許璟 馬費(fèi)強(qiáng) 陳賢誼 周峰 朱國(guó)偉 張建民

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2015.03.013

基金項(xiàng)目：浙江省衛(wèi)生廳平臺(tái)骨干項(xiàng)目（2011RCB022）;浙江大學(xué)橫向科技項(xiàng)目（11-491020-290）

作者單位：310009 杭州，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院神經(jīng)外科

通信作者：張建民，Email：zjm135@vip.sina.com

【摘要】目的 在腦脊液（cerebrospinal fluid， CSF）中篩選與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（intracranial aneurysm， IA）相關(guān)的糖蛋白標(biāo)志物，對(duì)其靈敏度和特異性加以評(píng)價(jià)。方法 采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)和質(zhì)譜技術(shù)，平行比較隨機(jī)選取的4組研究對(duì)象即正常對(duì)照組（healthy control， HC）、疾病對(duì)照組（disease control， DC）、未破裂IA組（unruptured IA， UIA）和破裂IA組（ruptured IA， RIA）各10例的CSF中糖蛋白的表達(dá)差異，篩選出其中的一個(gè)差異蛋白——受體酪氨酸激酶Axl，并在另一相同分組各20例患者基礎(chǔ)上，用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線）對(duì)候選標(biāo)志物的靈敏度和特異性做出評(píng)價(jià)。數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism5軟件，多組之間比較采用單因素方差分析中的Newman-Keuls多重比較法;相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 首先，在人CSF中一共鑒定了294個(gè)糖蛋白。其次，通過HC、DC、RIA以及UIA四組之間的比較，鑒定和定量了59個(gè)僅在RIA組中發(fā)生特異性改變的蛋白、24個(gè)僅在UIA組中發(fā)生特異性改變的蛋白以及33個(gè)在RIA組和UIA組中均發(fā)生改變的蛋白。最后，選取了其中一個(gè)僅在RIA組中表達(dá)增高的蛋白-酪氨酸受體激酶Axl，在獨(dú)立CSF和血漿中進(jìn)一步加以驗(yàn)證，ROC曲線分析表明在95%特異性時(shí)，CSF中Axl 區(qū)分RIA和UIA的靈敏度為60%。血漿Axl在區(qū)分RIA和正常對(duì)照的靈敏度為40%，區(qū)分RIA和UIA的靈敏度為25%。結(jié)論 CSF Axl可以作為預(yù)測(cè)IA破裂的潛在標(biāo)志物，深入研究其與IA形成和破裂的關(guān)系將有助于揭示IA發(fā)病機(jī)制和尋找新的治療靶點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】顱內(nèi)動(dòng)脈瘤;腦脊液;定量蛋白質(zhì)組學(xué);受體酪氨酸激酶Axl;生物標(biāo)志物

Identify the glycoproteins as biomarkers for intracranial aneurysm with a proteomics approach

Xu Jing，Ma Feiqiang，Chen Xianyi，Zhou Feng，Zhu Guowei，Zhang Jianmin.Neurosurgery Department， Second Affilated Hospital Zhejiang University College of Medicine， Hangzhou 310009， China

Corresponding author： Zhang Jianmin， Email： zjm135@vip.sina.com

【Abstract】Objective To screen the glycoproteins as biomarkers for intracranial aneurysm （IA） in cerebrospinal fluid （CSF） and evaluate the specificity and sensitivity of the biomarker candidates. Methods A complementary proteomic approach integrated with multidimensional chromatography was employed to simultaneously measure relative changes in the gylcoproteins of cerebrospinal fluid （CSF） obtained from patients with ruptured IA （RIA） and unruptured IA （UIA） compared to the healthy controls （HC） and disease controls （DC）. One protein-receptor tyrosine kinase Axl with a unique change in RIA was validated in CSF and plasma. The sensitivity at 95% specificity of Axl in CSF and plasma was evaluated with receiver operating characteristic curve （ROC curve）. Results Firstly， a total of 294 glycoproteins were identified in human CSF with believable evidence. Secondly， the proteomic findings showed the quantitative changes in RIA and UIA as compared to HC and DC. Of 294 identified CSF proteins， 59， 24 and 33 proteins displayed quantitative changes unique to RIA， UIA or IA， respectively. At last， one of these unique proteins-receptor tyrosine kinase Axl with unique increase in RIA was confirmed both in CSF and plasma. ROC curve analysis showed that the sensitivity at 95% specificity of Axl in CSF to differentiate RIA from UIA was 60%. When compared to CSF， the sensitivity at above setting in plasma to differentiate RIA from HC was 40% and to differentiate RIA from UIA was 25%. Conclusions A glycoprotein biomarker Axl might be used as a promising biomarker to predict the rupture of IA. The further investigation of the relations between Axl and IA formation as well as rupture might help to elucidate the underlying pathogenesis and find new therapeutic targets.

【Key words】Intracranial aneurysm; Cerebrospinal fluid; Quantitative proteomics; Receptor tyrosine kinase Axl; Biomarker

顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（intracranial aneurysm， IA）在人群中的發(fā)病率相當(dāng)高，據(jù)估計(jì)在成人中可以達(dá)到1%～5%[1-3]。一旦發(fā)生破裂引起蛛網(wǎng)膜下腔出血，病死率可高達(dá)50%以上[4]。而通過及時(shí)的治療未破裂IA的病死率卻很低[5]，但對(duì)無癥狀的UIA是否要進(jìn)行治療仍存在很大爭(zhēng)議[6]。臨床上制定了一些所謂的“標(biāo)準(zhǔn)”來判斷無癥狀的UIA是否需要進(jìn)行治療，如IA的大小、位置等[7]。但是這些標(biāo)準(zhǔn)并沒有堅(jiān)實(shí)的科學(xué)依據(jù)，IA的破裂和大小可能沒有直接關(guān)系[8]。迄今為止，IA的病因和發(fā)病機(jī)制還不清楚[9-10]，國(guó)內(nèi)外學(xué)者仍未找到一種有效的生物標(biāo)志物。本研究利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選差異表達(dá)的糖蛋白，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)僅在RIA中表達(dá)增高的蛋白——酪氨酸受體激酶Axl，其可能成為非常有前景的預(yù)測(cè)IA破裂的生物標(biāo)志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本課題研究對(duì)象為2010年1月1日到2012年12月31日就診于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院神經(jīng)外科的患者。本研究獲得了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，且均獲得研究對(duì)象的同意并簽署書面知情同意書。

入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）正常對(duì)照（HC） 從腦外傷完全恢復(fù)至少兩個(gè)月以上入院行顱骨修補(bǔ)的患者中選取。入選標(biāo)準(zhǔn)為：①各項(xiàng)常規(guī)和實(shí)驗(yàn)室檢查的指標(biāo)均在正常范圍;②無嚴(yán)重肝腎心肺病史;③無遺傳性家族疾病史;④無嚴(yán)重抽煙、酗酒史（抽煙<40 支/周，飲酒<150 g酒精/周）;⑤經(jīng)CTA檢查排除IA。（2）其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病對(duì)照（DC） 從非出血性疾病相關(guān)的腦腫瘤患者或其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者中選取，并且經(jīng)CTA或MRA證實(shí)排除IA。（3）未破裂IA患者（UIA） 經(jīng)DSA或CTA、MRA檢查后確診，并且無任何IA相關(guān)癥狀的患者。（4）破裂IA患者（RIA） 經(jīng)DSA檢查確診是由于IA破裂引起蛛網(wǎng)膜下腔出血的患者。破裂動(dòng)脈瘤腦脊液的采集在手術(shù)或栓塞后的一個(gè)月進(jìn)行。用于腦脊液和血液標(biāo)志物篩選的4組患者（RIA， UIA， 正常對(duì)照和疾病對(duì)照，每組各10 例）在年齡（52.4±9.0）歲 vs.（55.2±3.9）歲vs.（52.8±6.9）歲vs.（54.6±4.2）、性別（男/女：8/2 vs. 8/2 vs. 8/2 vs. 8/2 vs. 8/2）等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而用于驗(yàn)證的4組患者（RIA， UIA， 正常對(duì)照和疾病對(duì)照，每組各20 例）在年齡（51.7±8.4）歲vs.（51.2±10.2）歲vs.（50.8±7.6）歲vs.（49.5±7.7）歲和性別（男/女：7/13 vs. 7/13 vs .7/13 vs. 7/13）亦差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 腦脊液和血液標(biāo)本的采集 腰穿由熟練的醫(yī)生操作，統(tǒng)一在清晨（7：00-8：00）采集?；颊咂教蓚?cè)臥位，腰3～4椎間隙為進(jìn)針位置，第一管2～5 mL送腦脊液常規(guī)。第二管收集約10 mL作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，分裝成0.5 mL/管。血液在空腹下采集，每個(gè)病例采集1 mL左右血液至肝素抗凝管中;離心分離得到的血漿分裝成0.1 mL/管。所有標(biāo)本收集后均立即放在-80 ℃低溫冰箱備用。

1.2.2 使用凝集素親和柱分離腦脊液中的糖蛋白 將等分的腦脊液樣本（2 mL）用Qproteome糖蛋白試劑盒（Qiagen，Valencia，CA）進(jìn)行糖蛋白的分離和富集。使用SpeedVac （Thermo， Asheville， NC）將樣品干燥至約200 μL，在1000 g下離心5 min后，把上清液轉(zhuǎn)移到另一新管中，沉淀則用凝集素親和試劑盒中的去污劑100 μL進(jìn)行溶解后與上清液合并。處理好的樣品與1500 μL結(jié)合緩沖液以及蛋白酶抑制劑（100×）混和，旋轉(zhuǎn)震蕩充分混勻。將糖蛋白用100 μL帶有蛋白酶抑制劑溶液的洗脫緩沖液洗脫6次。洗脫液則通過添加4倍體積的冰冷丙酮沉淀，在-20 ℃下孵育2 h洗脫沉淀池，然后4 ℃12 000g下，在預(yù)冷微離心機(jī)離心10 min。去除上清液，沉淀后的蛋白樣品加入100 μL 0.5 mol/L TEAB（triethylammonium biocarbonate）溶解。最后使用BCA法測(cè)定蛋白濃度（Thermo， Rockford， IL）。

1.2.3 iTRAQ標(biāo)記和二維液相色譜及串聯(lián)質(zhì)譜分析 來自四個(gè)比較組的100 μg蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后分別用四種iTRAQ^TM試劑的一種來標(biāo)記（Applied Biosystems， Foster City， CA）。然后，把iTRAQ標(biāo)記的樣本混合后（共400 μg），用PolySulfoethyl ATM 強(qiáng)陽離子交換色譜柱將樣品分成6個(gè)部分，分別用SpeedVac真空離心干燥，溶解于0.5%三氟乙酸中，然后通過毛細(xì)管C18反相柱，線性梯度設(shè)置5%～95%流動(dòng)相B（80% 乙腈/0.08TFA/HPLC 級(jí)純水）85 min，洗脫后的組分與重結(jié)晶的α-cyano-4-hydroxycinnamic acid （7 mg/mL 溶解于60% 乙腈/2.6% 醋酸銨，sigma）以及內(nèi)參（4700 Mass Standard Kit， Applied Biosystems）混合，用Probot^TM自動(dòng)點(diǎn)樣器點(diǎn)至不銹鋼MALDI 24×24 矩陣的點(diǎn)樣板上，每板一共有576個(gè)點(diǎn)，用MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜儀（4700 Proteomics Analyzer withTOF/TOF OpticsTM，Applied Biosystems）進(jìn)行蛋白鑒定，通過比較不同組與對(duì)照組的比值進(jìn)行定量分析。

1.2.4 血漿和腦脊液中可溶性Axl（sAxl）的ELISA驗(yàn)證 根據(jù)制造商的說明書，在人ELISA試劑盒（Abcam， Cambridge， MA）測(cè)定血漿和腦脊液中sAxl。在測(cè)定前腦脊液和血漿樣品分別為1∶100和1∶1000稀釋。在微孔板上讀出450 nm處的吸光度。用標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定血漿和腦脊液中sAxl濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism 5 軟件，多組之間比較采用單因素方差分析中的Newman-Keuls Multiple Comparison Test;相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析;靈敏度和特異性評(píng)價(jià)采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）分析。以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦脊液糖蛋白質(zhì)組的鑒定

結(jié)合糖蛋白分離和定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，本研究在腦脊液中一共鑒定了294個(gè)糖蛋白質(zhì)，這些被鑒定的蛋白通過Uniprot數(shù)據(jù)庫（http：//www.uniprot.org）的搜索，主要涉及以下11類：（1）與免疫或炎癥反應(yīng)相關(guān);（2）與細(xì)胞黏附相關(guān);（3）與細(xì)胞外基質(zhì)組成相關(guān);（4）與蛋白合成和降解相關(guān);（5）與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān);（6）與細(xì)胞凋亡或抗凋亡相關(guān);（7）與細(xì)胞增殖、分化和遷移相關(guān);（8）與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān);（9）與物質(zhì)代謝相關(guān);（10）與細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞骨架相關(guān);（11）功能未知。在這些蛋白中，除了有相當(dāng)一部分蛋白（21%）功能未知，其他最常見的是與免疫及炎癥反應(yīng)相關(guān)的蛋白（13%）、與細(xì)胞黏附相關(guān)的蛋白（12%）以及與蛋白合成及降解相關(guān)的蛋白（13%），其在動(dòng)脈瘤的形成和破裂過程中發(fā)揮了重要作用。

2.2 在破裂和未破裂動(dòng)脈瘤中發(fā)生改變的腦脊液糖蛋白

利用同時(shí)可以標(biāo)記四組樣品的iTRAQ試劑分別標(biāo)記HC（iTRAQ-114）、DC（iTRAQ-115）、RIA（iTRAQ-116）和UIA （iTRAQ-117），然后分別比較115/114、116/114和117/114的比值，找出以下三組感興趣的蛋白：（1）僅在RIA組中發(fā)生變化或者特異性改變（變化的方向有別于其他組）的蛋白;（2）僅在UIA組中發(fā)生變化或者特異性改變的蛋白;（3）同時(shí)在RIA組和UIA組中發(fā)生變化的蛋白。利用這些標(biāo)準(zhǔn)，筆者分別鑒定了59個(gè)、24個(gè)和33個(gè)在RIA組、UIA組或IA組中發(fā)生特異改變的蛋白（見表1～3）。

2.3 候選糖蛋白標(biāo)志物Axl在腦脊液和血漿中

驗(yàn)證

在本研究中優(yōu)先選擇了受體酪氨酸激酶Axl進(jìn)行驗(yàn)證，因?yàn)樵摰鞍變H在RIA的腦脊液中表達(dá)增加44%;數(shù)據(jù)庫中顯示有N-linked糖基化位點(diǎn);大量的文獻(xiàn)支持Axl介導(dǎo)的信號(hào)通路在各種類型細(xì)胞的存活、生長(zhǎng)、聚集、遷移以及在抗炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用;目前可方便地對(duì)其進(jìn)行定量。

首先在4組合并的腦脊液樣品中Axl的含量分別為：HC組（65.89±12.89）ng/mL; DC組（95.99±16.51）ng/mL; RIA組（152.64±12.52）ng/mL;UIA組（61.87±22.18）ng/mL（每組樣品重復(fù)三次，如圖1）。

然后，每組單獨(dú)10個(gè)樣品的Axl質(zhì)量濃度分別為：HC組 （52.27±29.00）ng/mL; DC組 （93.51±38.45）ng/mL; RIA組 （140.90±28.59） ng/mL;UIA組 （55.34±34.80）ng/mL（圖1B）。由此可見，單獨(dú)檢測(cè)10個(gè)樣品的Axl均數(shù)與合并樣品基本接近。單因素方差分析顯示，與HC組相比，RIA組的Axl質(zhì)量濃度顯著增加（q=3.956， P<0.01）;但UIA組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。雖然DC組與HC組相比，Axl質(zhì)量濃度也顯著增加（P<0.05），但是RIA組與DC組相比，Axl質(zhì)量濃度也顯著增加（q=4.547， P<0.01），因此Axl在RIA中的增加具有特異性。

然后在另一批性別、年齡匹配的患者和對(duì)照，每組20個(gè)樣品同時(shí)采集腦脊液和血液標(biāo)本，檢測(cè)4組的Axl質(zhì)量濃度：HC組 （71.18±42.74）ng/mL; DC組（81.75±45.66）ng/mL; RIA組（107.30±41.49）ng/mL;UIA組（54.90±31.86）ng/mL（圖2A）。單因素方差分析顯示，與HC組相比，RIA組的Axl質(zhì)量濃度顯著增加（q=4.254， P<0.05）;DC組和UIA組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。雖然RIA組Axl的均數(shù)略高于DC組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。血漿中的Axl質(zhì)量濃度比腦脊液高10倍以上，但是4組的變化趨勢(shì)與腦脊液中定量結(jié)果基本一致。血漿中Axl質(zhì)量濃度分別為：HC組（804.5±345.1）ng/mL; DC組（976.0±402.6）ng/mL; RIA組（1252.0±601.4）ng/mL;UIA組（835.9±494.2）ng/mL（圖2B）。單因素方差分析顯示，與HC組和UIA組相比，RIA組Axl質(zhì)量濃度顯著增加（q=4.254和3.956， P<0.05）;但與DC組相比，RIA組Axl的均數(shù)略高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Pearson相關(guān)性分析表明，血漿與腦脊液中的Axl質(zhì)量濃度顯著相關(guān)（P<0.01），相關(guān)性系數(shù)r²=0.774（圖3）。

最后，筆者利用ROC分析，評(píng)價(jià)CSF和血漿中Axl的質(zhì)量濃度作為候選的生物標(biāo)志物的靈敏度和特異度。CSF中Axl質(zhì)量濃度的ROC分析結(jié)果顯示，RIA能較好地和UIA區(qū)分，AUC為0.83，95%特異性時(shí)的靈敏度為60%，P<0.01;同時(shí)RIA也能夠較好地與HC區(qū)分，AUC為0.732 5，但95%特異度時(shí)的靈敏度僅為15%，P<0.05（表4）。血漿中Axl質(zhì)量濃度的ROC分析結(jié)果顯示，RIA能夠較好地與HC區(qū)分，AUC為0.72， 95%特異度時(shí)的靈敏度為40%，P<0.05。同時(shí)RIA也能夠較好地與UIA區(qū)分，AUC為0.705， 95%特異度時(shí)的靈敏度為25%，P<0.05（表5）。

3 討論

蛋白質(zhì)的糖基化是最重要的翻譯后修飾之一，目前發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)中有一半以上有糖基化修飾[11]。尤其是存在于細(xì)胞外環(huán)境的蛋白如各種體液、分泌蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白等。并且，糖基化修飾對(duì)蛋白質(zhì)的功能有重要影響，如蛋白質(zhì)的折疊和運(yùn)輸?shù)萚12];絲氨酸、蘇氨酸殘基的乙酰氨基葡萄糖化與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)[13];蛋白質(zhì)的糖基化程度以及糖鏈結(jié)構(gòu)的異常變化常常與腫瘤等疾病相關(guān)[14-15];參與免疫或炎癥反應(yīng)的幾乎所有的關(guān)鍵性分子都是糖蛋白[16]。筆者在4組人CSF中鑒定的294個(gè)蛋白中有142個(gè)蛋白有明確的糖基化修飾位點(diǎn)，并包含了各種形式的糖基化修飾。另外，132個(gè)蛋白在數(shù)據(jù)庫中明確注釋為細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、分泌蛋白或是細(xì)胞膜相關(guān)蛋白。其余的蛋白大部分定位不明。

本研究一共鑒定了116個(gè)在RIA和（或）UIA中發(fā)生特異改變的蛋白，其功能涉及免疫與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞黏附和細(xì)胞外基質(zhì)的組成、重建與降解等，均與IA的形成和破裂相關(guān)[17-18]。在這發(fā)生改變的116個(gè)蛋白中，既有原來已經(jīng)有報(bào)道的與IA或其他動(dòng)脈瘤如腹主動(dòng)脈瘤相關(guān)的蛋白，如蛋白酶抑制劑α2微球蛋白（α2-microglobin）;也有在血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷修復(fù)和再生等過程中發(fā)揮重要作用的蛋白，如色素上皮衍生因子（Pigment epithelium-derived factor，PEDF））和Axl等。

Axl最初在腫瘤細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，在各種細(xì)胞中（如血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等）都有廣泛表達(dá)，并且在許多慢性疾病中有表達(dá)增高或活性增加[19-20]。它的兩個(gè)主要配體是生長(zhǎng)休止特定蛋白6（growth-arrest-specific protein 6， Gas6）和蛋白S（protein S）。Axl介導(dǎo)的信號(hào)通路在各種類型細(xì)胞的存活、生長(zhǎng)、聚集、遷移以及抗炎癥反應(yīng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。目前認(rèn)為，Axl信號(hào)通路主要有四種激活形式：（1）配體（聚化，引起細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的自身磷酸化，使得Axl能與PI3K、PLC、Grb2等結(jié)合，調(diào)節(jié)細(xì)胞的存活和增殖等[19]。Gas6/Axl信號(hào)通路能夠通過激活SHP-2（Src homolog 2 domain containing protein tyrosine phosphatase 2）抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2的激活[21-22]。（2）兩個(gè)相鄰細(xì)胞的Axl受體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域可以互相結(jié)合而激活，但不依賴其酪氨酸激酶活性。（3）配體非依賴的Axl二聚化和自身磷酸化激活。有研究報(bào)道，活性氧在血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）中通過Gas6不依賴的方式促進(jìn)Axl的磷酸化，這種方式在氧化應(yīng)激或Axl受體過量表達(dá)的病理情況下更有意義[23]。（4） Gas6與Axl 結(jié)合后還可導(dǎo)致Axl的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域被剪切，形成可溶性的sAxl-Gas6復(fù)合物，而抑制配體依賴的激活信號(hào)。Gas6/Axl信號(hào)通路在生理性的固有免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，干擾素α/β受體能激活Gas6/Axl信號(hào)通路，通過激活促炎信號(hào)的抑制因子如Twist等進(jìn)而抑制Toll樣受體和細(xì)胞因子發(fā)揮抗炎作用[24]。但是，在乳腺癌中卻發(fā)現(xiàn)抑制Axl降低了促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。可見，在病理?xiàng)l件下，Axl依賴的信號(hào)在炎癥中可能有不同于生理穩(wěn)態(tài)中的調(diào)節(jié)作用。Gas6/Axl信號(hào)通路還在心血管系統(tǒng)尤其在病理狀態(tài)下發(fā)揮重要作用。在Axl基因敲除的小鼠中發(fā)現(xiàn)Axl在血管重建中發(fā)揮作用[22]。VSMC損傷時(shí)，能通過自分泌機(jī)制誘導(dǎo)多種生長(zhǎng)因子（包括PDGF和Gas6）以及生長(zhǎng)因子受體（包括PDFGR和Axl）的表達(dá)，Gas6/Axl能激活PI3K/Akt促進(jìn)VSMC和內(nèi)皮細(xì)胞的存活。有研究發(fā)現(xiàn)，Gas6的血漿濃度與腹主動(dòng)脈瘤的大小呈正相關(guān)而與sAxl則呈負(fù)相關(guān)，提示Axl信號(hào)可能與其發(fā)病機(jī)制相關(guān)，而且血漿中的Gas6/sAxl的比例可作為該病的生物標(biāo)志物[25]。本研究發(fā)現(xiàn)Axl特異性地在RIA的CSF和血漿中增高，提示Axl可能成為RIA的生物標(biāo)志物，而且Axl依賴的信號(hào)通路可能在IA的形成和破裂中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。

總之，本研究在人CSF和血漿中的蛋白質(zhì)組學(xué)定量研究，發(fā)現(xiàn)Axl可成為非常有前景的預(yù)測(cè)IA破裂的生物標(biāo)志物，并且深入研究Axl介導(dǎo)的信號(hào)通路在IA形成和破裂的作用有助于揭示IA的發(fā)病機(jī)制和尋找新的治療靶點(diǎn)。

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