinD1蛋白表達(dá)分別為（531.153±28.823）、（496.462±37.191），膽囊癌組織的CyclinD1蛋白表達(dá)高于正常組織；膽囊癌組織、慢性膽囊炎黏膜組織中CDC25A蛋白表達(dá)分別為（535.029±35.647）、（496.267±41.345），膽囊癌組織的CDC25A蛋白表達(dá)高于慢性炎癥組織。結(jié)論 CyclinD1和CDC25A蛋白在膽囊癌組織中均高表達(dá)。這兩種基因和蛋白表達(dá)的改變可能是引起膽囊癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制之一。

膽囊癌 CyclinD1 CDC25A 流式細(xì)胞分析術(shù)

原發(fā)性膽囊癌是膽系腫瘤中惡性程度最高的一種，手術(shù)及放化療的治療效果較差。近年來(lái)膽囊癌發(fā)病的分子學(xué)機(jī)制成為研究熱點(diǎn)。作者通過(guò)檢測(cè)CyclinD1和CDC25A在膽囊癌中的表達(dá)，探討其在膽囊癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制。報(bào)道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 原發(fā)性膽囊癌44例及慢性膽囊炎35例黏膜組織均來(lái)自本院2005年12月至2013年1月手術(shù)切除標(biāo)本。膽囊癌患者44例中男17例，女27例；年齡40～76歲，中位年齡60歲。中、高分化膽囊癌21例、低分化膽囊癌23例，其中淋巴轉(zhuǎn)移和（或）肝臟轉(zhuǎn)移35例。

1.2主要試劑與設(shè)備 鼠抗人CyclinD1單克隆抗體（北京中杉公司）；鼠抗人CDC25A單克隆抗體（美國(guó)Santa Cruz公司）。采用美國(guó)Beckman Coulter公司生產(chǎn)的Epics-XLⅡ型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用Expo 32 ADC進(jìn)行免疫熒光數(shù)據(jù)分析。

1.3檢測(cè)方法 嚴(yán)格按照試劑要求及流式細(xì)胞儀的步驟進(jìn)行檢測(cè)。并以實(shí)驗(yàn)樣品蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度（均道值）表示各蛋白的含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1膽囊癌組織、慢性膽囊炎黏膜組織中CyclinD1蛋白表達(dá)（見(jiàn)圖1）結(jié)果分別為：（531.153±28.823）、（496.462±37.191），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，F(xiàn)=11.89， P=0.0005，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

圖1　A CyclinD1 蛋白在慢性膽囊炎黏膜組織中的表達(dá)（FCM均道值）479.86

圖 1B CyclinD1 蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)（FCM均道值）546.65

表1　CyclinD1 蛋白在慢性膽囊炎黏膜組織及膽囊癌組織中的表達(dá)（FCM）

2.2膽囊癌組織的CyclinD1蛋白表達(dá)明顯高于慢性炎癥組織；膽囊癌組織中CyclinD1蛋白的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤所處位置，組織學(xué)分化及其淋巴轉(zhuǎn)移的比較 見(jiàn)表2 。

表2　CyclinD1蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系（FCM）

2.3膽囊癌組織、慢性膽囊炎黏膜組織中CDC25A蛋白表達(dá)（見(jiàn)圖2），結(jié)果分別為：（535.029±35.647）、（496.267±41.345），膽囊癌組織的CDC25A蛋白表達(dá)高于慢性炎癥組織。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，F(xiàn)=12.01，P=0.0013，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表3。

圖2　A CDC25A蛋白在慢性膽囊炎黏膜組織中的表達(dá)（FCM均道值）500.52

圖2　B CDC25A 蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)（FCM均道值）556.65

表3　CDC25A 蛋白在慢性膽囊炎黏膜組織及膽囊癌組織中的表達(dá)（FCM）

2.4膽囊癌組織中CDC25A蛋白的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤所處位置，組織學(xué)分化及其淋巴轉(zhuǎn)移的比較 見(jiàn)表4。

表4　CDC25A蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系（FCM）

3　討論

在細(xì)胞周期調(diào)控中，聯(lián)絡(luò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與細(xì)胞周期機(jī)制有兩條途徑，一是通過(guò)CyclinD-Cdk4/6，二是通過(guò)CyclinE-Cdk2。而CyclinD分為三型：D1、D2、D3，其中CyclinD1基因定位于染色體11q13，長(zhǎng)度約120kb，編碼295個(gè)氨基酸構(gòu)成的蛋白質(zhì)，分子量約34KD。在細(xì)胞周期進(jìn)程中CyclinD1的含量受到生長(zhǎng)因子等因素的調(diào)控，當(dāng)生長(zhǎng)因子刺激時(shí)，通過(guò)“瀑布”式的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，激活相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子，可在幾分鐘內(nèi)啟動(dòng)早期應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄，且蛋白質(zhì)合成的抑制劑不能阻斷早期應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄，從而在腫瘤發(fā)生中起促進(jìn)作用。臧盛兵等［1］研究表明ATF3可能通過(guò)調(diào)控CyclinD1表達(dá)而促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移。孫桂彬等［2］研究CyclinD在胃癌及其癌前病變中的表達(dá)結(jié)果顯示CyclinD在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)升高，可能是胃癌早期分子事件。李永昊等［3］研究結(jié)果顯示CyclinD蛋白及其mRNA的高表達(dá)在骨肉瘤中不同程度異常表達(dá)與腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系。本資料結(jié)果顯示，CyclinD1在不同膽囊病變中的表達(dá)具有一致性，即在膽囊癌中的表達(dá)明顯高于慢性膽囊炎黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步研究表明，CyclinD1的表達(dá)隨著膽囊癌分化程度的降低而升高，表明CyclinD1是一個(gè)有潛在價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物。

CDC25家族是雙重特異性磷酸酶，是國(guó)外學(xué)者于1986年在裂殖酵母中分離而得，具有雙重特異活性，是細(xì)胞周期的正向調(diào)解因子，包括CDC25A、CDC25B、CDC25C三個(gè)成員，其中CDC25A對(duì)G1/ S轉(zhuǎn)換和進(jìn)入S期是必需的。國(guó)內(nèi)外研究［4］認(rèn)為，CDC25A亦參與G2 /M期轉(zhuǎn)換，是最為重要的細(xì)胞周期調(diào)控因素之一。CDC25A是腫瘤發(fā)生的早期事件，參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。楊春悅等［5］研究CDC25A高表達(dá)可導(dǎo)致下咽癌的發(fā)生、發(fā)展，且與腫瘤的分化程度呈明顯相關(guān)性。李金梅等［6］研究認(rèn)為CDC25A在食管癌中的表達(dá)明顯高于炎性對(duì)照組織，表明在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。袁銳等［7］報(bào)道CDC25A在結(jié)直腸癌及腺瘤中表達(dá)均高于正常結(jié)直腸黏膜組織，且腺癌組亦明顯高于腺瘤組。本資料結(jié)果顯示，CDC25A在不同膽囊病變中的表達(dá)具有一致性，即在膽囊癌中的表達(dá)明顯高于慢性膽囊炎黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步研究，CDC25A的表達(dá)隨著腫瘤的分化程度的降低而升高，表明CDC25A亦是一個(gè)有潛在價(jià)值的膽囊癌的腫瘤標(biāo)志物。

腫瘤的分子生物學(xué)研究日益受到學(xué)者們的重視，膽囊癌的研究也不例外，眾多的醫(yī)學(xué)科技工作者希望能夠從基因水平上闡明膽囊癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)歸，從而力求提高膽囊癌的早期診治水平。本資料結(jié)果顯示在膽囊癌組織中與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)的CyclinD1和CDC25A均明顯升高，因此CyclinD1和CDC25A為膽囊癌的綜合診斷和治療可能提供了新的靶點(diǎn)。

1 臧盛兵，郁萬(wàn)媛，陳虹，等.結(jié)直腸癌組織ATF3及其靶基因CyclinD1與Maspin表達(dá)的臨床意義分析.中華腫瘤防治雜志，2012，19（24）：1870～1874.

2 孫桂彬，楊景國(guó)，李永華，等. PTEN、p16和CyclinD1在胃癌及癌前病變中表達(dá)的研究 .現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21（15）：1614～1616.

3 李永昊，肖玉周，汪萬(wàn)英. CyclinD1、CDK4、P16在骨肉瘤中的表達(dá)和臨床意義. 中華全科醫(yī)學(xué)，2012，10（2）：191～207.

4 Zaffaroni N， Pennati M， Colella G， et al Expression of the antiapoptotic gene survivin correlates with taxol resistance in human ovarian cancer . Cell Mol Life Sci， 2002， 59（8）：1406～1412.

5 楊春悅，馬桂琴，李連賀，等.咽癌中CDC25A的表達(dá)及臨床意義. 臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（9）： 649～650.

6 李金梅，王靜，劉江惠，等.下CDC25A、Smad3在食管鱗癌的表達(dá)及相互關(guān)系. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，30（3）： 233～236.

7 袁銳，劉曉群，朱培謙，等.CDC25A在結(jié)直腸癌中表達(dá). 南昌大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，52（9）： 64～66.

Objective To detect the expression of cyclinD1 and CDC25A in carcinoma of gallbladder tissue，to explore their mechanism，and to search for new therapy of carcinoma of gallbladder. Methods The expression degrees of cyclinD1 and CDC25A were examine in 44 cases of example carcinoma of gallbladder tissue and 35 cases of mucosa of chronic cholecystitis by FCM， the expression degrees of the protein were studied. Results The protein expression of in cyclinD1 carcinoma of gallbladder tissue and mucosa of chronic cholecystitis was 531.153±28.823 and 496.462±37.191 repectively，the protein expression of cyclinD1 was higher in carcinoma of gallbladder tissue than mucosa of chronic cholecystitis（P＜0.05）； The protein expression of CDC25A in carcinoma of gallbladder tissue and mucosa of chronic cholecystitis was 535.029±35.647 and 496.267±41.345 repectively，the protein expression of CDC25A was also higher in carcinoma of gallbladder tissue than mucosa of chronic cholecystitis（P＜0.05）. Conclusion The expression degree of protern was accordant with that of protein on CyclinD1 and CDC25A. It was higher in carcinoma of gallbladder tissue than in mucosa of chronic cholecystitis.Through the changes of cyclinD1 and CDC25A protein expression，it is possible to elucidate the carcinogenesis of cholangioncarcinoma.

CyclinD1 CDC25A carcinoma of gallbladder FCM

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