盧萬朋

（遼寧省大連市大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，遼寧 大連 116001）

非小細(xì)胞癌組織和血清中表皮生長因子受體突變一致性

盧萬朋

（遼寧省大連市大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，遼寧 大連 116001）

目的 對非小細(xì)胞癌（NSCLC）組織和血清中表皮生長因子受體（EGFR）突變的一致性進(jìn)行分析研究。方法 抽取90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標(biāo)本，采用直接測序法檢測EGFR基因中第19和21外顯子的突變狀態(tài)，分析腫瘤組織和EGFR中基因突變的一致性。結(jié)論 腫瘤組織總突變檢測率為32.2%，血清總突變檢出率5.6%。直接測序法檢測血清EGFR活化性突變的特異度為100%，靈敏度為17.2%，血清和腫瘤組織EGFR活化性突變的一致率為5.6%。結(jié)論 血清的突變檢出率明顯低于腫瘤組織，腫瘤組織可作為評價(jià)NSCLC患者EGFR基因突變狀態(tài)的依據(jù)。

非小細(xì)胞癌；腫瘤組織；表皮生長因子；基因突變

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，近年來，其發(fā)生率和病死率均明顯上升，多項(xiàng)研究表明［1-2］，NSCLC患者表皮生長因子受體突變均發(fā)生在酪氨酸激酶域ATP結(jié)合域附近（第18～21外顯子），約90%EGFR基因突變集中在第19和2l外顯子，第18和20外顯子為耐藥性突變，第19和21外顯子為活化性突變，但部分晚期肺癌患者因腫瘤部位取材困難很難獲得足量腫瘤組織用于基因檢測。由于EGFR突變基因具有腫瘤體細(xì)胞遺傳的特性，因而在血液游離DNA中可能會(huì)檢測到相同的遺傳改變。各國學(xué)者采用多種方法進(jìn)行研究，至今為止結(jié)論尚未統(tǒng)一，本組研究抽取90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標(biāo)本，對NSCLC組織和EGFR突變的一致性進(jìn)行分析研究，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：隨機(jī)抽取2010年5月至2014年5月90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標(biāo)本，所有患者均經(jīng)臨床病理組織檢查確診，未接受過靶向治療及輔助化療，患者病理分型參考2004年WHO肺癌組織分類［2］，臨床分期參考IASLC肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，取材均符合倫理要求。

1.2方法：血清標(biāo)本均在手術(shù)前抽取全血，腫瘤組織經(jīng)手術(shù)切除后浸泡于液氮中，將腫瘤標(biāo)本和相匹配的血清標(biāo)本保存于一80 ℃冰箱中待測。選用DNAmini Kit 51304試劑盒（Qiagen），直接測序所用引物和Mix（大連寶生物工程有限公司）。ABI 3730XL，DxS EGFR29 Mutation Kit，Lightcycler 480，PCR 8聯(lián)反應(yīng)條輔助器。所有標(biāo)本均經(jīng)DNA提取試劑盒提取，步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。將所提取的DNA采用超微量分光光度計(jì)檢測，保存于一20 ℃冰箱中。PCR擴(kuò)增和直接測序：PCR總反應(yīng)體系為50μL，Mix 25μL，上游引物、下游引物均2μL，去離子水19μL，DNA模板2μL，擴(kuò)增條件：93 ℃預(yù)變性2min，94 ℃30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃中30 s，72 ℃ 2min，共35個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)設(shè)置內(nèi)參照GAPDH，內(nèi)參照擴(kuò)增條件：93 ℃預(yù)變性3min，94 ℃30 s，59 ℃ 30 s，72 ℃中30 s，72 ℃ 3min，共35個(gè)循環(huán)。去PCR產(chǎn)物5μL，采用3%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，Gel-Pro Analyzer凝膠圖像分析分析目的基因。對顯示目的基因的PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測序。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

腫瘤組織總共檢出29例EGFR基因突變，總突變檢測率為32.2%（29/90），其中19-del缺失16例（55.2%），L858R點(diǎn)突變13例（44.8%）；血清共檢測出5例EGFR突變，均為L858R點(diǎn)突變，突變檢出率5.6%（5/90）。

直接測序法檢測血清EGFR活化性突變的特異度為100%（61/61），靈敏度為17.2%（5/29），陽性預(yù)測價(jià)值100%（5/5），陰性預(yù)測價(jià)值71.8%（61/85）。血清和腫瘤組織EGFR活化性突變的一致率為5.6%（5/90），具體見表1。

表1　血清及腫瘤組織EGFR活化性突變一致率

3　討 論

近年來，多種靶向藥物被廣泛應(yīng)用于NSCLC的臨床治療中。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，對確診的EGFR基因第19或21外顯子突變的NSCM患者行一線藥物化療和厄洛替尼治療，患者平均進(jìn)展生存期分別為4.6、13.1個(gè)月，提示對NSCLC患者進(jìn)行EGFR基因第19、21外顯子突變狀態(tài)的檢測對指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。本組研究抽取90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標(biāo)本，采用直接測序法檢測EGFR基因中第19、21外顯子的突變狀態(tài)，結(jié)果顯示，腫瘤組織總突變檢測率為32.2%，血清總突變檢出率5.6%，血清的突變檢出率明顯低于腫瘤組織，與張靜等研究結(jié)論吻合［3］，血清和腫瘤組織EGFR活化性突變的一致率為5.6%，此結(jié)果與鄒敏等人研究報(bào)道一致［4］，此外，且靈敏度及特異度也低于腫瘤組織，說明在評價(jià)NSCLC患者EGFR基因突變狀態(tài)方面，腫瘤組織檢測更具優(yōu)勢。

［1］ 張志紅，倪琛琛，于敏，等.105例非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體基因突變分析［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，46（8）：740-742.

［2］ 宋國紅，邸立軍，任軍，等.中國非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變的研究［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2008，16（4）：553-556.

［3］ 張靜，梁智勇，曾碹，等.應(yīng)用蝎形探針擴(kuò)增組織突變系統(tǒng)檢測非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與病理改變的關(guān)系［J］.中華病理學(xué)雜志，2008，37（5）：294-299.

［4］ 鄒敏，周韶璋.非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織和血清表皮生長因子受體第19、21外顯子的檢測及其臨床特征的分析［J］.中國病理生理雜志，2013，29（5）：839-842.

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1671-8194（2015）10-0213-01