孫 越，張彥龍，*，丁智慧，趙丹丹，雷 虹，劉振東，黃 悅

（1.黑龍江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，微生物黑龍江省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150080；2.中科院昆明植物研究所，植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650204；3.西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，西藏林芝860000）

不同方法提取西藏黑木耳中揮發(fā)性成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析

孫 越1，張彥龍1，*，丁智慧2，趙丹丹1，雷 虹1，劉振東3，黃 悅1

（1.黑龍江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，微生物黑龍江省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150080；2.中科院昆明植物研究所，植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650204；3.西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，西藏林芝860000）

為了探討不同方法提取西藏黑木耳中的揮發(fā)性成分的化學(xué)組成，采取水蒸氣蒸餾法和有機(jī)溶劑浸提法對(duì)黑木耳的揮發(fā)性成分進(jìn)行提取，并采用GC-MS方法對(duì)提取的揮發(fā)性成分進(jìn)行鑒定。水蒸氣蒸餾法中鑒定了61個(gè)化學(xué)成分，主要成分是棕櫚酸、亞油酸等；二氯甲烷浸提法中鑒定了36個(gè)化學(xué)成分，主要成分是麥角甾醇、5，8-麥角甾二烯-3β-醇等；乙醚浸提法中鑒定了26個(gè)化學(xué)成分，主要成分是麥角甾醇、亞油酸。

西藏，黑木耳，揮發(fā)性成分，水蒸氣蒸餾法，氣相色譜質(zhì)譜法

黑木耳屬擔(dān)子菌亞門，擔(dān)子菌綱，木耳目，木耳科，木耳屬，別名為木耳、黑木耳、細(xì)木耳。它是一種藥食兼用菌，也是我國的傳統(tǒng)食品和出口貿(mào)易食品，具藥食兩用價(jià)值，有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固本之功效［1］。我國人民采食、利用黑木耳已有上千年的歷史。黑木耳為西藏林芝地區(qū)袋料地栽的大型食藥性真菌。西藏林芝地區(qū)位于青藏高原東南部，森林覆蓋率46.1%，是西藏乃至我國主要的原始林集中分布區(qū)，具有豐富的生物多樣性，獨(dú)特的森林植被類型，特殊的分布規(guī)律，罕見的生物生產(chǎn)力和保持完好的原始景觀類型［2］。木耳，祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，木耳有補(bǔ)氣益肺功能，活血補(bǔ)血，可用于氣虛血虧，肺虛咳嗽，高血壓及血管硬化等疾病的治療。木耳還具有增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤的免疫功能，可預(yù)防多種癌癥。近代醫(yī)學(xué)表明，黑木耳在人體保健方面有許多重要功能［3］，但有關(guān)其化學(xué)成分的報(bào)道很少。目前，黑木耳已經(jīng)報(bào)道很多生物活性，包括抗凝血活性［4］、抗腫瘤活性［5］、低血糖癥［6］、低膽固醇血癥［7］。目前已知的有關(guān)黑木耳的研究，比較側(cè)重于黑木耳中所含的多糖成分研究，未見國內(nèi)外有關(guān)于黑木耳中揮發(fā)性成分研究的報(bào)道。所以本文在研究黑木耳化學(xué)成分的同時(shí)，也著手研究黑木耳的揮發(fā)性成分，擬為黑木耳的進(jìn)一步開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)首次采用水蒸氣蒸餾法和浸提的方法對(duì)西藏黑木耳中的揮發(fā)性成分進(jìn)行提取，并且有機(jī)溶劑提取時(shí)采用兩種不同的試劑進(jìn)行萃取，利用GC-MS方法分析與鑒定其中的揮發(fā)性成分。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黑木耳 西藏林芝米林縣幫仲菌類有限公司；干黑木耳 西藏林芝地區(qū)科技援藏項(xiàng)目培育黑木耳；乙醚、二氯甲烷 分析純，利安隆博華（天津）醫(yī)藥化學(xué)有限公司。

HH-S型電熱恒溫水浴鍋 鞏義市予華儀器廠；CL-3型恒溫加熱磁力攪拌器 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；Rotavapor R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士BUCHI有限公司；HP6890GC/5973MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國Agilent Technologies公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理方法 將干黑木耳用研缽搗碎約至0.3cm塊狀，置于避光處待用。

1.2.2 揮發(fā)油的制取

1.2.2.1 水蒸氣蒸餾法 稱取100g黑木耳碎渣置于2000m L圓底燒瓶中，加入蒸餾水800m L，用蒸發(fā)回流裝置保持微沸4h；用200m L乙醚收集揮發(fā)油，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醚蒸干，得到66mg揮發(fā)油，計(jì)算得率為0.066%。樣品未經(jīng)處理，直接進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜分析。

1.2.2.2 浸提法 兩份各20g黑木耳搗碎分別用200m L乙醚和200m L二氯甲烷浸泡24h過濾，溶劑用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后分別得到乙醚（得率為0.23%）和二氯甲烷（得率為0.96%）揮發(fā)性成分。這些樣品未經(jīng)處理，直接進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜分析。

1.3 揮發(fā)性成分鑒定

1.3.1 GC條件 HP-5MS石英毛細(xì)血管柱（30mm× 0.25mm×0.25μm）；柱溫：起始溫度80℃，程序升溫5℃/m in至260℃，保持60m in；柱流量為1.0m L/m in；進(jìn)樣口溫度250℃；柱前壓100kPa；進(jìn)樣量1.0μL；分流比20∶1；載氣為高純氦氣。

1.3.2 MS條件 電離方式EI；電子能量70eV；傳輸線溫度250℃；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；質(zhì)量范圍35～500m/z；采用wiley7n.l標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索定性。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用面積歸一法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 水蒸氣蒸餾法的結(jié)果

采用水蒸氣蒸餾法4h得到揮發(fā)油直接進(jìn)行GCMS分析，得到相應(yīng)的質(zhì)譜總離子流圖見圖1所示，根據(jù)譜庫檢索結(jié)果和人工質(zhì)譜解析等手段，鑒定出的黑木耳的揮發(fā)性成分見表1。從表1可以看出，從黑木耳中鑒定出61種揮發(fā)性成分，主要成分為棕櫚酸、亞油酸。

圖1 水蒸氣蒸餾法所得西藏黑木耳揮發(fā)性成分的GC-MS檢測結(jié)果Fig.1 The result of GC-MS of volatile components of Auricularia auricular in Tibet by steam distillation extraction

表1 水蒸氣蒸餾法所得西藏黑木耳揮發(fā)性成分的GC-MS檢測結(jié)果Table 1 The result of GC-MSof volatile components of Auricularia auricular in Tibet by steam distillation extraction

續(xù)表

2.2 浸提法的結(jié)果

浸提法得到揮發(fā)性樣品鑒定其中36個(gè)成分，主要成分為5，8-麥角甾二烯-3β-醇、麥角甾醇，見表2和圖2。

圖2 二氯甲烷浸提法所得西藏黑木耳揮發(fā)性成分的GC-MS檢測結(jié)果Fig.2 The result of GC-MSof volatile components of Auricularia auricular by ultrasonic extraction

表2 二氯甲烷和乙醚浸提法所得西藏黑木耳揮發(fā)性成分的GC-MS檢測結(jié)果Table 2 The result of GC-MSof volatile components of Auricularia auricular in Tibet by ultrasonic extraction

續(xù)表

3 討論

水蒸氣蒸餾法得到的黑木耳揮發(fā)性成分有61種，含量最高是棕櫚酸占總揮發(fā)性成分的16.79%，其次是亞油酸占總揮發(fā)性成分的11.94%，再者是油酸占總揮發(fā)性成分的7.46%；而有機(jī)溶劑浸提黑木耳中的揮發(fā)性成分效果一般，二氯甲烷浸提得到36種揮發(fā)性成分，含量最高是麥角甾醇，占總揮發(fā)性成分的24.04%；其次是5，8-麥角甾二烯-3-醇占總揮發(fā)性成分的21.35%。乙醚浸提得到26種，含量最高是麥角甾醇，占總揮發(fā)性成分的21.61%；其次是亞油酸，占總揮發(fā)性成分的20.03%。

4 結(jié)論

首次采用GC-MS方法對(duì)黑木耳提取的揮發(fā)性成分進(jìn)行鑒定，水蒸氣蒸餾法鑒定揮發(fā)性成分61種，有機(jī)溶劑浸提法鑒定揮發(fā)性成分36種，其中包含兩種方法都能鑒定出來的揮發(fā)性成分五種，故本實(shí)驗(yàn)共鑒定揮發(fā)性成分92種。黑木耳作為西藏林芝地區(qū)袋料地栽的大型食藥性真菌有著較好的降血糖，降血壓等作用。黑木耳中揮發(fā)性成分對(duì)黑木耳中活性成分的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、體內(nèi)分布進(jìn)而活性水平都可能產(chǎn)生重要影響。故本文探討黑木耳中揮發(fā)性成分和含量將對(duì)深入研究黑木耳有重要意義。

［1］周國華，于國萍.黑木耳多糖降血脂作用的研究［J］.現(xiàn)代食品科技，2005，21（1）：46-48.

［2］徐濟(jì)德，郎奎建.西藏林芝地區(qū)景觀生態(tài)格局分析［J］.林業(yè)資源管理，2004（10）：53-57.

［3］安東，李新勝，王朝川，等.黑木耳營養(yǎng)保健功能［J］.果菜與健康，2012（3）：51-55.

［4］Yoon Seon-Joo，Yu Myeong-Ae，Pyun Yu-Ryang，et al. TheNontoxic mushroom Auricularia auricular contains a polysaccharidewith anticoagulant activity mediated by antithrombin［J］. ThrombosisResearch，2003（112）：151-158.

［5］Takashi Mizuno，Hazime Saito，Tsuyosh Mizuno Nishitoba.Antitumor active substances from mushrooms［J］. Food ReviewsInternational，1995（11）：23-61.

［6］Hisanao Takeuchi，Puming He，Lau Yan Mooi. Reductiveeffect of hot-water extracts from woody ear（Auricularia auricularjudaeQuel）on food intake and blood glucose concentration ingenetically diabetic KK-AY mice［J］. Journal of Nutritional Scienceand Vitaminology，2004（50）：300-304.

［7］Cheung Chi Keung Peter. The hypocholesterolemic effect oftwo edible mushrooms：Auricularia auricular（tree - ear） andTremella fuciformis（white jelly -leaf） in hypercholesterolemicrats［J］. Nutrition Research，1996，16（10）：1721-1725.

GC-MS analysis of volatile components of Auricularia auricular in Tibet

SUN Yue1，ZHANG Yan-long1，*，DING Zhi-hui2，ZHAO Dan-dan1，LEIHong1，LIU Zhen-dong3，HUANG Yue1
（1.Province Key Laboratory of Microbiology，College of Life Science，Heilongjiang University，Harbin 150080，China；2.State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China，Kunming Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Kunming 650204，China；3.Agricultural and Animal Husbandry College of Tibet University，Linzhi860000，China）

In order to investigate chemical com positions of volatile components from Auricularia auricular in Tibet by means of different methods and different reagents，volatile components in Auricularia auricular was extracted by steam distillation extraction and organic solventultrasonic extraction.The compositions of volatile components were identified by gas chromatography-mass spectroscopy（GC-MS）.Sixty-one kinds of volatile compounds were identified by using steam distillation extraction，which were palmitic acid，linoleic acid.When the volatile components were extracted by dichloromethane solvent extraction，thirty-six kinds of volatile compounds could be ob tained，which were ergosterin，ergost-5，8-dien-3β-ol.When the volatile components were extracted by diethylether solvent extraction，twenty-six kinds of volatile compounds could be obtained，which were ergosterin，linoleic acid.

Tibet；Auricularia auricular；volatile components；steam distillation extraction；gas chromatog raphymass spectrometry（GC-MS）

TS207.3

A

1002-0306（2015）08-0063-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.08.004

2014－08－14

孫越（1989-），女，碩士研究生，研究方向：微生物學(xué)。

*通訊作者：張彥龍（1966-），男，博士研究生，教授，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)方面的研究。