武欣越

【摘要】目的：研究乙肝患者HBV感染指標(biāo)、病毒復(fù)制水平與基因分型的關(guān)系。方法：選擇？？例乙型肝炎患者作為研究對(duì)象，根據(jù)病毒基因分型不同分為B型組和C型組，檢測(cè)兩組患者的HBV-DNA載量、ATL和AST含量以及細(xì)胞免疫功能。結(jié)果：C型組患者的HBV-DNA病毒載量高于B型組，ATL和AST含量高于B型組；外周血中CD4+T細(xì)胞含量以及CD4+/CD8+T細(xì)胞比值低于B型組。結(jié)論：C基因型病毒感染乙肝患者的整體病情比B基因型感染患者嚴(yán)重，表現(xiàn)為HBV-DNA載量更高、肝細(xì)胞損傷和免疫功能損傷更嚴(yán)重。

【關(guān)鍵詞】乙型肝炎；基因分型；轉(zhuǎn)氨酶；T細(xì)胞亞群

【中圖分類號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1671-8801（2015）04-0078-02

慢性乙型肝炎是我國(guó)最常見的傳染性疾病，由乙型肝炎病毒（HBV）感染造成。近年來有研究認(rèn)為，HBV-DNA可以分為A-H八種基因型，不同基因型的感染能力不同，感染機(jī)體后造成肝細(xì)胞損傷的程度也不同[1]。在下列研究中，我們分析了乙肝患者HBV感染指標(biāo)、病毒復(fù)制水平與基因分型的關(guān)系。

1、對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選擇在我院確診為乙型肝炎的80例患者作為研究對(duì)象，所有患者均為首次診斷且未接受抗病毒和免疫治療，設(shè)計(jì)特異性引物序列并進(jìn)行PCR擴(kuò)張，根據(jù)結(jié)果判斷HBV-DNA的分析，根據(jù)分型不同分為B型組和C型組。B型組共45例，包括男性/女性：28/17例，年齡57.79±6.92歲；C型組共35例，包括男性/女性：22/13例，年齡58.11±6.78歲。兩組患者一般資料的比較無差異（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)樣本采集方法

兩組患者均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集外周靜脈血并分為兩份，一份離心后取血清，另一方直接保存為抗凝血。

1.2.2 HBV-DNA載量

采用DNA提取分離試劑盒抽提血清樣本中的乙肝病毒DNA，而后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò)增曲線計(jì)算DNA拷貝數(shù)。

1.2.3 轉(zhuǎn)氨酶含量

采用電化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)血清樣本中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST的含量。

1.2.4 T細(xì)胞亞群

取抗凝血，分別加入CD4、CD8亞群表面標(biāo)志性物質(zhì)的單克隆抗體進(jìn)行孵育，而后在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)并計(jì)算不同T細(xì)胞亞群所占比例。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件對(duì)檢測(cè)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入，對(duì)兩組間差異進(jìn)行t檢驗(yàn)，按照P<0.05判斷組間有差異。

2、結(jié)果

2.1 HBV-DNA載量

C型組患者的HBV-DNA拷貝數(shù)（4.85±0.56）lgcopies/mL，高于B型組患者的HBV-DNA拷貝數(shù)（2.91±0.34）lgcopies/mL，t=7.029、p<0.05。

2.2 轉(zhuǎn)氨酶含量

C型組患者的ALT（121.23±15.62）U/L、AST（140.94±17.20）U/L，均高于B型組患者的ALT（87.49±10.08）U/L、AST（91.31±11.45）U/L，t值分別為6.884、6.391，p均<0.05。

2.3 T淋巴細(xì)胞亞群含量

C型組患者的CD8+T細(xì)胞亞群含量（21.45±3.34）%，與B型組患者的CD8+T細(xì)胞亞群含量（22.18±3.19）%比較，無顯著差異（P>0.05）。

C型組患者的CD4+T細(xì)胞亞群含量（29.24±3.95）%、CD4+/CD8+比例（1.36±0.17），低于B型組患者的CD4+T細(xì)胞亞群含量（37.71±4.86）%，CD4+/CD8+比例（1.70±0.21），t值分別為6.019、5.866，p均<0.05。

3、討論

HBV中S基因的全序列與人體全基因組序列保持了高度的一致性，根據(jù)S基因序列的差異可以將HBV分為A-H八種不同的基因型，在我國(guó)以B型和C型最為常見，北方人群以HBV-C基因型為主，而南方則以HBV-B基因型為主、C基因型也占到一定比例。近年來的研究認(rèn)識(shí)到，不同基因型HBV對(duì)機(jī)體的感染能力不同，這也是導(dǎo)致乙型肝炎患者病變程度不一致的內(nèi)在原因[2]。

HBV感染機(jī)體后最突出的表現(xiàn)在于病毒DNA自身不斷復(fù)制并對(duì)正常肝細(xì)胞進(jìn)行攻擊。HBV的自身復(fù)制能力越強(qiáng)，體內(nèi)DNA載量也越高，進(jìn)而會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷加重。因此，檢測(cè)HBV-DNA的拷貝數(shù)能夠準(zhǔn)確反應(yīng)病毒的感染能力。本研究的分析結(jié)果顯示，C型組患者的HBV-DNA病毒載量高于B型組。這就初步提示C基因型HBV在感染肝細(xì)胞后的復(fù)制能力較強(qiáng)，可能會(huì)造成肝細(xì)胞更嚴(yán)重的損害。

肝細(xì)胞內(nèi)含有豐富的轉(zhuǎn)氨酶并參與機(jī)體內(nèi)多種物質(zhì)的代謝，當(dāng)細(xì)胞受到HBV的攻擊后會(huì)發(fā)生破裂并導(dǎo)致胞漿內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶釋放入血。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST是反應(yīng)肝細(xì)胞損傷程度最常用的兩種轉(zhuǎn)氨酶。本研究通過分析血清中轉(zhuǎn)氨酶的含量可知，C型組患者血清ATL和AST含量高于B型組，由此說明C基因型HBV對(duì)肝細(xì)胞的損傷程度較重，這也與C基因型HBV復(fù)制能力較強(qiáng)的結(jié)果相吻合。

機(jī)體免疫功能是清除HBV的主要機(jī)制，其中T細(xì)胞所介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)對(duì)于抵抗病毒入侵、清除HBV具有重要作用。CD4+T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的執(zhí)行者，能夠分泌多種細(xì)胞因子來促進(jìn)免疫細(xì)胞成熟、具有明確的抗病毒作用；CD8+的功能是通過細(xì)胞溶解作用來清除病毒，但同時(shí)也具有一定的免疫抑制效應(yīng)。HBV感染會(huì)造成免疫功能損傷，本研究分析通過分析免疫功能指標(biāo)可知，C型組患者外周血中CD4+T細(xì)胞含量以及CD4+/CD8+T細(xì)胞比值低于B型組，這就說明C基因型HBV感染對(duì)機(jī)體免疫功能的損傷較大。

綜合以上討論我們總結(jié)如下：C基因型病毒感染乙肝患者的整體病情比B基因型感染患者嚴(yán)重，表現(xiàn)為HBV-DNA載量更高、肝細(xì)胞損傷和免疫功能損傷更嚴(yán)重。

參考文獻(xiàn)

[1]林娟娟，張寶華. 慢性乙型肝炎患者感染的病毒基因分型與部分肝功能指標(biāo)分析[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（9）：1256-1257.

[2]鐘大妮，李國(guó)堅(jiān)，吳繼周，等. 廣西地區(qū)乙肝病毒基因分型與臨床表現(xiàn)及機(jī)體免疫功能關(guān)系的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（2）：1-3.