北京維德維康生物技術(shù)有限公司（以下簡(jiǎn)稱“維德維康”）是一家專注于食品中有害化合物（農(nóng)獸藥、微生物、重金屬、非法添加物等）殘留快速檢測(cè)技術(shù)、動(dòng)物疫病快速診斷技術(shù)研究及相關(guān)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的中關(guān)村高新技術(shù)企業(yè)、國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)、國(guó)家火炬計(jì)劃重點(diǎn)高新技術(shù)企業(yè)和北京市專利示范單位。維德維康作為中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、國(guó)家獸藥安全評(píng)價(jià)中心的產(chǎn)業(yè)化基地，與中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心等權(quán)威機(jī)構(gòu)共建合作平臺(tái)，結(jié)合自身雄厚的科研力量，形成了一系列具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的關(guān)鍵技術(shù)、重點(diǎn)產(chǎn)品和創(chuàng)新工藝，擁有食品安全檢測(cè)抗原抗體資源近千種，供應(yīng)檢測(cè)試劑及設(shè)備千余種。

真菌毒素的危害

真菌毒素是由產(chǎn)毒真菌在適宜環(huán)境條件下產(chǎn)生有毒代謝的產(chǎn)物，廣泛存在于糧油食品和飼料中，是自然發(fā)生的最危險(xiǎn)的食品污染物之一。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織估算，全球每年約有25%的農(nóng)產(chǎn)品受到真菌毒素的污染，每年糧食及食品損失達(dá)到10億噸。在我國(guó)，真菌毒素的污染狀況同樣不容樂(lè)觀。根據(jù)國(guó)家糧食局不完全統(tǒng)計(jì)，每年真菌毒素污染造成的糧食損失累計(jì)約3100萬(wàn)噸，占糧食總產(chǎn)量的6.2%，相當(dāng)于陜西、甘肅、青海、寧夏、西藏5個(gè)省（自治區(qū)）全年糧食產(chǎn)量的總和。而糧油產(chǎn)品真菌毒素污染導(dǎo)致的應(yīng)急搶救和醫(yī)療、善后撫恤、畜禽因病死亡、病畜銷毀處理等間接損失更大。可以說(shuō)，我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素污染嚴(yán)重，已成為農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要限制因素之一，嚴(yán)重威脅著人類與動(dòng)物的健康。

現(xiàn)已查明自然界存在的真菌毒素有200多種，按真菌毒素的重要性及危害依次排列為：黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、單端孢霉烯族毒素、玉米赤霉烯酮。真菌毒素具有兩種毒性，一是致DNA損傷，嚴(yán)重者可致癌；二是細(xì)胞毒性，有破壞質(zhì)膜和細(xì)胞酶的作用。

對(duì)整個(gè)食品產(chǎn)業(yè)鏈而言，真菌毒素是一種“看不見(jiàn)的威脅”，能引起急、慢性中毒，損害肝臟、腎臟、神經(jīng)組織、造血組織等，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡。真菌毒素中的黃曲霉毒素和鐮刀菌素被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）和世界衛(wèi)生組織（WHO）列為自然發(fā)生的最危險(xiǎn)的食品污染物，具有強(qiáng)毒性和致癌性。黃曲霉毒素更被列為I級(jí)致癌物，是惡性腫瘤的主要誘因之一；鐮刀菌素中，以T-2毒素的毒性最強(qiáng)。

殘留限量

目前，世界上有100多個(gè)國(guó)家或地區(qū)已經(jīng)制定了食品和飼料中真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)與法規(guī)，近幾年歐盟等發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)逐漸提高了真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)各級(jí)政府十分重視真菌毒素的防控工作，農(nóng)業(yè)部、科技部相繼立項(xiàng)相關(guān)研究和污染調(diào)查，并分別在2005年和2011年發(fā)布和修訂了真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)，在一定程度上減少了真菌毒素對(duì)人類健康的危害。幾種常見(jiàn)霉菌毒素的殘留限量如表1。

主要檢測(cè)方法

食品中真菌毒素含量的檢測(cè)方法一直是制約真菌毒素與人類疾病研究進(jìn)展的關(guān)鍵，現(xiàn)有的真菌毒素典型檢測(cè)方法包括：高效液相色譜法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法、液質(zhì)聯(lián)用法等。隨著科技的進(jìn)步，也衍生出了其他各種檢測(cè)方法，如光化學(xué)衍生-高壓液相色譜法、電化學(xué)衍生-高壓液相色譜法、熒光光度法、液相色譜-三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法等。這些方法所用到的設(shè)備價(jià)格昂貴，樣品要經(jīng)過(guò)復(fù)雜的前處理，要求技術(shù)人員有較強(qiáng)的操作能力和分析能力；另外儀器的耗材和維護(hù)費(fèi)用都很高，導(dǎo)致每個(gè)樣品的檢測(cè)成本一般在200元以上，且儀器方法需對(duì)樣本進(jìn)行依次檢測(cè)，而平均每個(gè)樣本的檢測(cè)時(shí)間均在兩個(gè)小時(shí)以上，甚至需要1天的時(shí)間。新方法雖然具有靈敏、精確的優(yōu)點(diǎn)，但普遍存在著成本昂貴、操作繁瑣、人員要求高、耗費(fèi)時(shí)長(zhǎng)等問(wèn)題，限制了其推廣和應(yīng)用，不利于常規(guī)檢測(cè)，目前主要作為檢測(cè)的參考依據(jù)使用。因此，建立準(zhǔn)確、高效、快速檢測(cè)真菌毒素的方法是目前亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。

免疫化學(xué)分析方法，是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)為基礎(chǔ)建立起來(lái)的特異性高、靈敏度高、成本低、對(duì)操作人員要求低的一類快速分析方法，其對(duì)環(huán)境和儀器要求低，樣品檢測(cè)通量高、速度快，因此適合大量樣品的快速篩查和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。常見(jiàn)的免疫化學(xué)分析方法可以分為酶聯(lián)免疫吸附分析（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）、免疫層析試紙條（immunochromatographic strip，ICA，也稱Lateral-flow colloidal gold-based immunoassay，俗稱膠體金試紙條）、免疫親和柱（Immunoaffinity chromatography，IAC）、化學(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescent enzyme-linked immunosorbent assay， CL-ELISA）以及時(shí)間分辨熒光免疫分析（timed-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）等。其中最常用、最成熟、應(yīng)用最廣的主要是ELISA和膠體金試紙條。ELISA 除了肉眼定性判斷和半定量判斷結(jié)果，還可通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值進(jìn)行定量分析；膠體金試紙條只需將試紙條插入待測(cè)液體，即可在幾分鐘內(nèi)讀取結(jié)果，是最適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的免疫分析方法。

維德維康真菌毒素檢測(cè)解決方案

以黃曲霉毒素M1為例介紹維德維康食品中真菌毒素解決方案：

黃曲霉毒素M1酶聯(lián)免疫試劑盒

將抗原固定到酶標(biāo)板上，并保持其免疫活性?？贵w與酶連接成酶標(biāo)抗體，這種酶標(biāo)抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體按不同的步驟與酶標(biāo)板表面的抗原反應(yīng)。用洗滌的方法使酶標(biāo)板上形成的抗原-抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在酶標(biāo)板上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來(lái)判斷樣品中黃曲霉毒素M1的含量。含量少，顯色深；含量多，則顯色淺。

設(shè)備：酶標(biāo)儀（檢測(cè)波長(zhǎng)450nm，參考波長(zhǎng)630nm）；漩渦振蕩器；微量移液器；計(jì)時(shí)器；離心機(jī)（4000g）。

檢測(cè)步驟：

a.將樣品用去離子水稀釋；

b.將標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品板孔中；

c.在樣品孔中依次加入樣品和酶標(biāo)記物工作液；

d.蓋好蓋板膜，輕輕振蕩，室溫下避光反應(yīng)；

e.倒掉板孔中液體，在每孔加入洗滌工作液，充分洗滌4次；

f.倒掉板孔中液體，將酶標(biāo)板倒置于