薛雅光　薛雅峰

（1 吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130033；2 吉林省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，吉林 長春 130062）

HPLC法同時(shí)測(cè)定康艾注射液中人參皂苷Rg1、Re的含量

薛雅光1薛雅峰2

（1 吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130033；2 吉林省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，吉林 長春 130062）

目的 采用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定康艾注射液中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的含量。方法 采用Zorbax Extend C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水（19∶81），流速為0.8mL/min，檢測(cè)波長203 nm，柱溫為40 ℃。結(jié)果 人參皂苷Rg1進(jìn)樣量在0.2524～5.048 μg范圍內(nèi)、人參皂苷Re進(jìn)樣量在0.3052～6.104 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；平均回收率（n=6）人參皂苷Rg1、Re分別為98.8%和96.6%，RSD分別為1.10%和0.80%。結(jié)論 本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可為康艾注射液的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

康艾注射液；人參皂苷Rg1；人參皂苷Re；高效液相色譜法

康艾注射液由人參、黃芪，苦參素等三味，經(jīng)加工提取制成。具益氣扶正，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。用于原發(fā)性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤的治療。方中人參、黃芪均采用原藥材，對(duì)其含量及質(zhì)量控制十分重要［1-4］。人參為細(xì)貴藥，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re為其主要成分，根據(jù)要求正文中采用高效液相色譜法對(duì)人參中的人參皂苷Rg1和人參皂苷Re進(jìn)行含量測(cè)定，作為其制劑內(nèi)在質(zhì)量控制的指標(biāo)。方法簡(jiǎn)便，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1試藥：人參皂苷Rg1對(duì)照品（由中國藥品生物制品檢驗(yàn)所提供）批號(hào)：110703-200322，人參皂苷Re對(duì)照品（由中國藥品生物制品檢驗(yàn)所提供）批號(hào)：110754-200320規(guī)格：供含量測(cè)定用。甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

1.1.2主要儀器：高效相色譜儀2010A（日本島津）；紫外-可見分光光度計(jì)UV-2550（日本島津）

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件：色譜柱：采用Zorbax Extend C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水（19∶81），流速為0.8mL/min，檢測(cè)波長203 nm，柱溫為40 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

1.2.2測(cè)定波長的選擇：取人參皂苷Rg1和人參皂苷Re對(duì)照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-2550紫外-可見分光光度計(jì)在190～400 nm范圍內(nèi)掃描，并參考2010年版藥典人參項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，因此選用203 nm為檢測(cè)波長（圖1、2）。

圖1　人參皂苷Rg1紫外光譜圖

圖2　人參皂苷Re紫外光譜圖

1.2.3對(duì)照品溶液制備：精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL各含0.25 mg的混合溶液，即得。

1.2.4供試品溶液的制備：精密量取裝量差異項(xiàng)下的本品25mL，置分液漏斗中，用氯仿提取2次，每次20mL，棄去氯仿液，水液用水飽和正丁醇提取5次，每次20mL，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗滌3次，每次30mL，棄去堿液，再用正丁醇飽和的水輕輕搖洗3次，每次30mL，棄去水液，取正丁醇液蒸干。殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.5陰性樣品溶液的制備：按處方（不含人參藥材）比例及生產(chǎn)工藝配制陰性，同1.2.4項(xiàng)下方法操作，制得陰性樣品溶液。

精密吸取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品溶液，供試品溶液，陰性樣品10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照色譜在與人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無干擾峰（圖3）。

圖3　HPLC色譜圖（A對(duì)照品，B供試品，C陰性樣品）

1.2.5線性關(guān)系考察：分別精密吸取人參皂苷Rg1（0.2524 mg/mL）和人參皂苷Re（0.3052 mg/mL）對(duì)照品混合溶液1、3、5、10、20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，人參皂苷Rg1的回歸方程為Y=1786.91+333899.53x，r=0.9997。結(jié)果表明：人參皂苷Rg1進(jìn)樣量在0.2524～5.048 μg，人參皂苷Re的回歸方程為Y= 12914.38+305055.79x，r=0.9996。結(jié)果表明：人參皂苷Re進(jìn)樣量在0.3052～6.104 μg。與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

1.2.6精密度試驗(yàn)：取同一供試品溶液（批號(hào)：070308），重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果人參皂苷Rg1和人參皂苷Re峰面積的RSD（n=6）分別為0.23%和0.56%，表明精密度良好。

1.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液（批號(hào)：070308），分別在0、5、14、18、24 h測(cè)定，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re峰面積的 RSD（n=5）分別為0.35%和0.77%。說明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.2.8重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批號(hào)（批號(hào)：070308）的樣品共6份，按前述制備供試品方法制備，依法測(cè)定。結(jié)果人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量平均值（n=6）RSD分別為0.36%和0.37%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.2.9回收率試驗(yàn)：精密稱取同正文方法測(cè)定的已知含量的供試品（批號(hào)：070308。含量：人參皂苷Rg10.0707 mg/mL，人參皂苷Re0.0586 mg/mL）6份，每份約12.5mL，置分液漏斗中，分別精密加入含人參皂苷Rg10.03915 mg/mL，人參皂苷Re0.0413 mg/mL的混合水溶液20mL6份，按含量測(cè)定方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1、2。

如表1所示，測(cè)得人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的平均回收率為98.8%和96.6%，RSD分別為1.10%和0.80%。結(jié)果表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度較高。

2　結(jié) 果

分別對(duì)不同批次的康艾注射液中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表3。

表1　人參皂苷Rg1回收率試驗(yàn)

表2　人參皂苷Re回收率試驗(yàn)

表3　三批樣品片中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量測(cè)定結(jié)果

3　討 論

3.1檢測(cè)波長的選擇：對(duì)人參皂苷Rg1和人參皂苷Re在190～400 nm波長進(jìn)行光譜掃描，根據(jù)掃描結(jié)果，并參考2010年版中國藥典中人參測(cè)定項(xiàng)下的檢測(cè)波長，故選擇203 nm為測(cè)定波長。

3.2供試品制備方法的選擇：分別采用一法：本品原液為供試液；二法：采用通過D101大孔吸附樹脂柱，加水50mL洗脫，棄去水液，用氨試液2mL洗脫，加水洗至中性，棄去水液，加20%乙醇50mL洗脫，棄去洗脫液，用80%乙醇80mL洗脫，收集洗脫液蒸干，定容至5mL；三法，精密量取裝量差異項(xiàng)下的本品25mL，置分液漏斗中，用氯仿提取2次，每次20mL，棄去氯仿液，水液用水飽和正丁醇提取5次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次，每次30mL，棄去堿液，取正丁醇液蒸干。定容至5mL；四法，精密量取裝量差異項(xiàng)下的本品25mL，置分液漏斗中，用氯仿提取2次，每次20mL，棄去氯仿液，水液用水飽和正丁醇提取5次，每次20mL，合并正丁醇液蒸干。定容至5mL；五法，用氯仿提取2次，每次20mL，棄去氯仿液，水液用水飽和正丁醇提取5次，每次20mL，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗滌3次，每次30mL，棄去堿液，再用正丁醇飽和的水輕輕搖洗3次，每次30mL，棄去水液，取正丁醇液蒸干。定容至5mL量瓶中。試驗(yàn)結(jié)果表明，不用堿洗脫陰性有干擾。氨洗后可除掉部分異性的干擾。只有方法五中用氫氧化鈉洗滌才能徹底除掉陰性的干擾。故列方法五為正式方法。

3.3流動(dòng)相的選擇：參照《中國藥典》2005年版一部人參［含量測(cè)定］項(xiàng)下，以乙腈—水（19∶81）為流動(dòng)相。

［1］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：1部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283-284.

［2］ 黃立蘭，程文勝，陳耀娣，等.人參指紋圖譜的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2013，44（2）：241-246.

［3］ 林美舒，劉海宇，劉金平，等.人參皂苷的化學(xué)研究進(jìn)展［J］.人參研究，2011（4）：43-46.

［4］ 王艷杰，越皓，王淑敏，等.高分離度快速液相色譜法檢測(cè)人參皂苷的研究［J］.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（6）：824-826.

R284.1

B

1671-8194（2015）10-0078-02