馬小杰　韓振國*

（1 山西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院 普通外科，山西 太原 030000；2 山西醫(yī)科大學(xué)附屬山西大醫(yī)院 普通外科，山西 太原 030000）

結(jié)直腸癌組織中Nob1基因的表達(dá)及臨床意義

馬小杰1韓振國2*

（1 山西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院 普通外科，山西 太原 030000；2 山西醫(yī)科大學(xué)附屬山西大醫(yī)院 普通外科，山西 太原 030000）

目的 研究Nob1的表達(dá)與結(jié)直腸癌的相關(guān)性，從臨床分期、分化程度等角度分析結(jié)直腸癌中Nob1的表達(dá)情況。方法 運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察和分析60例結(jié)直腸癌組織Nob1的表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 按結(jié)直腸癌的Duck分期，各分期的陽性率分別為75.0%，72.7%，70.6%，77.8%，χ2值為0.178，P值為0.981，即與Duck分期無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；按結(jié)直腸癌分化程度分組，高、中、低陽性率分別為41.7%，76.7%，88.9%，χ2值為7.756，P值為0.021，即與分化程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 Nob1蛋白的表達(dá)水平在結(jié)直腸癌組織中上調(diào)，與癌組織細(xì)胞的分化程度有關(guān)。

Nob1基因；結(jié)直腸癌；免疫組化

結(jié)直腸癌是一種消化系統(tǒng)中較為常見的惡性腫瘤，從病因分析可知半數(shù)以上來自腺瘤癌變。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，同時(shí)存在的分子事件基因表達(dá)被大家逐漸認(rèn)識，直腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)步驟、多階段、多基因參與的遺傳型疾病。近年來的研究表明，腫瘤的發(fā)生與發(fā)展不僅決定于腫瘤細(xì)胞的增殖，而且與腫瘤細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)［1-3］。

Nob1基因是最近新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)基因，其主要編碼的是一個(gè)多功能的蛋白質(zhì)，參與并調(diào)節(jié)核糖體40 S小亞基組裝、26 S蛋白酶體合成與裝配以及細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)。因此，若Nob1的表達(dá)發(fā)生變化則會通過影響核糖體和蛋白酶體在細(xì)胞中的作用而影響蛋白質(zhì)的合成與降解，從而引起腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移［4-5］。因此本次研究應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測結(jié)直腸正常組織與癌組織中Nob1基因的表達(dá)情況，從而探討結(jié)直腸癌組織中Nob1的表達(dá)臨床意義。

1　資料與方法

1.1病例資料：收集山西大醫(yī)院2012年7月至2013年9月結(jié)直腸癌手術(shù)切除并資料完整60例病理診斷為結(jié)直腸癌的石蠟包埋標(biāo)本，并確認(rèn)術(shù)前未經(jīng)放化療治療。其中男34例，女26例，平均年齡63歲（43～78歲），腫瘤部位：結(jié)腸29例，直腸31例。Duck分期：A期12例，B期22例，C期17例，D期9例。大腸腺癌分化程度（WHO）：高分化12例，中分化30例，低分化18例。

1.2實(shí)驗(yàn)主要試劑：免疫組化染色顯色試劑（北京中杉金橋）。

1.3方法免疫組織化學(xué)染色（SP法）：一抗1∶200稀釋，磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗做陰性對照。結(jié)果判定：以組織細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性。每張切片在顯微鏡（×400）下取五個(gè)不同的區(qū)域，每個(gè)區(qū)域選取約200個(gè)細(xì)胞，根據(jù)每個(gè)視野中的陽性細(xì)胞所占比例與其顯色強(qiáng)度兩指標(biāo)的乘積作為該視野的得分。評分標(biāo)準(zhǔn)為：陽性細(xì)胞比例：＜25%（0分），25%～50%（1分），51%～75%（2分），＞75%（3分）；顯色強(qiáng)度：未著色（0分）、淺黃色（1分）、棕黃色（2分）、棕褐色（3分）。每張切片隨即取5個(gè)視野。分為0～2分（-），3～5分（+），6-8分（++），＞8分（+++）。分析Nob1與癌組織病理特征相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS16.0軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。免疫組織化學(xué)染色（SP法）采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

隨機(jī)抽取手術(shù)切除60例結(jié)直腸癌組織切片，并對其進(jìn)行免疫組化檢驗(yàn)。檢測結(jié)果為：11例（+++），19例（++），14例（+），16例（-），陽性表達(dá)率為73.3%。Duck分期：A期陽性9例，陽性率為75.0%；B期16例，陽性率為72.7%；C期12例，陽性率為70.6%；D期7例，陽性率為77.8%，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)直腸腺癌分化程度（WHO）：高分化5例，陽性率為41.7%；中分化23例，陽性率為76.7%，低分化16例，陽性率為88.9%。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析Nob1在結(jié)直腸癌表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果為：Nob1蛋白的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的Duck分期無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與分化程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1　Nob1在結(jié)直腸癌表達(dá)情況與臨床病理特征

3　討 論

Nob1基因編碼的是一個(gè)多功能的蛋白質(zhì)，該蛋白的N端含有一個(gè)PIN結(jié)構(gòu)域，C端含有一個(gè)ZNRD1結(jié)構(gòu)域。Nob1通過泛素-蛋白酶體途徑（ubiquity-proteasome pathway，UPP）參與細(xì)胞調(diào)節(jié)，而UPP是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解一條重要途徑，由泛素Ub、泛素活化酶E1、泛素結(jié)合酶E2s、泛素-蛋白鏈接酶E3s、26S蛋白酶體和泛素解離酶等組成。Nob1蛋白通過促進(jìn)26S蛋白酶體成熟，可以高效的選擇性的降解細(xì)胞內(nèi)某些具有生物活性的蛋白分子，特別是一些短壽的參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的蛋白分子，以及已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的癌基因和抑癌基因所表達(dá)的產(chǎn)物等，因而可以起到控制細(xì)胞的生長及凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞生長、擴(kuò)散的作用，所以Nob1基因在癌組織發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色。此外，Nob1還可以通過促進(jìn)核糖體18S rRNA成熟而影響蛋白質(zhì)的合成，以及可能通過ZNRD1結(jié)構(gòu)域而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期［6］。

目前已發(fā)現(xiàn)的核內(nèi)原癌基因有c-myc、p53、E1A等，這些基因所表達(dá)的蛋白分子已經(jīng)被證明是通過泛素化途徑降解的?；贜ob1在泛素依賴的蛋白水解過程中的重要作用，可以預(yù)測Nob1可能參與某些原癌蛋白的降解，并與腫瘤的發(fā)生具有一定關(guān)系。根據(jù)最新國外研究結(jié)果顯示：如果運(yùn)用RNA干擾技術(shù)在HEY和SKOV3使卵巢癌組織細(xì)胞上的Nob1基因有效沉默，則能降低卵巢癌組織細(xì)胞的增殖能力，并使癌細(xì)胞阻滯在G1期。因此，Nob1可能是一個(gè)原癌基因，其表達(dá)的上調(diào)可能促進(jìn)了卵巢癌等腫瘤的惡性增殖［7-9］。

本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測60例Nob1在結(jié)直腸癌表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系時(shí)同時(shí)發(fā)現(xiàn)，在癌組織陽性率很高且與結(jié)直腸癌組織的分化程度呈正相關(guān)，提示Nob1隨著結(jié)直腸癌組織的生長而表達(dá)也在增強(qiáng)。因此，Nob1在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能是一個(gè)重要的基因，有望成為結(jié)直腸癌的新腫瘤標(biāo)志物，但關(guān)于其具體的機(jī)制需要進(jìn)一步的研究。

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1671-8194（2015）10-0160-02

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